三伏灸对过敏性哮喘患者细胞因子分泌的影响

【摘要】 ［目的］通过观察过敏性哮喘缓解期患者的临床症状、血清IgE（免疫球蛋白E）、外周血单个核细胞（PBMC）培养上清液IL4、IL13水平的变化，研究三伏灸对过敏性哮喘患者免疫功能状态的影响和部分作用机制。［方法］选择过敏性哮喘缓解期患者29例随机平分为A组（传统法）、B组（改进法）、C组（非伏天灸）三组，并选10例健康者做对照，分别采用ELISA法测定血清IgE、IL4、IL13水平。［结果］临床疗效治疗后A组有效率为77.8%，B组有效率为90%，C组有效率为40%，A组与B组比较，组间比较无显著差异，A、B组与C组比较，差异显著（P<0.05）；治疗前各组患者的血清IgE、外周血单个核细胞（PBMC）培养上清液IL4、IL13含量与正常对照组比较均具有显著性差异（P<0.01）;治疗后A组、B组IgE、、IL4、IL13均显著降低，与治疗前比较有显著差异（P<0.05），C组则治疗前后差异不显著（P>0.05），A组、B组IgE、IL4、IL13水平与治疗C组相比也降低，有显著差异（P<0.05）。［结论］提示三伏灸对过敏性哮喘的作用优于非伏天灸，三伏灸法能抑制过敏性哮喘患者PBMC培养上清液中的IL4、IL13的分泌，降低血清总IgE的水平，从而阻断IgE介导的Ⅰ型超敏反应，这可能是三伏灸法治疗过敏性哮喘取效的主要机制之一。

【关键词】 三伏灸；过敏性哮喘；IgE；IL4；IL13

　　Abstract：［Objective］ To explore the affecting of moxibustion on allergic asthma immune function and mechanism by observing the serum level of immunoglobulin E （IgE），interleukin4（IL4），interleukin13（IL13）.［Methods］ 30 cases of allergic asthma were distributed randomly and respectively into groups A，B and C，and another 10 healthy subjects were chosen as controls.Serum IgE，IL4，IL13 were measured by ELISA.［Result］ The efficiency of groups A，B，C were 80%、90% and 40% respectively.Serum IgE and IL4，IL13 levels were significantly lower in groups A and B by the treatment（P<0.05），but there was no significant difference in groups C（P>0.05）.There was significant difference between the three groups and controls （P<0.05）.IgE，IL4，IL13 level had significant difference between A and C，B and C （P<0.05）.［Conclusion］ The treatment of allergic asthma by the moxibustion in Dog Days may lower the serum IgE，IL4，IL13 levels，improve lung function，enhance physique，and antiallergic.There is a better therapeutic effect for allergic asthma.

　　Key words： moxibustion；allergic asthma；IgE；IL4；IL13
　　
　　过敏性哮喘（Allergic asthma）是因特异性抗原引起的由IgE介导的I型变态反应性疾病。三伏灸治疗过敏性哮喘临床疗效确切，但目前尚缺乏相关有效的观察指标。本研究在分子、细胞因子水平上，探究三伏灸对过敏性哮喘患者免疫功能的影响，观测三伏灸前后过敏性哮喘患者外周血单个核细胞（PBMC）培养上清中IL4、IL13含量、血清总IgE水平的变化，为阐释针刺治疗过敏性哮喘针灸传统疗法治疗过敏性哮喘的作用机理研究，提供可靠的实验依据，并评价其治疗过敏性哮喘的临床意义。现把研究内容报道如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 研究对象

　　以卫生部药政局《新药（中药）临床研究指导原则》制订的有关诊断、病情程度标准为基础。纳入标准：符合支气管哮喘诊断标准，并通过常见吸入性变应原皮肤试验，找到各种不同的特异性致敏原，以两种以上不同变应原阳性者；患者有明显的过敏史和/或遗传史；血清总IgE水平在正常人均值的两倍以上；患者就诊前1周内未用过皮质类固醇类药物；临床上无严重合并症；按西医诊断标准为轻度和中度的缓解期患者。并排除可造成气喘或呼吸困难的其它疾病患者、妊娠期或哺乳期妇女、合并有心血管、肝、肾和造血系统等严重原发性疾病、精神病患者等及凡不符合纳入标准者。本研究选择2004年6月～2008年9月在我院门诊确诊者，列为研究对象者，共29例，男23例，女16例；年龄15～56岁。哮喘病史3～40年。并选取10例本人和家属均无过敏史的健康成人作为相关指标的正常对照。缓解期的判断标准：经过治疗或未经治疗症状、体征消失，肺功能恢复到急性发作前水平，并维持4周以上。

　　1.2 实验方法

　　将29例患者随机分为3组。取穴：大椎、肺俞（双）。A组（伏灸传统法）：直接将艾柱放在穴位皮肤上，每穴灸3壮，每次灸3穴。灸后用灸疮膏封贴，每日更换，直至灸疮愈合。于每年农历三伏间（约7～8月）进行，连续治疗3年。B组（伏灸改进法）方法：穴位局部先以2%利多卡因皮下麻醉后，再将艾柱放在穴位皮肤上，每穴灸3壮，每次灸3穴。灸后用哮喘膏（自制：炙白芥子、延胡索、甘遂、细辛等共研细末，每次用1/3药面，加姜汁调成膏状，剪取直径5cm左右圆形石棉纸，纸上先匀上适量人工麝香，再将膏药均匀分摊而成。）封贴，每日更换，直至灸疮愈合。于每年农历三伏（约7～8月）间进行，连续治疗3年。C组（非伏天灸）于每年任何季节（7～8月除外）进行治疗，连续治疗3年。正常对照组不作任何处理。

　　1.3 观察指标

　　1.3.1 血样本采集

　　每个患者均于治疗前及第3年施行三伏灸1个月后分别空腹抽取静脉血2ml，每次采取的血样均分成两份，其一加肝素抗凝，加入淋巴细胞分离液，2000rpm离心10min，分离单个核细胞，在1×106/ml细胞浓度下，加入植物血凝集素（PHA）100μg/ml，37℃，5%CO2条件下培养48h，收集上清液用于测定IL4、IL13含量；另一不加抗凝剂，离心，收集血清，用于测定血清IgE。

　　1.3.2 血清IgE和外周血单个核细胞（PBMC）培养上清液IL4、IL13测定

　　外周血单个核细胞（PBMC）培养上清液IL4、IL13采用酶联免疫法（ELISA）检测，血清总IgE水平采用双抗体夹心ELISA法测定。主要试剂：人IL4、IL13ELISA试剂盒（Sigma公司，美国），人IgE酶联试剂盒（购自邦定生物医学公司），FicollUrografin淋巴细胞分离液（上海试剂二厂）。上述测定均按产品所附说明书进行操作。

　　1.4 统计学方法

　　数据处理计量资料用均数±标准误（x±s），计数资料用百分率表示。计量资料两组间用t检验，多组间用F检验，计数资料用x2检验。

　　2 结果

　　2.1 疗效判断标准

　　参照卫生部药政局《新药（中药）临床研究指导原则》评定疗效标准，进行评定。痊愈：症状完全缓解，即使偶有轻度发作不需用药即可缓解；IgE值恢复正常，肺功能明显改善，随访1年未复发。显效：症状基本消失，发作较治疗前明显减轻；IgE值下降明显，肺功能有改善。有效：哮喘症状有所减轻；IgE值有所下降但不明显，肺功能有改善，但不明显。无效：症状无改善，甚至加重，IgE和肺功能无改善或反而加重。

　　2.2 三伏灸法对过敏性哮喘患者临床疗效的观察 见表1。表1 各组临床疗效对比(略)

　　由表1可见，A组有效率为77.8%，B组有效率为90%，C组有效率为40%，A组与B组比较，组间比较无显著差异，说明传统三伏灸法与改进三伏灸法对过敏性哮喘患者的治疗作用无显著差异。A组、B组与C组比较，P均<0.05；组间有显著差异。表明在伏天、非伏天施灸，对过敏性哮喘患者的治疗作用有显著差异。

　　2.3 三伏灸法对过敏性哮喘患者血清IgE水平的影响

　　见表2。表2 各组治疗前后血清IgE水平比较（略）

　　结果显示：过敏性哮喘患者的IgE水平与正常对照组比较具有显著性差异，P均<0.01。治疗后治疗A组、B组血清IgE水平与治疗前比较有显著降低，P值分别<0.01、0.05，与对照组比较，A组无显著差异，而B组仍有一定程度差异，P值<0.05；治疗C组则治疗前后差异不显著P值>0.05，与对照组差异明显（P<0.01）；说明传统三伏灸法与改进三伏灸法对过敏性哮喘患者血清IgE水平有调低趋势，其中以传统三伏灸法作用明显，而非伏天施灸，则对血清IgE水平作用不明显。

　　2.4 三伏灸法对过敏性哮喘患者外周血IL4的影响

　　见表3。表3 各组治疗前后血清IL4水平比较（略）

　　结果显示：过敏性哮喘患者的IL4水平与正常对照组比较具有显著性差异，P均<0.01。三伏灸法施行后，治疗A组、B组血清IL4水平与治疗前比较显著降低，P值均<0.01，与对照组比较，治疗A组、B组均无显著差异，P值>0.05；治疗C组则治疗前后差异不显著P值>0.05，治疗后与对照组差异明显（P<0.01）。表明三伏灸法能降低过敏性哮喘患者血清IL4水平，而非伏天灸法则无此效应。

　　2.5 三伏灸法对过敏性哮喘患者血清IL13的影响，见表4。表4 各组治疗前后血清IL13水平比较（略）

　　结果显示：过敏性哮喘患者的IL13水平与正常对照组比较具有显著性差异，P<0.01。治疗后治疗A组、B组血清IL  13水平与治疗前比较显著降低，P<0.01，治疗C组较治疗前有所降低，但差异不显著，P>0.05；与对照组比较，治疗A组、B组均无显著差异，P>0.05；治疗C组则与对照组比较差异明显（P<0.01）。表明三伏化脓灸法能降低哮喘患者血清IL13水平，而非伏天施行化脓灸则无此效应。

　　3 讨论

　　过敏性哮喘是一类以肺内嗜酸性粒细胞聚集，黏液过度分泌，IgE升高，气道高反应性为特征的疾病。发病过程涉及多种炎症细胞和细胞因子。近年来的研究证实，许多细胞因子在IgE合成中起调节作用。目前认为过敏性哮喘发病主要是TH细胞功能失衡［1］，即Th1/Th3亚群功能失衡，其中Th3功能异常增高致Th3类细胞因子IL4、IL13分泌、活性增高。在众多与哮喘发病有关的细胞因子中，尤以IL4发挥着关键的作用［2］。IL4是活化T细胞（Th3）所分泌的一种B细胞生长因子（BCGFI），特别是能诱导IgE产生细胞的活化和增殖，故又称为IgE增强因子。当IL4水平增高时，诱导B细胞的Ig类别转换，可以增强IgE抗体的产生。IL13作为Th3型细胞因子成员，具有多种生物学功能。通过激活嗜酸粒细胞，减少其凋亡，促进IgE分泌等机制，参与哮喘炎症的维持，诱导气道高反应性及小气道结构重建［34］，是哮喘炎症过程中一个重要的调节因子。这种因子的过量产生能够诱导变态反应的许多共同特征，如气道高反应性、嗜酸性细胞炎症、IgE产生、黏液过度分泌、上皮下纤维化等。由此可见，IL13在哮喘的病理过程中具有负调节作用。研究发现，在肺脏中IL13水平的上升是与哮喘相联系的。我们的资料也提示哮喘组IL4、IL13明显高于对照组，统计学处理P<0.01，差异显著。由此可见，IL4、13在过敏性哮喘的病理过程中具有负调节作用。
　　
　　近年来，针灸治疗哮喘的研究表明［5］，针灸确能调整机体的免疫功能。在体液免疫方面，大多数报道表明，针灸能明显降低IgE等的含量；细胞免疫方面，针灸能提高淋巴细胞增殖率，抑制嗜酸性粒细胞的分化，提高哮喘患者血清干扰素水平。“冬病夏治”是中医传统疗法，因三伏天是自然界阳气最盛，人体腠理开泄，浊气外越之时，伏邪随势由深渐浅，呈浮越之势，故此时治疗最易刺激穴位，利于药物的吸收，促使经络通畅，气血调和，对缓解期疗效较好，并有预防其他季节发病的作用。本研究结果表明，治疗前过敏性哮喘患者PBMC培养上清液中IL4、13水平明显升高，血清总IgE也非常显著增高，这与许多报道相一致。伏天化脓灸治疗后血清IgE、PBMC培养上清液中IL4、13水平显著下降，而非伏天化脓灸患者IgE、IL4、IL13值虽有下降，但变化不显著。其中传统三伏灸与改进三伏灸作用相近，无显著差异。提示三伏灸对过敏性哮喘的作用优于非伏天灸，三伏灸法能抑制过敏性哮喘患者PBMC培养上清液中的IL4、IL13的分泌，降低血清总IgE的水平，从而阻断IgE介导的Ⅰ型超敏反应，这可能是三伏灸法治疗过敏性哮喘取效的主要机制之一。

参考文献

　［1］朱晓萍，杨锡强，符州，等.IL13和IL4在哮喘发病中的作用及相互关系［J］.中华微生物学和免疫学杂志，2004，24（7）：519522.

　　［2］陈巍白细胞介素4在过敏性哮喘中的作用［J］.国外医学·卫生学分册，1997，24（1）：15.

　　［3］习东.IL13在哮喘中的作用［J］.国外医学：免疫学分册，2003，26（4）：217220.

　　［4］徐萌，李建强.白介素13和哮喘发病的研究进展［J］.国际呼吸杂志，2007，27（9）：70370.

　　［5］洪海国.化脓灸对支气管哮喘患者免疫功能的影响［J］.上海针灸杂志，1993，12（2）：59.