作者：闫艳 陈建芳 董文杰 高静
【摘要】 目的：观察3种中草药白头翁、仙鹤草、黄连体外抗阴道毛滴虫作用。方法：采用不同浓度仙鹤草、黄连、白头翁水提液进行体外抗滴虫试验，记录滴虫死亡率。结果：三种药物均具有杀虫作用，白头翁杀虫作用最强。结论：以上三种中草药可用于抗滴虫治疗。
【关键词】 阴道毛滴虫；白头翁；仙鹤草；黄连
Abstract Objective: To study the trichomonacidal effect of Pulsatilla chinensis， Hairyvein agrimonia herb and Coptis root. Methods: Trichomonacidal effect of chinese herb was assessed using various concentrations of drug against T.v in vitro. The moritality of Trichomonas vaginalis was noted. Results: Three Chinese herbs exhibited effective action on Trichomonas vaginalis. Pulsatilla chinensis has most powerful effect of destroying parasites. Conclusion: It is suggested that the three herbs can serve as new trichomonacidal drugs in clinical treatment.
Key words Trichomonas vaginalis; Pulsatilla chinensis; Hairyvein agrimonia herb; Coptis root.
滴虫病是世界范围内发病率较高的性传播疾病，可引起多种并发症。阴道毛滴虫是滴虫病的病原体。目前，临床西医治疗的首选药物是灭滴灵(甲硝咪唑)，但该药毒性及不良反应较大，动物实验证实有一定的致癌性[1-3]。且抗甲硝唑的虫株逐渐增加，使甲硝唑的使用受到限制，因而寻找新的高效、低毒的替代药物受到医学界的普遍关注。本研究选用中草药仙鹤草、黄连、白头翁进行体外抗滴虫实验，为寻找新的抗滴虫药物奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
实验虫株：从临床分离致病虫株，无菌培养，液氮保存。复苏后接种于肝汤培养基。37 ℃无菌培养，24 h传代一次。药物制备：分别将中草药仙鹤草、黄连、白头翁各20 g，置400 mL蒸馏水中，浸泡过夜，煮沸30 min，收集药液，再加水100 mL，继续煮沸30 min，取出药液并与首次药液混合，过滤除去残渣，加热浓缩至40mL，药液生药浓度为500 mg/mL。2 000 r/min离心10 min，取上清，置无菌瓶中，4 ℃保存。培养基：15 %肝汤培养基，8磅20 min高压灭菌后4 ℃保存，用前加12 %灭活小牛血清、青霉素和链霉素各100 U/mL，分装培养管。
1.2 方法
根据预试，选择四个药物浓度组，仙鹤草的药物浓度分别为20 mg/mL、10 mg/mL、5 mg/mL、2.5 mg/mL，黄连的药物浓度为10 mg/mL、5 mg/mL、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL，白头翁药物浓度分别为5 mg/mL、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL，同时设无药对照组。取培养24 h滴虫，离心沉淀虫体，去上清，加入少量新鲜培养基，混匀后用血细胞计数器计数，将滴虫等量加入各实验管，每管虫体浓度约为1×105个/mL，置37 ℃温箱培养。加药后4 h、8 h、12 h、24 h分别吸取各管虫液滴片镜检，用高倍镜观察虫体活动状态，记录虫体死亡率。加药24 h后，对死亡率为100.0 %的实验管进行转种，37 ℃继续培养24 h，观察是否有滴虫存活。所有实验重复3次。数据分析采用SPSS统计软件分析。
2 结果
2.1 白头翁水提液体外抗阴道毛滴虫作用
由表1可见不同浓度白头翁，作用不同时间杀灭滴虫效果，同一作用时间，各用药组的滴虫死亡率均高于对照组（P＜0.01），且虫体死亡率随药物浓度增加而增高（P＜0.01）；同一药物浓度，随着作用时间延长，滴虫死亡率也逐渐增高（P＜0.05）。药物作用24 h后，5 mg/mL、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL浓度组滴虫全部死亡。3组虫液经转种培养24 h，均未见滴虫生长。表1 白头翁水提液体外杀滴虫效果（略）
2.2 仙鹤草水提液体外抗阴道毛滴虫作用
由表2可见不同浓度仙鹤草，作用不同时间杀灭滴虫效果，2.5 mg/mL药物组用药8 h，未见虫体死亡，其余各组同一作用时间，各用药组的滴虫死亡率均高于对照组（P＜0.01），且虫体死亡率随药物浓度增加而增高（P＜0.01）；同一药物浓度，随着作用时间延长，滴虫死亡率也逐渐增高（P＜0.05）。药物作用24 h后，20 mg/mL浓度组滴虫全部死亡。经转种培养24 h，未见滴虫生长。表2 仙鹤草水提液体外杀滴虫效果（略）
2.3 黄连水提液体外抗阴道毛滴虫作用
由表3可见不同浓度黄连，作用不同时间杀灭滴虫效果，同一作用时间，各用药组的滴虫死亡率均高于对照组（P＜0.01），且虫体死亡率随药物浓度增加而增高（P＜0.01）；同一药物浓度，随着作用时间延长，滴虫死亡率也逐渐增高（P＜0.05）。药物作用24 h后，10 mg/mL、5 mg/mL浓度组滴虫全部死亡。经转种培养24 h，均未见滴虫生长。表3 黄连水提液体外杀滴虫效果（略 ）
2.4 三种中药杀虫作用比较
由表1、2、3可见，同一作用时间，相同药物浓度不同药物的杀虫作用不同（P＜0.01），例如2.5 mg/mL药物作用24 h，白头翁组滴虫死亡率为100.0 %，而仙鹤草组为10.6 %，黄连组为44.3 %。
3 讨论
实验结果表明，三种中草药均具有杀滴虫作用。随着药物浓度增加，作用时间延长，滴虫死亡率增高，即杀虫效果和药物浓度及作用时间成正相关。白头翁用药24 h，1.25 mg/mL、2.5 mg/mL、5 mg/mL组滴虫死亡率达到100.0 %，3组经转种观察均无滴虫生长。故认为白头翁水提液作用24 h杀灭滴虫的最低有效浓度为1.25 mg/mL。仙鹤草用药后，低浓度组不能有效杀灭滴虫，当药物浓度达到20 mg/mL，作用24 h，滴虫全部死亡。经转种后未见滴虫生长。认为其24 h杀灭滴虫的最低有效浓度为20 mg/mL。黄连用药24 h，10 mg/mL、5 mg/mL组滴虫死亡率达到100.0 %，经转种后未见滴虫生长。认为其24 h杀灭滴虫的最低有效浓度为10 mg/mL。从中可以看出3种药物中白头翁的杀虫最低有效浓度最低。
3种药物在相同药物浓度下，相同作用时间，药物杀虫作用不同，2.5 mg/mL药物作用24 h，白头翁组滴虫死亡率为100.0 %，而仙鹤草组为10.6 %，黄连组为44.3 %。可见白头翁杀虫作用最强，黄连次之，仙鹤草最弱。白头翁杀虫作用高于仙鹤草的结果与郭永和等[4]学者报道相近。
白头翁具有清热解毒、凉血止痢、燥湿杀虫的功效，临床常用于治疗细菌性痢疾、阿米巴痢疾及妇科阴道炎等，近年研究表明，白头翁还具有抗癌和杀精子作用[5-6]。本实验采用最高剂量为5 mg/mL，作用8 h后，滴虫全部被杀灭。仙鹤草具有收敛止血、截疟、止痢、解毒的功效。本研究发现虽然仙鹤草对滴虫有杀灭作用较其他两种中药弱，但提高用药浓度，亦可达到杀灭虫体的作用。黄连性寒，具有清热燥湿，泻火解毒的功效。有临床报道采用黄连治疗滴虫性阴道炎，效果较好。本实验发现，1.25 mg/mL～10 mg/mL浓度黄连均对滴虫有杀虫作用，为指导临床用药提供理论依据。
白头翁、仙鹤草、黄连为常见中草药，我国资源丰富，成本低廉。本次实验为利用中草药研制新的外用兼口服的高效低毒的抗滴虫药物提供依据。
参考文献
[1] Petrin D，Delgaty K，Bhatt R， et al.Clinical and microbiological aspects of Trichomonas vaginalis [J]. Clin Microbiol Rev，1998，11:300-317.
[2] Narcisi EM， Secor WE.In vitro effect of tinidazole and furazolidone on metronidazole-resistant Trichomonas vaginalis [J]. Antimicrob Agents Chemother，1996，40:1121-1125.
[3] Goldman P.Metronidazole:proven benefit and potential risks[J]. Jones Hopkins Med J，1980，147:1-9.
[4] 郭永和，刘永春，秦剑.11种中草药体外抗阴道毛滴虫[J].时珍国医国药，2000，11（4）：297-298.
[5] 蔡鹰，唐永明，梁秉文.白头翁体外抗肿瘤实验研究[J].中草药，1999，30(6)：441.
[6] 慕慧，杜俊杰.白头翁皂甘体外杀精效果研究[J].西北药学杂志，1996，11(3)：119.