HPLC法测定鼻炎康片中马来酸氯苯那敏的含量

【摘要】 ［目的］建立HPLC法测定鼻炎康片中马来酸氯苯那敏的含量。［方法］采用Phenomenex C18 Gemini（250×4.6mm，5u）色谱柱，柱温为室温，以甲醇庚烷磺酸钠冰醋酸混合溶液（60∶40）用三乙胺调节到pH到3.5为流动相;流速为1.0ml·min-1；检测波长：224nm。［结果］ 马来酸氯苯那敏进样量在0.253μg～1.265μg范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.9993），平均回收率为99.50%，RSD=1.6%（n=5）。［结论］方法简便，结果准确，可作为本品质量控制的有效方法。

【关键词】 HPLC; 鼻炎康片; 马来酸氯苯那敏

　　Abstract： ［Objective］ To establish an HPLC method for the quantitative determination of Chlorphenamine Maleate in Biyankang Tablets.［Methods］The determination was performed on Phenomenex C18 column with the mobile phase consisted of methanol mixed solution of sodium heptane sulfonate and glacial acetic acid（60∶40，adjuseted to pH3.5 with triethylaminum） at ambient temperature.The flow rate was 1.0ml·min-1.The detection wavelength was set at 224nm.［Results］The method showed a good linear relationship within the range of Chlorphenamine Maleate 0.509μg～2.545μg （r=0.9993，n=5）.The average recovery was 99.50% with RSD=1.6% （n =5）.［Conclusion］The method is simple and accurate and could be used for quality control of Biyankang Tablets.

　　Key words：HPLC; Biyankang Tablets; Chlorphenamine Maleate

　　鼻炎康片为临床上治疗急慢性鼻炎的常用中成药，由广藿香、苍耳子、鹅不食草、当归、黄芩、马来酸氯苯那敏等多味药组成。目前为止没有报道成品中马来酸氯苯那敏的含量测定方法，为了更有效的控制产品质量，笔者现参照马来酸氯苯那敏含量测定的相关文献资料［12］，建立用高效液相色谱法测定鼻炎康片中马来酸氯苯那敏含量的方法，方法简便，重现性好。

　　1 仪器与试药

　　Waters2695型液相色谱仪，Waters2996二极管阵列检测器，Empower色谱工作站；色谱柱：Phenomenex C18 Gemini（250×4.6mm，5u）；马来酸氯苯那敏对照品（中国药品生物制品检验所，批号100047200305）；甲醇为色谱纯，冰醋酸为优级纯，庚烷磺酸钠为日本进口，水为纯化水。鼻炎康片为市售3批（批号：08034、08076、08092）。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　流动相为甲醇庚烷磺酸钠冰醋酸混合溶液（60∶40）用三乙胺调节到pH到3.5，流速：1.0ml/min，检测波长：224nm。柱温：室温；理论板数按氯苯那敏峰计7500，与周围其他色谱峰分离效果良好。

　　2.2 对照品溶液的制备

　　精密称取已在105℃恒重的马来酸氯苯那敏对照品12.65mg，置50ml量瓶中，加流动相超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

　　精密吸取对照品储备液5ml到25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

　　2.3 样品溶液的制备

　　样品研细，精密称取的样品细粉（约5片量）置100ml容量瓶中，加甲醇50ml，超声15min使马来酸氯苯那敏溶解，放冷并用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密取续滤液50ml，在水浴上蒸干，残渣用氯仿分多次洗涤溶解，定容到100ml量瓶中，滤过，精密取续滤液50ml，在水浴上再蒸干，残渣用甲醇溶解并定容到25ml量瓶，取续滤液作为供试品溶液。

　　2.4 线形关系的考察

　　取对照品溶液，分别进样5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，即得含相当于马来酸氯苯那敏0.253、0.506、0.759、1.012、1.265μg的对照品溶液，测定峰面积，以马来酸氯苯那敏质量为横坐标、氯苯那敏峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，得出回归方程以及线性范围，Y=3.39×106x+589，r=0.9993，马来酸氯苯那敏进样量在0.253μg～1.265μg范围内峰面积与进样量呈良好线性。

　　2.5 进样精密度试验

　　在上述色谱条件下，马来酸氯苯那敏取对照品溶液重复进样6次，记录氯苯那敏峰面积，RSD为0.9%。

　　2.6 重复性试验

　　精密称取同一批号的样品（批号：08076）按照样品测定的方法操作重复操作6次，测得马来酸氯苯那敏平均含量和RSD，结果表明：重复性试验RSD为1.1%，表明本法重现性很好。

　　2.7 加样回收试验

　　精密移取已知含量的样品溶液5份各10ml（浓度同含量测定项下的溶液）分别置25mL量瓶中，每份依次精密加入一定量对照品储备溶液（1ml，1ml，2ml，2ml，4ml），然后用流动相稀释到刻度，照含量测定方法操作，计算回收率见表1。表1 马来酸氯苯那敏加样回收率试验结果（略）

　　2.8 稳定性实验

　　取样品（批号：08076）新配的供试品溶液分别在0，2，4，6，8h进样10μL，测定其中氯苯那敏的峰面积，结果RSD为1.3%，表明供试品溶液在8h稳定。

　　2.9 样品的含量测定

　　取3批样品，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，依上述色谱条件测定含量，分别进样10uL，记录色谱图，按外标法计算其含量，结果见表2及图1。

　　3 讨论

　　3.1 色谱峰的识别

　　马来酸为二元酸，其2级电离常数Ka1和Ka2分别为1.0×10-2和5.5×10-7，对应的pKa分别为2.00和6.26。在通常的流动相pH范围内，马来酸氯苯那敏主要解离为马来酸阴离子和氯苯那敏阳离子，因此，马来酸氯苯那敏会出两色谱峰，考虑到样品中马来酸出峰时间短且容易同样品中杂质混淆干扰，以氯苯那敏峰面积来定量计算。

　　3.2 提取方式的选择

　　由于本品为复方制剂，中药成分很多，提取方法不当很容易干扰测定，马来酸氯苯那敏在水、乙醇或三氯甲烷中均易溶［3］，笔者开始仅用水来超声提取马来酸氯苯那敏，滤过后，进样后发现色谱峰很不理想，主要是成分太复杂，杂质峰太多，特别是后面黄芩苷的强吸收峰，根本无法调整色谱条件，后来参考相关文献，先用甲醇超声提取，先去掉一部分极性小的成分，蒸干甲醇，再去氯仿溶解，去掉极性大的成分，从来达到提取待测成分而除去其他成分的干扰，获得理性的分离效果，可能在这两步提取和滤过过程中容易损失吸附部分待测成分，但只要小心操作很多误差还是可以避免的。

参考文献

　［1］葛庆华.马来酸盐的药物HPLC测定中存在的问题［J］.中国医药工业杂志，1996，27（12）：543545.

　　［2］纪宇.关于马来酸氯苯那敏色谱峰的识别［J］.中国药品标准，2004，5（1）：3131.

　　［3］李玲，郭敏，李莉.HPLC测定苍菊鼻炎胶囊中马来酸氯苯那敏的含量［J］.中成药，2006，28（9）：13961398.