MTT法检测白头翁对人肺巨细胞癌细胞株PG细胞增殖的抑制作用

【摘要】 观察中药白头翁对人肺巨细胞癌细胞株PG细胞增殖的影响。采用噻唑蓝 (MTT)比色法检测PG细胞增殖的状况。结果表明：不同浓度的白头翁含药血清对肺癌细胞PG增殖有抑制作用，且呈明显的时效和量效关系。白头翁含药血清在体外可有效抑制肺癌细胞PG的生长，具有一定的细胞毒性作用。

【关键词】 MTT法;白头翁;肺癌细胞PG;抑制增殖;细胞毒作用

　　 1 引 言

　　中药白头翁为毛茛科植物白头翁的干燥根，具有清热解毒，凉血止痢之功效。现代药理研究表明白头翁具有抗肿瘤、抗菌、消炎、增强免疫功能等作用。我们采用MTT法观察了白头翁含药血清对肺癌细胞PG增殖的影响，为探讨白头翁抗肿瘤细胞作用机制，以及白头翁抗肿瘤的开发和研制提供了依据。

　　2 实验材料

　　白头翁购自济南市建联中药店，并由山东中医药大学药学院生药系石俊英教授鉴定。

　　人肺巨细胞癌细胞株PG细胞，由山东省医学科学院基础所提供。

　　3 实验动物

　　Wistar大鼠，雄性，体重200～240 g，由山东中医药大学实验动物中心提供。

　　4 实验仪器与试剂

　　全自动酶联免疫检测仪(深圳雷杜电子公司);倒置相差显微镜(美国AO);CO2培养箱;超低温冰箱;RPMI1640培养基，Gibco公司产品;小牛血清，杭州四季青生物材料研究所;二甲基亚砜(DMSO)，Sigma公司产品;噻唑蓝 (MTT)，Sigma公司产品;顺铂(DDP)，齐鲁制药有限公司。

　　5 实验方法

　　5.1 白头翁水提取物的制备

　　称取白头翁200 g，加适量水浸泡1～2 h，水煎煮提取两次，合并提取液，浓缩成一定浓度(剂量为50 g生药/kg)，即得白头翁水提取物。

　　5.2 含药血清的制备

　　取Wister大鼠20只，随机分成正常血清组10只，含药血清组10只。含药血清组每日分别白头翁4 ml/次，2次/日灌胃，正常血清组每日给予等量生理盐水灌胃，连续给药3 d，末次给药后1 h，乙醚麻醉，腹主动脉无菌采血，置无菌离心管离心10 min(1500转/min)，无菌分离血清，经56℃、30 min灭活，用0.22 um微孔滤膜过滤除菌，分装入小瓶，置-20℃冰箱保存备用。

　　5.3 细胞培养

　　PG细胞用含10%小牛血清及青霉素和链霉素各100 U/ml的RPMI1640培养液于37℃、5%CO2条件下培养，隔日传代。取对数生长期细胞进行实验。

　　5.4 MTT法检测[1-3]

　　取对数生长期PG细胞，调整细胞浓度至2×105/ml，按每孔2×105接种于96孔培养板，培养24 h，细胞贴壁后，吸去上清液，分组，每组3个复孔，分组为正常血清组(浓度为10%)、白头翁含药血清组(浓度分别为5%、10%、15%)、化疗组(1ug/ml DDP)和综合组(1ug/ml DDP+5%白头翁含药血清、1ug/ml DDP+10%白头翁含药血清、1ug/ml DDP+15%白头翁含药血清)[1-2]。分别培养24、48、72 h后加入MTT(5mg/ml)20μl， 37℃继续培养4 h后弃上清终止培养;每孔加入DMSO 200 μl，37℃振荡10 min，在酶标仪490 nm处测各孔光吸收度(OD)，计算各组细胞的生长抑制率[3]。生长抑制率=[(对照组平均OD490值—实验组平均OD490值)/对照组平均OD490值]×100%。结果见表1。表1 白头翁对人肺巨细胞癌细胞株PG细胞生长抑制作

　　 6 讨论

　　四唑盐(MTT)比色试验是一种检测细胞存活和生长的方法。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联免疫检测仪在490 nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测，大规模的抗肿瘤药物筛选，细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。本实验以MTT法检测观察白头翁含药血清对PG细胞株的细胞毒作用，结果表明，白头翁含药血清对PG 细胞增殖有明显抑制作用，不同浓度含药血清对PG细胞增殖呈现出不同程度的抑制作用，随作用时间的延长抑制作用逐渐增强，呈现一定的时效和量效关系;含药血清与DDP合用，能明显增加DDP的细胞毒作用。以上结果提示白头翁不仅有直接抑制肿瘤细胞生长的效果，对化疗药物也有增敏作用，为白头翁抗肿瘤作用的临床应用和新药开发提供了一定依据。

参考文献