电针百会、三阴交对大鼠睡眠剥夺（SD）行为学的实验研究

　　　　　　作者：陈利华 胡幼平 罗荣 陈敏

【摘要】 ［目的］探讨电针对SD大鼠的行为学的影响。［方法］健康SD大鼠30只，随机分为正常对照组（简称正常组）10只，模型对照组（简称模型组）10只，电针加模型组（简称电 针组）10只三组；正常组采用大平台法造模；模型组采用小平台法造模，电针组造模同模型组，给予每日1次的电针治疗。采用旷场实验检测方法，观察针灸的抗睡眠剥夺作用。［结果］电针能明显改变其行为学指标。［结论］电针可以改善其行为学，这种作用可能与电针促进神经内分泌免疫学机制有关。

【关键词】 电针；大鼠睡眠剥夺（SD）；行为学；百会；三阴交

　　Abstract： ［Objective］ To investigate the effects of REMl sleep deprivation （SD） on actions to investigate the efficacy of application of electroacupuncture for treating sleep deprivation.［Methods］Thirty healthy SD rats randomly allocated to three groups （normal control，model （A1），electrotreatment groups）.The rats of model （A1）group and electrotreatment group were induced in male rats by housing them on small platforms overwater，normalcontrol group rats were on big platforms overwater.After electrotreatment for electrotreatment groups，the changes of normal status and Open Field Test were measured with all rats.［Results］Electroacupuncture treatment can improve the actions.［Conclusion］Application of electroacupuncture can produce a fighting effect on sleep deprivation.The effect may be related to promoting the nerval endocrine cytokine of electroacupuncture.

　　Key words：electroacupuncture; rats sleep deprivation; actions;Baihui; San yinjiao

　　睡眠剥夺（sleep deprivation，SD）是指由于某些原因导致的所需睡眠数量被迫减少［1］。本研究通过观察针刺对睡眠剥夺大鼠行为学的影响。探索针刺改善失眠等睡眠障碍患者临床症状的作用机理。

　　1 SD大鼠模型的建立

　　1.1 实验动物

　　健康SpragueDawley（SD）大鼠30只，雌、雄各半，体重200～250g，由成都中医药大学实验动物中心提供。动物饲养环境温度：（20±2）℃；湿度：60％～80％；水温：保持在20℃左右。

　　1.2 主要仪器设备

　　小平台（20个）：根据文献［2］制成30cm×30cm×40cm鼠箱，睡眠剥夺装置为圆柱形，正中立一直径6cm，高8cm的小平台，从箱底注水，使水面离平台约1cm。每天早晚8：30更换鼠箱中的水。上午8∶00～11∶00之间在安静的房间内进行观察记录。将大鼠置于中心方格内，记录大鼠在3min旷场内的活动，彻底清洁敞箱后再进行下１只大鼠的观察。

　　1.3 动物造模

　　采用小平台水环境法，剥夺箱为30cm×30cm×40cm大小的塑料水箱，正中立一直径6cm圆形平台，箱中注满水，水面距平台面约1.0cm。大鼠在平台上可自由进食进水，如果睡眠，会因为肌张力松弛而落入水中，因而造成SD。为排除隔离、限制活动和水环境造成的应激影响，我们采用了大平台水环境法，其平台直径为18.0cm，大鼠在平台上可以睡眠，其他环境与小平台水环境法相同。SD期间持续灯光照射，室内温度控制在18℃～22℃。每天更换箱中的水，水温保持在20℃左右。正常组（大平台组）单独笼养，自然昼夜光照，电针组条件同睡眠剥夺组，共持续9d。结果:健康SpragueDawley（SD）大鼠30只，成功造模28只，实验大鼠在造模过程中死亡两只。其中正常组9只，电针组10只，模型组9只。

　　1.4 实验分组及处理

　　SD动物模型成功28只，按照随机分组的原则，分为正常组（即大平台组）、电针组、模型组。

　　正常对照组（简称正常组）：9只，采用大平台，大鼠在已注水平台上可以自由进食饮水和睡眠；并在电针组治疗时，用与电针组相同方法进行抓放、固定，但不针刺。试验期间持续灯光照射，室温（20±2）℃。
　　模型对照组（简称模型组）：10只，采用小平台水环境法。将大鼠放于已注水的小平台上，大鼠在平台上可自由进食饮水，如果睡眠，会因为肌张力松弛而落入水中。余同正常组。

　　电针加模型组（简称电针组）：9只，从试验第2天开始，于每天上午9∶00针刺针灸组大鼠“百会”、“三阴交”，选用1寸30号毫针，电针，留针20min。穴位定位：根据李忠仁编著的《实验针灸学》的实验动物穴位定位。电针治疗仪：采用G6805I型电针仪（青岛生产）;电针刺激参数：频率100HZ；电压24V；波形：疏密波；强度：以大鼠能安静耐受为度，约为2mA； 疗程：1次/d，共治疗9d。余同模型组。

　　2 电针SD大鼠一般状况的影响

　　模型组与电针组在早期均表现为兴奋性增高，易激惹，对外界的反应性及攻击性增强，但72h后，可见身体明显消瘦、精神萎靡、反应迟钝、警觉力下降等现象。而电针组在72h后大鼠并无身体明显消瘦、精神萎靡、反应迟钝、警觉力下降等现象。正常组全程全部精神活泼、稳定；活动如常；抓取时反抗较剧，咬人；自48h起全部对照动物耳廓、双目和四肢末颜色呈淡粉红色；144～216h，本组鼠毛由正常变为略枯槁、潮湿。

　　3 电针对SD大鼠的旷场实验的影响

　　3.1 指标检测方法

　　各组动物每天按组处理，并于处理后30min放入旷场中，测试其水平得分、垂直得分和中央格停留时间。旷场箱为木质箱，底面为12m 的正方形，划为25个面积相等的小方格，箱高40cm，周壁涂成黑色。测试时，将大鼠置于旷场测试箱底面中心，观察其3min内的行为。观察指标：以大鼠在中央格（即不靠近周壁的9个格子）停留的时间为中央格停留时间（time of staying in center），以大鼠穿越底面的方格数为水平得分（crossing core ），以后肢站立的次数为垂直得分（rearing core）。记录各组动物每天的垂直活动得分、水平活动得分和中央格内停留时间。并观察动物修饰行为和大小便次数。每只动物仅做一次行为测定，每次试验后，清洗旷场周壁及底面，以免上次动物余留的信息影响下次测试结果。

　　3.2 实验结果

　　实验结果见表1、2及图2～4。 表 1 不同时间大鼠在旷场反应中的水平得分（s）（略）表2 不同时间大鼠在旷场反应中的水平得分（s）（略）

　　图1及表1、2所示：正常组与电针组相比较，水平得分比较无意义，P=0.507（P>0.05）；正常组与模型组比较有极显著差异，P=0.001（P<0.01）；电针组与模型组比较有极显著性差异，P=0.006（P<0.01）；电针组治疗后水平得分下降，同正常组的下降趋势基本一致。而模型组则先下降而后直线上升。

　　图2及表3、4所示：正常组与电针组相比较，垂直得分比较无意义，P=0.681（P>0.05）；正常组与模型组比较有极显著差异，P=0.002（P<0.01）；电针组与模型组比较有极显著差异，P=0.001（P<0.05）。电针组治疗后垂直得分下降，同正常组的下降趋势基本一致。而模型组则先下降而后上升，其上升幅度较大。表3 不同时间大鼠在旷场反应中的垂直得分（s）（略）表4 不同时间大鼠在旷场反应中的垂直得分（s）（略）

　　从图3、表5及表6可知，正常组与模型组比较有极显著差异（P<0.01），电针组与模型组比较有极显著差异（P<0.01）。电针组及正常组的中央格停留时间整个变化趋势基本一致，幅度小，走向平稳，表明其变化不明显。而模型组的中央格停留时间呈明显上升变化趋势。表5 不同时间大鼠在旷场反应中的中央格停留时间（s）（略）表6 不同时间大鼠在旷场反应中的中央格停留时间（s）（略）

　　4 讨论

　　4.1 关于SD动物模型的选择

　　睡眠剥夺动物模型是引起失眠较理想的研究睡眠的手段。本研究采用小平台水环境法进行SD表明：平台面积与大鼠体重量之比为1∶1时不会产生SD，故本研究中大平台直径为18.0cm，在实验前后大平台组体重无明显变化，说明其应激水平远远低于SD组。水环境和隔离对动物确实产生一定的应激作用，这从旷场实验得分可知。由旷场实验得知，与正常组相比，大鼠SD后精神行为表现出一定的兴奋性，修饰行为或“洗脸”行为增多。我们知道修饰行为常发生于产生矛盾或害怕的情境中［3］，说明SD环境使大鼠情绪非常紧张恐惧，攻击行为增多。SD时间短，表现为一定的兴奋，72h以后则有抑制趋势。正常组由于一定的应激作用，兴奋性较高，并且没有SD的影响，所以旷场实验得分优于其他各组。由于大鼠SD后兴奋性的提高，随着SD时间的延长，剥夺程度加深。

　　4.2 电针对SD大鼠旷场实验的影响

　　旷场实验（Open Field Test）是目前最常用的一种动物心理实验方法，用来研究新环境中自发活动（Spontaneous Activity）和探究行为（Explore behavior），检验受试动物在新环境下探究行为和适应性。

　　从测试结果可知，正常组动物的水平得分及垂直得分呈下降趋势，表明动物活动性下降。实验中观察到，正常组动物生活相对安逸，又因为旷场测试在白天进行，正是大鼠的相对安静时间，故而动物不爱活动；实验的后期尤其如此；这可能也同其对旷场环境的逐步熟悉有关［4］。但与此同时，正常组动物表现机敏、反应灵活、目光有神、空间识别能力强。模型组动物却不如此，水平得分及垂直得分均有很大的波动，在SD192h时仍相当高，在最后一次测试时仍在增加。此时动物极为疲惫，体力己衰弱而殆尽，行走时表现方向感极差。与此同时，电针组动物则表现较为稳定，波动比较小。

　　中央格停留时间反映动物对环境的认知能力。正常动物会避开空旷环境，迅速离开中央格，沿周边活动。如果对新环境的认知能力差，则停留在中央格的时间就会延长。从我们的测试结果来看，正常组大鼠在中央格的停留时间日益减少；事实上，这组动物在放入旷场实验箱后通常会迅速离开中央地带，行至角落或箱壁下，整理毛发，偶尔站立，少有行走。模型组动物经过长时间SD，对环境的认知能力明显下降，常反复穿越中央地带并在其中逗留，呆在中央格中的时间不断增长。电针组动物的中央格停留时间则有不同程度的下降，提示电针可以改善睡眠剥夺大鼠的空间认知能力。

　　此外，旷场行为测试指标还包括理毛时间（修饰时间）和排便次数。理毛是动物满足的表现；排便多则反映了动物的紧张程度高。由于我们采用改良多平台水环境法造模，接受SD的动物常常水湿毛发，放入旷场中时欲将其毛发舔干而使理毛时间增加，从而对结果产生干扰。本实验中，接受SD的动物虽然与正常动物有同样的进食进水机会，但由于中枢、躯体双重应激的影响，食欲明显下降，尤其是实验后期，进食显著减少，因此，排便次数作为考察指标的准确性特异性也不强。故而我们没有将这两项作为考察药物作用效果的指标。

参考文献

［1］Drummond SP，Brown GG.The effects of total sleep deprivation on cerebral Responses to cognitive performance［J］.Neuropsychopharmacology，2001，25（5）：68.

　　［2］Mendelson W.B，Guthrie R.D，et al.The flowerpot technique of rapid eye movement sleep deprivation［J］.Pharmacol Behave，1974，2：553556.

　　［3］Brady KJ，Brown JW，Thurmond JB.Behavioral and neurochemical effects of dietary tyrosinein young and agedmicefollowing coldswimstress［J］.Pharmacal Biochem Behav，1979，12（5）：667672.

　　［4］SK Kulkarni.Open field test：its status in psychopharmacology ［J］.Ind J Pharmac，1977，9（4）：241246.