银杏达莫对兔心肌缺血预适应的影响

【摘要】 ［目的］研究银杏达莫对兔心肌缺血预适应的保护作用。［方法］结扎兔左冠状动脉前降支制作心肌缺血预适应模型，随机分为缺血再灌注组、缺血预适应组和银杏达莫组（缺血再灌注+银杏达莫和缺血预适应+银杏达莫）。观察血清心肌酶学变化及血清一氧化氮浓度的变化。［结果］缺血预适应组心肌酶水平与缺血再灌注组比较差异有显著意义（P<0.01）。缺血预适应组血清一氧化氮水平明显提高较缺血再灌注组差异具有统计学意义（P<0.01）。［结论］银杏达莫运用于缺血预适应时可对心肌缺血再灌注损伤有保护作用。

【关键词】 银杏达莫；缺血预适应；心肌缺血再灌注损伤；血清；一氧化氮

　　Abstract：［Objective］To study the protective effects of Egb on myocardial ischemic preconditioning in vivo rabbits.［Methods］Anesthetized rabbits were randomly pided into 4 groups：Myocardial ischemiareperfusion group，myocardial ischemic preconditioning group，Egb group（Myocardial ischemiareperfusion and Egb），so as to observe the myocardial enzyme in the plasma and the levels in serum NO.［Results］Egb and Myocardial ischemic preconditioning could decrease the enzymes of the cardiac muscle，increase the serum NO.Myocardial ischemic preconditioning and Egb could strengthen the role of protecting the ischemic myocardial cells.［Conclusions］Myocardial ischemic preconditioning and Egb can protect myocardial ischemiareperfusion cardiac muscle.

　　Key words： Egb；ischemic preconditioning；myocardial ischemiareperfusion；serum NO

　　研究表明急性心肌梗死前24h内有先兆性心绞痛发作者在某些情况下有助于改善患者的心脏功能及预后［1］。这种经过短暂的缺血刺激使心脏对类似的刺激产生一种内源性的保护作用，称为缺血预适应（Ischemic preconditioning，IP）［2］。是指预先使心肌经历数次短暂缺血（不至造成不可逆的损伤），可使其对随后较长时间的缺血和再灌注造成的损伤产生抵抗作用。IP已经成为现在心血管疾病研究的重点。本次研究对在体兔缺血预适应模型给予银杏达莫干预，探讨其对兔IP的保护作用。

　　1 材料与方法

　　1.1 药物和试剂

　　银杏达莫，由山西普德药业公司提供（批号：国药准字H14023515）。一氧化氮（Nitrous oxide，NO）试剂盒购自南京建成生物工程研究所。肌酸激酶（creatine kinase，CK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）试剂盒为美国杜邦公司产品。

　　1.2 动物

　　健康新西兰大白兔，雌雄不限，共32只，体重（2.81±0.35）kg，由兰州生物制品研究所提供。

　　1.3 实验模型制备及动物分组

　　1.3.1 心肌缺血再灌注损伤模型［3］制备

　　选择健康新西兰大白兔，20%乌拉坦按5ml/kg耳缘静脉麻醉，气管插管，人工呼吸，开胸，暴露心肌，自冠状动脉左前降支（Left anterior descending coronary artery，LAD）0.5cm处穿线环绕动脉，结扎线自一胶管腔内引出结扎LAD，造成急性心肌缺血，通过肉眼观察及心电图改变判断LAD结扎是否成功。LAD结扎40min后剪开穿线使冠状动脉再通形成再灌注，再灌注120min。于LAD阻断前、LAD再通形成再灌注120min二个时相测定血清NO浓度，选定于LAD再通形成再灌注120min时相测定CK和LDH。入选标准：结扎后Ⅱ导联ST段出现弓背向上抬高，T波高耸等表现为缺血成功。剪线后，行再灌注，抬高的ST段出现下降1/2以上为再灌注成功，行再灌注120min。

　　1.3.2 分组与给药

　　大白兔随机分为4组，每组8只，缺血再灌注组（Ⅰ组）静注生理盐水1ml/kg；银杏达莫组（Ⅱ组，缺血再灌注+银杏达莫）于结扎前10min静注银杏达莫30ml（银杏总黄酮10mg/kg，双嘧达莫8mg/kg）；缺血预适应组（Ⅲ组）缓慢静滴生理盐共1ml/kg，结扎LAD支5min后放松套管再灌注5min，再按Ⅰ组方法操作；银杏达莫组（Ⅳ组，缺血预适应+银杏达莫）于结扎前10min静注银杏达莫30mL，再按Ⅲ组方法操作。

　　1.4 检测指标

　　血生化指标 实验结束后抽取各组兔心房血2ml，离心后取上清液，用日本全自动生化分析仪按速率法测定CK，LDH。取已分离血清1ml，由化学比色硝酸还原酶法测定血清NO含量，单位使用μmol/L，以上实验均严格按试剂盒说明操作。

　　1.5 统计学处理

　　应用SPSS10.0软件，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用方差（Analysis of variance，ANOVA）法，各组之间两两比较采用q检验，P<0.05为有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 各组血清心肌酶水平变化比较

　　见表1。表1 各组CK LDH变化比较（略）

　　2.2 各组血清NO浓度变化的比较

　　见表2。表2 各组不同时间兔血清NO浓度比较（略）

　　3 讨论

　　自Murry等发现，如果将心肌缺血时间缩短为5min，然后再灌注5min，反复几次随后再进行长时间的缺血，心肌缺血的范围明显缩小，这种现象就是心肌的IP［4］。并被Lawson等研究证实IP的心脏保护作用表现为缩小梗死面积，保护心肌超微结构，促进心肌功能恢复。而且进一步观察发现梗死缺血预适应表现为早期保护和延迟保护两个时期，早期保护于数分钟出现，持续2～3h，延迟保护则在12～24h之后［56］。缺血预适应并不是通过缺血区侧支循环开放而达到保护作用，至今其内在机制尚未完全阐明。

　　NO是反映内皮细胞功能的比较敏感的指标，其是内皮细胞在切应力、低氧和其他介质作用下，由L精氨酸在一氧化氮合酶（Nitric oxide synthase，NOS）的作用下合成的［7］。可以抑制血小板和中性粒细胞的聚集，并且有消除体内过多的氧自由基的作用。本实验观察到银杏达莫预缺血组的兔血浆中NO含量较缺血再灌注组和单纯预缺血组均有非常明显的提高，证实银杏达莫能够增加再灌注期心肌组织中NO含量，使环磷酸鸟苷升高从而导致血管舒张并抑制血管平滑肌增殖，对心肌缺血再灌注损伤的内皮细胞产生较好的保护作用。
　　
　　银杏达莫注射液是将银杏叶的有效成份（Extract of ginkgo biloba，EGB）加以分离。与适量双嘧达莫（潘生丁）组方而成，其化学成份复杂，根据已有的研究成果推测其作用机制是多方面的。已知EGB中含有大量的酮化合物和萜类内酯。其中，黄酮类化合物不但有超氧化物歧化酶活性，能清除多种自由基，而且其本身还具有明显的抗氧化活性，因而能增强心肌细胞在缺血再灌注状态下的抗损伤能力，促进内皮细胞松弛因子的释放而调节血管舒缩功能［8］；从而持久的扩张冠脉增加冠状动脉血流量，促进侧枝循环。银杏达莫注射液中的萜类内酯则是天然专属的血小板活化因子（Plateletactivating factor，PAF）受体的拮抗剂，它与双嘧达莫协同，可抑制血小板功能，降低血液粘滞性，改善血液流变状况；另外，还可抑制血栓素A2（Raise thromborane A2，TXA2）升高并促进前列腺素（Prostaglandine 2，PGI2）生成，从而调节血管能力，改善组织血供［9］。说明银杏达莫注射液在临床上心血管疾病的防治中可能具有较大的价值，但因中成药所含化学成分复杂，且作用又是通过多途径，多层次实现的，未知领域，还有待进一步的去研究和探索。

参考文献

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　　［2］宗普.人类心肌预适应最新研究进展［J］.国外医学：心血管分册，1996，23（5）：2932.

　　［3］Dhalla Ns，Elmoselhi AB，Hata T，et al.Status of myocardial antioxidants in ischemia reperfusion injury ［J］.Cardiovascular Research，2000，47（3）： 446456.

　　［4］Murry CE，Jennings RB，Reimer KA.Preconditioning with ischemia： a delay of lethal cell injury in ischemic myocardium［J］.Circulation，1986，74（5）： 11241136.

　　［5］Lawson CS，Downey JM.Preconditioning： state of the art myocardial protection［J］.Cardiovascular Research，1993，27（4）：542.

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　　［7］Mehta JL.Endothelium coronary vasodilation，and organic nitrates［J］.The American Heart Journal，1995，129（2）：382391.

　　［8］马建林，毛焕元，周本财.银杏叶片防治冠心病患者体内红细胞脂质过氧化损伤的临床观察［J］.同济医科大学学报，2000，29（1）： 7173.
　
　　［9］王雁，杨义芳.银杏叶的药理作用及其机制的研究进展［J］.中国现代应用药学，2001，18（1）： 36.