【摘要】 目的：检测生长激素1基因单核苷酸多态性rs2665802T/A与食管癌的关系。方法：应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法对77名食管癌患者和461名正常对照进行基因分型，并用非条件性Logistic回归分析rs2665802与食管癌发病的关联性。结果：总体来说，rs2665802对食管癌的发病没有影响，然而，在身体质量指数（BMI）低于24.9 kg/m2的人群中，基因型TA和AA可降低食管癌的发病风险。结论：在BMI低于24.9 kg/m2人群中，rs2665802与食管癌发病相关联。
【关键词】 食管癌；生长激素；单核苷酸多态性
Abstract Objective: To investigate the relationship between SNP rs2665802 in the growth hormone 1 gene and the risk of esophageal cancer. Methods: SNP rs2665802 was genotyped among 77 cases of esophageal cancer and 461 normal controls by PCR-RFLP method. Data were analyzed by using unconditional logistic regression to evaluate the association of rs2665802 with esophageal cancer. Results: In general， there was little evidence supporting any effects of rs2665802 on the risk of esophageal cancer. However， the genotypes TA and AA were associated with a decreased risk of esophageal cancer among persons with BMI lower than 24.9 kg/m2. Conclusion: Among persons with BMI lower than 24.9 kg/m2， rs2665802 is associated with the risk of esophageal cancer.
Key words Esophageal cancer; Growth hormone; Single nucleotide polymorphism (SNP)
生长激素1（GH1）在人出生后的正常生长过程中起到了重要的作用。GH1在垂体合成并释放到血循环中，与其受体结合后能够刺激类胰岛素生长因子1（IGF-I）的产生，从而促进细胞的增殖、分化和抑制细胞的凋亡[1]。虽然GH1的主要效应依赖于IGF-I，但是对于细胞的生长，它还有许多独立于IGF-I的作用。除了有内分泌效应外，GH1和IGF-I还可以通过自分泌和旁分泌作用于局部组织[1]。
越来越多的证据显示GH1/IGF-I途径在癌症的发生和发展过程中起到了重要的作用[1-2]。两项研究显示血清中IGF-I水平升高与食管癌的发病风险显著关联[3-4]；同时GH1/IGF-I能够刺激食管癌中肿瘤的生长[5-6]。在24小时期间内，GH1的分泌有27%是由遗传因素决定的[7]，而其基因中的一个单核苷酸多态性（SNP）rs2665802 T/A被显示与GH1和IGF-I的水平相关联[8-9]，因此在本研究中，我们检测了rs2665802与食管癌发病风险的关系。
1 材料与方法
1.1 样本 我们收集了77例食管鳞状细胞癌患者和461例正常对照。所有癌症患者均由病理学确诊，其中男性57名，女性20名，年龄范围48～79岁，平均年龄64岁；正常对照中男性379名，女性82名，年龄范围48～80岁，平均年龄62岁。病例组和正常对照组在性别和年龄分布方面差异无统计学意义（P&>0.05）。
1.2 基因分型 我们用酚/氯仿抽提法提取DNA，然后采用巢式PCR-RFLP进行基因分型。首先扩增的是541bp的特异性片段：在20μL反应体系中，含有15ng基因组DNA、1×PCR缓冲液、0.2μM dNTPs、0.1μM引物（F:5'-TGACTTTGAGAGCTGTGTTA-3';R:5'-AGAAGGACACCTAGTCAGACA-3'）、2U Taq DNA聚合酶。PCR的反应条件为：94℃预变性2分钟，然后22圈循环，每一循环中94℃预变性1分钟，57℃退火1分钟，72℃延伸1分钟，循环完成后72℃延伸5分钟。然后1μL的PCR产物作为模板进行第二次扩增，PCR的反应条件与第一次相同，引物为：F:5'-GAGAAACACTGCTGCCCTCTTTTT-3';R:5'-AAGAGAAGGAGAGGCCAAGC-3'。PCR反应完成后，取8μL产物加入5U AatⅡ限制性内切酶，按照生产商推荐的条件进行酶切，酶切产物经8%聚丙烯酰胺凝胶电泳，EB染色，紫外灯下观察结果（TT，149bp;TA，149+179bp;AA，179bp）。
1.3 统计分析 采用χ2检验检测基因型分布在正常对照中是否符合Hardy-Weinberg平衡；非条件性Logistic回归分析来估计相对发病风险，并以ORs和95%CIs表示。因为身体质量指数（BMI）能够影响IGF-I水平，因此也分析了rs2665802和食管癌的关联是否因BMI不同而改变。根据BMI不同分为两组：≥中位数（24.9kg/m2）组和&<中位数组。所有的OR值都平衡了性别、年龄、吸烟和饮酒等因素的影响。
2 结果
在正常对照中，rs2665802的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡。总体来说，rs2665802对食管癌的发病没有影响，然而，在BMI低于中位数24.9kg/m2的人群中，这一SNP与疾病相关联，而且基因型TA和AA可降低食管癌的发病风险，见表1；同时等位基因A对发病具有剂量效应关系（P-trend=0.004）。
表1 SNPrs2665802与食管癌的关联性（略）
3 讨论
食管癌是一种高度致死性的癌症，其5年生存率仅为10%，而且这种低生存率的改善仅是通过早期肿瘤筛查获得的[10]，因此识别一些高危人群非常重要，尤其是分子遗传学危险因素的识别，将对食管癌的预防治疗产生更广泛的影响。通过对食管癌高危基因的筛查，将有可能更为全面地判定食管癌发生的高危人群，从而采取有针对性的预防和治疗措施。
大量的证据显示GH1/IGF-I系统参与了食管癌的发生发展过程。因为营养能够影响GH1的水平，而营养不良对于食管癌患者来说是常见现象，因此我们很难用病例-对照样本来评估GH1的血循环水平与食管癌的关系；此外，GH1和IGF-I促进食管癌的发生可能依赖于自分泌功能，GH1的循环水平并不能反映其在局部组织中的浓度；因此，一些能够影响或与GH1水平关联的遗传多态性可能更好地反映GH1在局部或全身组织中的水平。因此，我们检测了GH1基因的SNPrs2665802与食管癌的关系。
在本研究中，我们发现在BMI低于中位数24.9kg/m2的人群中，SNPrs2665802 A等位基因可降低食管癌的发病风险，同时具有剂量效应关系。虽然rs2665802位于内含子区域，但有研究显示它与启动子区域的SNP紧密连锁[8]；而且AA基因型与低水平的GH1和IGF-I相关联[8-9]。我们的结果提示GH1/IGF-I系统参与了食管癌的发生和发展。虽然一些研究显示rs2665802对癌症的发生没有影响，然而，有研究显示A等位基因可以降低结肠直肠癌的发病风险[9]，从而从另一方面支持了我们结果的正确性。据我们所知，这是首次研究GH1基因多态性与食管癌的关系，因此，需要其它研究来证实我们的结果，同时也需进一步探索GH1基因与食管癌关联的生物学机制。
参考文献
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