补阳还五汤及拆方预处理对MIRI家兔氧化指标及心肌酶的影响

　　　　　　作者：李淑贞 张兰兰 顾宇 杨艳梅 王小宇

【摘要】 观察补阳还五汤及拆方对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。［方法］40只家兔随机分为5组：假手术组、模型组、补阳还五汤组、补气组、活血通络组。分别预处理1周后，结扎左冠状动脉前降支建立心肌缺血再灌注损伤模型。测定血清中肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的含量。［结果］与模型组比较，各用药组血清CK、LDH及MDA含量明显降低（P＜0.01），血清SOD的活性显著升高，且补阳还五汤组作用最明显（P＜0.05）。［结论］补阳还五汤及拆方可清除氧自由基，减轻心肌缺血再灌注损伤，补阳还五汤组的疗效明显优于拆方组。

【关键词】 补阳还五汤；拆方；缺血再灌注；氧化指标；心肌酶

　　 本研究旨在观察补阳还五汤及拆方对MIRI家兔氧化指标、心肌酶的影响，探讨该方对MIRI的保护机制及其配伍规律，从而为临床用药提供可靠的理论依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 药物与试剂

　　补阳还五汤：以《医林改错》原方所载的药味和配方比例，按每钱以3ｇ换算：生黄芪120ｇ，当归6ｇ，赤芍4.5ｇ，地龙、桃仁、红花、川芎各3ｇ，60kg人临床1日剂量。浸泡，煎煮，浓缩成160%的液体。补气液：黄芪120ｇ。浸泡、煎煮，浓缩成120%的液体。活血通络液，即补阳还五汤去黄芪。浸泡、煎煮，稀释成30%的液体。以上药物均购自沧州市同仁堂药店。MDA、SOD、LDH、CK试剂盒均购于南京建成生物制品研究所。
李淑贞，等: 补阳还五汤及拆方预处理对MIRI家兔氧化指标及心肌酶的影响

　　1.2 实验动物

　　健康新西兰大白兔40只，雌雄兼用，体重2～2.5kg，河北省实验动物中心提供，动物合格证号：809093。

　　1.3 实验方法

　　（1）分组与给药：40只家兔，自由饮水进食，饲养于18℃～22℃明暗各12h的清洁级动物实验室内，喂养一周后，随机分为5组，每组8只：假手术组、模型组、补阳还五汤组、补气组、活血通络组。实验开始每天行相应药物灌胃：补阳还五汤组：16g/（kg·d）；补气组：12g/（kg·d）；活血通络组：3g/（kg·d）；模型对照组及假手术组分别给予等量生理盐水灌胃。各组1次/d灌胃，每次用药体积均按10ml/kg计算，连续7d。（2）模型制备：参照张氏方法［1］复制家兔心肌缺血再灌注模型：末次灌胃1h后，经外耳缘静脉注射25%乌拉坦（4ml/kg）麻醉动物，仰卧位固定在兔台上，沿兔的胸部正中线切开皮肤，钝性分离后紧靠胸骨左缘剪断2～4肋软骨，用小开胸器撑开胸腔切口，一方面加压止血，一方面打开手术视野，可见搏动的心脏，剪开心包，用止血钳将左心耳提起，用持针器将小弯针在冠状动脉前降支（LAD）根部（离冠状动脉起始约3～5mm）穿一丝线，深度约2mm，尽量减少对心肌的创伤，稳定15min，放置医用硅胶管（直径2mm）后一起结扎。持续40min后放松结扎线，恢复灌流。结扎后供血区心肌局部青紫，心电图ST段上抬，提示缺血模型复制成功；40min后放松结扎线局部心肌反应性充血，ST段下移，表明再灌注模型复制成功。假手术组胸部切开，仅在冠状动脉下方穿线，而不进行结扎，其他操作同模型对照组。（3）检测指标及方法：a心电图（ECG）的描记，将针型电极插入兔四肢，全实验过程连续观察Ⅱ导联心电图的变化。b生化指标测定实验结束后由颈总动脉抽取血液4ml，4℃、3000r/min离心10min，提取上清液。用SOD试剂盒、CK试剂盒、MDA试剂盒和LDH试剂盒，分别测定血清中相应酶的活性或含量。步骤完全按照试剂盒说明书操作。MDA采用硫代巴比妥酸法（TBA）测定，SOD含量采用黄嘌呤氧化酶法测定。

　　1.4 统计学处理　

　　所有数据均用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较用单因素方差分析和q检验。全部数据采用SPSS12.0统计软件分析。

　　2 结果

　　2.1 各组ECG的变化

　　假手术组ECG在整个实验阶段较平稳，模型组当结扎冠状动脉时可见ST段均有不同程度的弓背上抬，T波高尖，呈急性心肌缺血图形，再灌注即刻ST段抬高较缺血更明显，部分出现室性早搏。而各治疗组在结扎冠状动脉即刻、10min时ECG的变化与模型组无明显差异，但随结扎时间延长及血供的恢复，上抬的ST段明显下降，尤以补阳还五汤组最为显著。

　　2.2 对心肌缺血再灌注兔CK和LDH活性的影响

　　与假手术组比较，模型组家兔结扎冠状动脉40min及再灌注90min后血清CK、LDH含量明显升高（P＜0.01）；经药物预处理后，各治疗组血清CK、LDH含量明显下降，与模型组比较有显著性差异（P＜0.01）；与补阳还五汤组比较，补气组、活血通络组血清CK、LDH含量明显上升（P＜0.05），活血通络组上升幅度最大，但补气组、活血通络组之间比较血清CK、LDH含量无显著性差异（P＞0.05），见表1。表1 各组兔心肌缺血再灌注后血清CK和LDH活性的测定结果（略）

　　与假手术组比较，★★P＜0.01;与模型组比较，**P＜0.01;与补阳还五汤比较，△P＜0.05

　　表2 各组兔血清MDA含量、SOD活性测定结果（略）

　　与假手术组比较，★★P＜0.01;与模型组比较，**P＜0.01，*P＜0.05;与补阳还五汤比较，△P＜0.05

　　2.3 对心肌缺血再灌注兔血清MDA含量、SOD活性的影响

　　与假手术组比较，模型组家兔结扎冠状动脉40min及再灌注90min后血清MDA含量明显升高，SOD活性明显降低（P＜0.01）；经药物预处理后，各治疗组血清MDA含量明显下降，SOD活性明显升高，与模型对照组比较有显著性差异（P＜0.01，P＜0.05）；与补阳还五汤组比较，补气组、活血通络组血清MDA含量明显上升，SOD活性明显降低（P＜0.05），活血通络组尤其显著，但补气组、活血通络组之间比较血清MDA含量及SOD活性无显著性差异（P＞0.05）。

　　3 讨论

　　本实验结果显示，补阳还五汤及拆方均能使缺血再灌注损伤兔的血清CK、LDH、MDA含量明显低于模型组，血清SOD的活性显著高于模型组（P＜0.01），且补阳还五汤总方组疗效优于其拆方补气组和活血通络组（P＜0.05），但补气组、活血通络组之间比较无显著差异。实验表明，补阳还五汤及拆方可通过清除氧自由基、对抗脂质过氧化反应来减轻心肌缺血再灌注损伤，且总方的作用明显优于单纯益气和活血的方法，正应方剂学“整体取性原理”［2］，即“药有个性之特长，方有合群之妙用”，中药和方剂的特性，是分别在药和方的整体水平取定的。各单味药的药性，只存在于药的整体水平；方的功效，存在于方的整体水平，不能归结为方内各药的功效或方内各药的功效的累加。这为今后从整体上进行研究中药方剂的配伍规律提供了一定的借鉴意义。

参考文献