葛藤提取物对地塞米松致大鼠骨质疏松模型的保护作用

　　　　 作者：宋卫国 孙付军 王常春 李贵海

【摘要】 　　目的 通过观察葛藤提取物对地塞米松致骨质疏松大鼠模型的影响，阐述其对骨质疏松的治疗作用机制，为临床应用提供药效学依据。方法 Wistar大鼠按照体重均衡随机分为空白对照组、模型对照组、仙灵骨葆阳性药（270 mg/kg）对照组和葛藤提取物200、100、50 mg/kg剂量组，每组12只。分组后除空白对照组外，其余各组每周2次（周一、四）肌肉注射磷酸地塞米松注射液1.5 mg/kg，空白对照组注射等容量的生理盐水，同时灌胃给予受试药液。连续给药6个月后，观察大鼠一般状况，测定大鼠股骨质量体积比值、股骨力学性能等指标。结果 葛藤提取物明显改善造模大鼠一般状况，增加模型大鼠体重，提高子宫和卵巢系数。三个给药组均明显提高骨组织抗外力作用，明显提高股骨抗外力性能。采集各组大鼠一侧股骨称干重和灰重，计算湿重、干重、灰重与体积的比值，提示不同给药组可不同程度地改善造模引起的骨质疏松表现，三个剂量组均具有统计学差异（P<0.01）。 结论 葛藤提取物对地塞米松致大鼠骨质疏松模型具有明确的治疗作用。

【关键词】 葛藤提取物；骨质疏松症；大鼠；生物力学

　　葛根为豆科植物野葛pueraria lobata(Willd.)ohwi或甘葛藤（粉葛）pueraria thomsonii Benth.的根，始载于《神农本草经》，具有解肌退热、透发麻疹、生津止渴、升阳止泻的作用。葛藤作为葛根的非药用部位，其化学成分及药效学作用国内尚无系统研究。本课题组立足于当地资源的优势，陆续开展了葛藤化学成分、药效学作用的系统评价，前期研究工作证实葛藤和葛根的总黄酮含量相近，主要含有大豆苷（daidziu）、大豆苷元(dadzein)、葛根素(pnerarin)等异黄酮成分〔1～3〕，现代研究已证实这些成分具有治疗骨质疏松(OP)、抗心律失常和抗心脑缺血等生物效应，对于阻止激素水平下降，防治中老年OP和预防心脑血管病具有肯定疗效〔4～6〕。为了更好地验证葛藤提取物的雌激素样作用及改善OP的生物学活性，本文以地塞米松造成大鼠OP模型来模拟老年性OP，观察葛藤提取物对由年龄变化引起OP的作用，并为新药开发提供实验依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 动物、环境与饲料

　　Wistar种雌性大鼠，280～300 g，山东大学实验动物中心提供， 动物合格证号：SCXK（鲁）20030004，合格证编号：0001387。环境：山东省中医药研究院药理实验中心，许可证号：SYXK（鲁）20050052。全价营养鼠饲料，山东省实验动物管理中心提供，合格证号：SCXK（鲁）20040014。

　　1.2 方法

　　1.2.1 药品、试剂与仪器

　　受试药：葛藤提取物：总黄酮61.08%、葛根素22.60%、大豆苷元1.29%、大豆苷19.97%，由山东省千佛山医院药剂科制备，批号：060411。
　　阳性对照药为仙灵骨葆胶囊，成分为淫羊藿、续断、补骨脂、地黄、丹参、知母，功能主治：滋补肝肾，接骨续筋，强身健骨，适用于OP、骨折、骨关节炎、骨无菌性坏死等，批号：061022081，贵州同济堂制药有限公司产品。
　　
　　试剂：地塞米松磷酸钠注射液，规格：1 ml、5 mg，山东鲁抗辰欣药业有限公司产品，批号：061121303。
　　
　　仪器：梅特勒托利多GB303电子天平，梅特勒中国公司；SX512箱式电阻炉、KSW电炉温度控制器，北京永光明医疗仪器厂；YLS7A足趾容积测量仪、YLS16A小动物骨骼强度测定仪，山东省医学科学院设备站产品。

　　1.2.2 分组与给药

　　按照体重均衡、随机分为6组，空白对照组和模型组给予同体积凉开水；阳性药对照组给予仙灵骨葆胶囊，按照成人与大鼠体表面积换算法计算大鼠临床等效量为0.27 g/kg，配制成27 mg/ml的水溶液，以10 ml/kg灌胃，1次/d。葛藤提取物3个剂量组分别定为200、100、50 mg/kg，使用前分别配制成2%、1%、0.5%的水溶液，以10 ml/kg灌胃给药，1次/d。连续灌胃6个月。每周称取体重，并按新体重调整灌胃用量。各组大鼠自由饮水、摄食。

　　1.2.3 模型制备

　　各组大鼠分组后，除空白对照组外，其余各组每周2次（周一、四）肌肉注射磷酸地塞米松注射液1.5 mg/kg，空白对照组注射等容量的生理盐水。

　　1.2.4 测定指标

　　一般状况、体重：每周称取体重1次，观察6个月体重变化及一般状况。脏器标本：充分暴露并剥离取出子宫、卵巢，电子天平称重，计算子宫的脏器指数。脏器指数=（子宫÷体重）×100%。骨骼标本：称重后脱颈椎处死大鼠，完整分离大鼠的左右两侧股骨，剔除所有附着的肌肉和结缔组织，用生理盐水浸泡的湿纱布包裹密封，-20℃保存，分别测定股骨的湿重、体积、生物力学性能。力学测定后收集残骨200℃烘干8 h，称取干重，马弗炉800℃灰化后称取灰重，分别计算湿重、干重、灰重与体积的比值。

　　1.3 统计学处理

　　所有实验数据以x±s表示，用SPSS11.0进行t检验。

　　2 结果

　　2.1 葛藤提取物对地塞米松OP模型大鼠体重及脏器系数的影响

　　见表1。结果提示给予地塞米松1.5 mg/kg肌肉注射，给药期间大鼠体重逐渐低于空白对照组，一般状况与空白对照组比较也存在明显差异，出现弓背、少动、竖毛、进食量下降等表现。至给药6个月后，模型组体重明显下降，与空白对照组比较具有显著性差异（P＜0.01）。葛藤提取物对造模引起的大鼠体重降低和一般状况的变化具有明显的改善作用，其中中剂量组与模型组比较具有统计学差异（P＜0.05）。表1 葛藤提取物对地塞米松OP模型大鼠体重及脏器系数的影响（略）
　　
　　给予地塞米松造模后，模型组大鼠子宫系数明显低于空白对照组（P＜0.01），葛藤提取物3个剂量均明显增加子宫系数（P＜0.01），其中高剂量组影响最为明显，中、低剂量作用相当，对卵巢系数的影响以中剂量最为明显（P＜0.01），其他两个剂量组亦存在显著性差异（P＜0.01）。

　　2.2 葛藤提取物对地塞米松OP模型大鼠骨质量、体积比值及骨生物力学的影响

　　见表2。模型组湿重/体积、干重/体积、灰重/体积比值均明显降低，与空白对照组比较差异极显著（P<0.01），提示造模明显降低大鼠股骨的钙磷含量，减轻其骨密度。仙灵骨葆组明显增加模型大鼠湿重与体积比值，但对干重和灰重与体积比值影响不明显。葛藤提取物不同给药组不同程度提高湿重、干重、灰重与体积的比值（P＜0.01），其中中剂量作用最显著，同时作用强于仙灵骨葆对照组。分离大鼠股骨称取湿重后测定股骨生物力学性能，结果提示模型组大鼠股骨抗外力作用较空白组明显下降（P<0.01），葛藤提取物不同剂量均明显提高骨组织抗外力作用，其中以中剂量作用最为明显，与模型组比较具有显著性差异（P<0.01）。表2 葛藤提取物对地塞米松OP模型大鼠骨质量（g）、体积（ml）比值及骨生物力学的影响（略）

　　3 讨论
　　
　　本研究在药学研究的基础上，结合OP发病学基础，认为在骨代谢疾病中，骨密度和钙含量是其中最重要的部分〔7〕，但多个影响因素的综合作用导致该病变。因此在本研究中，选择了应用葛藤提取物治疗地塞米松致大鼠OP模型的观察。
　　
　　连续给药6个月后，分别观察各组大鼠所考察指标，提示葛藤提取物明显改善造模大鼠一般状况，明显增加模型大鼠体重。对子宫和卵巢系数的影响3个剂量均具有明显的统计学差异。3个给药组均明显提高骨组织抗外力作用，明显提高股骨抗外力性能。采集各组大鼠一侧股骨干重和灰重，计算湿重、干重、灰重和体积的比值，提示不同给药组不同程度改善造模引起的OP表现，具有显著差异。综合整个实验结果分析认为，葛藤提取物具有明显的干预和治疗OP的药效学作用。

参考文献

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　　4 何惟胜.葛根及其提取物治疗心脑血管疾病药理和临床研究进展〔J〕.时珍国医国药，2001；12（5）：5862.

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