作者：李静 吴涤 杨艳芳 关明杰 王琨 杨国安
【摘要】 目的：探讨谷胱甘肽s转移酶theta 1基因（the glutathione S-transferase theta 1 gene，GSTT1)多态性与新生儿低出生体重的关系。方法：采用病例对照研究方法，收集母亲和新生儿资料，用等位基因特异性PCR方法分析母亲GSTT1基因型，采用Logistic回归法分析母亲GSTT1基因型与新生儿出生体重的关系。结果：调整主要混杂因素前后，GSTT1缺失基因型对低出生体重影响未显示显著相关性（OR=1.357， 95 % CI 0.695～2.646;OR=2.047， 95 % CI 0.762～2.854）。结论：母亲 GSTT1基因多态性与低出生体重无相关性。
【关键词】 谷胱甘肽s转移酶；多态性；基因；低出生体重
Abstract Objective: To evaluate the association of genetic polymorophisms of the glutathione S-transferase thetal gene (GSTT1) in mother with low birth weight in neonates. Methods: The case-control study method was used， data of mothers and infants were collected. Allele specific PCR method was applied to examine GSTT1 polymorphisms and logistic regression was used to analyze the association of gentic polymorphisms of GSTT1 gene in mother with low birth weight in newborns. Results: Before and after adjustment for environmental covariates， no significant correlation was found between polymorphisms of GSTT1 and low birth weight (OR = 1.357， 95% CI 0.695～2.646， OR = 2.047， 95% CI 0.762～2.854 respectively). Conclusion: There is no significant correlation between genetic polymorphisms of GSTT1 gene in mother and low birth weight in newborns.
Key words Glutathiones-transferase; Polymorphism; Gene; Low birth weight
低出生体重是新生儿死亡的主要因素之一 ，中国低出生体重儿发生率为活产婴儿的 5.87 %[1]。低出生体重的发生存在很大的个体差异，但导致这些差异的因素知之甚少。许多环境因素被证明与低出生体重有关，但这些环境因素仅能解释极小的一部分差异。各种预防措施（包括对孕妇的社会支持、产前保健、健康教育）的应用收效甚微[2-3]。大量证据表明低出生体重的发生是由遗传和环境因素共同作用的结果。以往的研究大部分集中在社会环境和临床因素，而遗传因素导致低出生体重的病理生理机制研究甚少。最近研究表明：低出生体重在美国黑种、白种人群都有明显的家族聚集性[3]。.这种多次分娩低体重儿的倾向性归于遗传和环境因素[4]。为探讨中国人群中低出生体重的病理发生机制，我们采用病例对照研究方法，探讨母亲GSTT1基因多态性与低出生体重的相关性。
1 对象与方法
1.1 研究对象
调查2003-2006年在包钢三医院就诊的孕妇及其新生儿，其中低出生体重儿57名，正常对照儿108名。低出生体重儿的入选标准：（1）孕周＞28周 ，体重＜2 500g;（2）正常分娩 ，剔除意外情况引起的早产儿;（3）剔除双胎或多胎、先天畸形儿。正常对照儿入选标准：选择与低出生体重儿同一医院出生的孕周≥28周、体重≥2 500g、出生时间相差 ＜ 7 d、单胎正常活产婴儿。
1.2 调查内容与方法
1.2.1 问卷调查
采用统一问卷调查表，由经培训的调查员对每个孕妇进行逐一询问，获得详细人口统计资料，包括：一般情况，疾病史、健康状况、职业史、吸烟饮酒史、饮食习惯、月经和生育史。
1.2.2 新生儿调查
根据产房病例记录了解新生儿出生时状况，包括孕周、新生儿性别、出生体重等。
1.2.3 血样收集及DNA提取
用EDTA抗凝管经无菌操作取母亲外周血2 mL， 4 ℃保存， 24 h内按标准法提取基因组DNA。
1.2.4 基因型检测
GSTT1基因的遗传多态性为大片段基因缺失，其PCR扩增引物5′-TTCCTTACTGGTCCTCACATCTC-3′和5′- TCACCGGATCATGGCCAGCA-3′反应体系同时加入CYP1A1基因同时扩增，产生320 bp基因片段为PCR反应的阳性对照，其引物5′-GCTCCACTCACTTGACACTTCTG-3′和5′-CAGCTGCATTTGGAAGTGCT-3′（引物上海生物工程公司合成），反应体系：12.5 μL PCR反应体系中含有10×Buffer （Mg2 + 15 mmol/L)1.25 μL， dNTP （0.2 mmol/L)0.25 μL，上游引物 （5 μmol/L)0.1 μL，下游引物 （5 μmol/L)0.1 μL，基因组 DNA 2.0 μL， Taq DNA聚合酶（2 U/μL)0.5 μL，灭菌双蒸水 8.3 μL）。PCR反应条件为94 ℃变性5 min，94 ℃ 45 s，56 ℃ 45 s，72 ℃ 60 s，扩增35个循环，最后72 ℃延伸7 min。PCR产物用2 %的琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色（Taq DNA 聚合酶、dNTP Mixture、Marker购自大连TaKaRa宝生物公司，琼脂糖等试剂购自上海生物工程公司）。GSTT1存在基因型个体扩增出480 bp和320 bp两个片段，而GSTT1缺失型个体仅显示出一条320 bp片段。
1.3 统计学分析
用SPSS11.0统计软件进行统计分析。根据等位基因的频率，用χ2检验对GSTT1基因型分布进行遗传平衡检验。用Logistic回归法分析母亲GSTT基因型与新生儿出生体重的关系，并调整主要混杂因素。
2 结果
2.1 研究对象一般特征
调查研究对象包括57名病例组和108名对照组的孕妇和她们的新生儿。研究对象一般特征见表1、表2。病例组和对照组T检验结果显示：母亲收缩压、舒张压、心率、月经首龄、分娩孕周、睡眠时间差异存在显著性，P值均＜0.05。 表1 研究对象一般特征（略）表2 研究对象一般特征（略）
2.2 GSTT1基因型分析结果
母亲的GSTT1基因型分布见表3。经χ2检验符合Hardy-Weinberg平衡（χ2=0.173，P＞0.05）。表3 母亲GSTT1基因型分布情况（略）
2.3 基因多态性与低出生体重关系
单因素分析，GSTT1缺失基因型与存在基因型相比未增加低出生体重发生的危险性 （OR=1.357， 95 % CI0.695～2.646，P=0.335)，Logistic多因素分析，调整影响出生体重的影响因素包括：身高、体重、文化程度、健康状况、收缩压、舒张压、孕前体重、分娩孕周、情绪、失眠、多梦、紧张、使用计算机时间、看电视时间及家人关照程度后，仍未显示GSTT1缺失基因型可增加低出生体重的危险性（OR=2.047， 95 % CI0.762～2.854，P=0.107)。结果见表4。表4 母亲GSTT1基因多态性与低出生体重的关系分析（略）
3 讨论
分娩代表胎儿在宫内生长发育的终点，它受母亲、胎盘、胎儿和一系列生物和环境因素的影响。以往研究主要集中在社会环境或临床因素，对低出生体重的遗传影响因素研究相对较少。有证据表明，出生体重受遗传和环境因素的影响。在同胞之间出生体重的相关系数为0.36～0.62（中位数约为0.5）[3]。有人观察到低出生体重存在着代与代之间的遗传，说明遗传因素在低出生体重的发生中起一定作用。
谷胱甘肽转硫酶（GST）是一组PhaseⅡ主要的解毒酶，具有保护细胞免受亲电子细胞毒物质和致畸物影响的作用，基因缺失可导致其解毒功能的损失，进而增加了个体对许多疾病的易感性[5-6]。可溶性GST家族为二聚体酶，它催化谷胱甘肽与大量的亲电子物质结合，进而脱毒，并协助排出体外。GSTT1基因位于22q11.2，由5个外显子组成[7]。大量证据表明GST酶的表达水平是决定细胞对有毒化学物质敏感性的决定因素。在人体内，GSTT基因的表达水平存在显著的个体差异，人的GSTT1蛋白的不表达可导致膀胱癌、结肠癌、皮肤癌和肺癌的易感性增加[5]。
Wang等[8]研究发现同时具有CYPIA1 Aa/aa基因型和GSTT1缺失基因型的母亲，在怀孕期间吸烟，可显著增加分娩低体重儿的危险性。陈大方等[9]研究发现具有芳香族暴露史的妇女，其GSTT1基因多态性与新生儿出生体重无显著相关性，但发现同时具有GSTT1缺失基因型与EPHX1 His139His纯合基因型新生儿可显著降低其出生体重。原因可能是胎儿GSTT1缺失基因型造成GSTT1酶不表达因而影响胎儿的生长导致低体重。陈大方等[9]在另一项研究中显示GSTT1缺失基因型与新生儿出生身长不相关，但GSTT1缺失基因与MSPI杂合子/突变纯合子基因型这一组合可显著降低新生儿出生身长。我们研究PhaseⅡ基因GSTT1 的多态性对新生儿出生体重的影响。在调整了混杂因素前后，GSTT1缺失基因型与存在基因型比较，均未见导致增加低出生体重的危险性。这一结果与上述的研究结果相一致。因收集低出生体重样本困难，我们收集的病例样本数量较少，可能影响分析结果，今后将进一步扩大样本量，进一步探讨两者关系，及基因与环境的交互作用对低出生体重的影响，为低出生体重发生的病理机制提供科学依据。
参考文献
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