作者：居红格 沈淑萍 耿虹 王欣欣
【摘要】 目的:研究P16、P53、PCNA在膀胱癌中表达及其意义。方法:应用免疫组化S-P法检查52例膀胱癌组织中P53、P16、PCNA表达水平。结果:52例膀胱移行细胞癌中P16、P53、PCNA阳性表达率分别为42.3 %、57.6 %、59.6 %，P16阳性率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级肿瘤中分别为58.8 %、38.5 %和22.2 %，P53阳性率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级肿瘤中分别为41.2 %、57.7 %和88.9 %，PCNA阳性率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级肿瘤中分别为17.3 %、30.8 %和66.7 %；随着膀胱癌病理分级上升，P16表达阳性率逐渐下降，P53和PCNA阳性率逐渐上升。结论:P16、P53、PCNA的免疫组化检测具有评估膀胱癌预后的价值。
【关键词】 P16；P53；PCNA；膀胱肿瘤；免疫组织化学
Abstract Objective: To study the expression and significance of P16， P53 and PCNA in bladder carcinoma. Methods: The immunohisto-chemical staining method was used to evaluate the positivity of P16， P53 ， PCNA 2 in 52 cases of bladder carcinoma. Results: Of 52 cases， P16 was positive in 22 (42.3 %)， P53 was positive in 30 (57.6 %)and PCNA positive in 31 (59.6 %). P16 positivity rate in grade I， Ⅱand Ⅲtumors was 58.8 %， 38.5 % and 22.2 % respectively; The P53 positivity rate in grade Ⅰ， Ⅱand Ⅲ tumors was 41.2 % ，57.7 % and 88.9 %，respectively; The PCNA positivity rate in grade Ⅰ， Ⅱand Ⅲtumors was17.3 % ，30.8 % and 66.7 % respectively. P16 positivity rate was significantly lower in the patients poorly differentiated， but P53 and PCNA positivity rate was significantly higher in the patients poorly differentiated. Conclusion: Immunohisto-chemecal analysis of P16， P53 and PCNA is of some value in evaluating prognosis of bladder cancer.
Key words P16; P53; PCNA; Bladder carcinoma; Immunohist-chemistry
膀胱癌是泌尿系最常见的恶性肿瘤，早期做出正确的诊断对疾病的治疗与预后有重要的临床意义。膀胱癌生物学标记作为膀胱癌的早期诊断、监测以及预后评估的有效手段正受到越来越多的关注。单个癌基因蛋白产物或抗癌基因蛋白产物与膀胱癌发生的相关性研究已有很多报道，而对于同一膀胱癌标本多个癌基因蛋白产物或抗癌基因蛋白产物表达规律的研究报道较少。我们用免疫组化方法检测膀胱癌中P16、P53、PCNA的表达水平，以探讨它们的表达与膀胱癌生物学行为的关系。
1 材料与方法
1.1 材料
包头医学院第一附属医院2003年1月至2007年1月间手术切除的膀胱移行细胞癌石蜡包埋组织块标本69例，其中男29例，女23例，年龄33～80岁，平均55.5岁。本组患者在外科手术之前均未作其他治疗。另取5例正常膀胱黏膜为对照组。全部标本均经10 %福尔马林常规固定，石蜡包埋，作4 μm厚连续切片，分别作HE染色和P16、P53、PCNA免疫组化染色。病理分级按WHO标准:Ⅰ级17例，Ⅱ级26例，Ⅲ级9例。
1.2 方法
P16、P53、PCNA免疫组化染色采用S-P法，染色步骤按说明书进行。所有试剂盒均为福州迈新生物技术有限公司产品。
1.3 染色结果判定
P16、P53、PCNA染色阳性细胞表现为细胞核呈棕褐色，轮廓清楚。
2 结果
52例膀胱癌中有22例P16蛋白表达阳性（42.3 %)，30例P53蛋白表达阳性（57.6 %)，31例PCNA蛋白表达阳性（59.6 %)。对照组膀胱组织中P16、P53和PCNA的表达为100.0 %，0.0 %，0.0 %。P16蛋白在正常膀胱组织中的阳性表达率明显高于膀胱癌组织中的阳性率，两者之间差异有统计学意义（P＜0.01)。P53和PCNA蛋白在正常膀胱组织中的阳性表达率明显低于膀胱癌组织中的阳性率，两者之间差异均有统计学意义（P＜0.01)。随着膀胱癌病理分级上升，P16表达阳性率逐渐下降，P53和PCNA阳性率逐渐上升。P16、P53和PCNA在不同级别的膀胱癌中的表达见表1。表1 P16、P53和PCNA在不同级别的膀胱癌中的表达（略）
3 讨论
抑癌基因是细胞的正常基因，它们具有抑制细胞生长和肿瘤形成的功能，当一对等位抑癌基因全部丢失或失活时，细胞就可以发生恶变。P53基因位于第17号染色体的短臂上，由11个外显子和10个内含子组成，正常体细胞P53基因为编码53 kD的磷酸结合核蛋白，后者又称为野生型P53蛋白。野生型P53基因是抑癌基因，野生型P53蛋白通过影响基因转录，干扰DNA的起始，促进细胞的终末分化程序化死亡而发挥其抑制细胞增殖、转化，进而阻止细胞癌变。而P53基因突变产物即突变型P53，不仅失去了正常的抑癌作用，而且还有促进细胞恶性转化的作用，它的积聚与膀胱癌的分级以及肿瘤的增殖和进展密切相关。野生型P53蛋白半衰期仅6～20 min，一般免疫组化方法难以检测出来，突变型P53蛋白半衰期较长，常在细胞核内聚积，因此，用免疫组化方法检测到的P53蛋白均为突变型P53蛋白[1]。Carlos等[2]用免疫组化法研究42例膀胱癌，结果发现26例标本中有P53蛋白的高表达。有研究表明P53蛋白阳性表达与膀胱癌生物学行为关系密切，而且随着肿瘤恶性程度的上升，P53表达阳性率也逐渐上升[3-6]。本实验研究发现，正常膀胱黏膜中P53蛋白为阴性;膀胱癌P53蛋白阳性率为57.6 %，与国内外报道相似（21.2 %～60 %)。
p16基因是一种参与细胞周期调控的抑癌基因。它位于9号染色体短臂21区（9p21)上，由3个外显子和2个内含子组成。p16抑癌基因的编码产物P16蛋白直接抑制细胞周期素依赖性激酶4（CDK4)的活性，对细胞增殖起负调节作用。CDKS必须在细胞周期中不同时期被激活或失活，细胞才能进行正常分裂，而CDKS只有与周期蛋白（cyclins)结合后才能被激活。P16蛋白为CDKS的抑制蛋白，与cyclinD竞争结合CDK4，当P16蛋白与CDK4结合后，CDK4/cyclinD复合物的活化作用受到抑制，从而阻止细胞由G1期进入S期进行DNA合成[7]。P16表达的缺失会导致对CDKS的抑制作用丧失，进而导致细胞非正常增生。Kamb等[8]研究表明P16基因的突变和缺失与多种恶性肿瘤关系密切，其中包括膀胱癌。本次研究结果也与报道一致。
PCNA是一种与细胞周期相关的36 000蛋白，是从细胞核内分离纯化的一种多肽链，能与DNA多聚酶辅助蛋白结合，是细胞核内合成DNA所必需的一种核蛋白，参与细胞DNA的复制，其表达水平与肿瘤细胞增值殖有关。本组膀胱癌中PCNA阳性率59.6 %，PCNA过表达对预后提供有价值的信息。
综上所述，在膀胱癌中，P53、P16、PCNA的免疫组化检测可作为评估膀胱癌预后的标志物，而多种癌基因异常表达作为膀胱癌预后的评价指标更有价值。
参考文献
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