【摘要】 探索4%壳聚糖对大鼠污染创面愈合的影响。用W istar大鼠制备创伤感染模型，分别用4%壳聚糖(实验组)、贝复济(阳性对照组)和生理盐水(阴性对照组)创面喷雾。结果表明：(1)4%壳聚糖组在第3、7、14、21d创面愈合率均高于生理盐水组和贝复济。(2)4%壳聚糖组的创面愈合时间为(17.11±1.25) d，贝复济组的愈合时间为(19.21±1.12) d，而生理盐水组在21 d内未愈合。(3)痂下细菌定量发现，生理盐水组为(4.22±1.65) log cfu/g，贝复济组为(3.29±0.98) log cfu/g，4%壳聚糖组为(2.52.±1.01) log cfu/g。4%壳聚糖具有抑制手术创面细菌生长、提高手术创面愈合率、减少创面愈合时间的作用。
【关键词】 壳聚糖;贝复济;创面 ;感染;愈合
Abstract：To investigate the effect of 4% Chitosan to the Contaminated wound of rats. The Wistar were used to make the model of Contaminated wound ，and sprayed the wounds use 4% Chitosan (experimental group)、BFGF(positive control group)and Saline (negative control group)Separately.The results: (1)The healing rate of 4% Chitosan group higher than the Saline group and BFGF group at the 3，7，14，21 day.(2)the healing time of 4% Chitosan was(17.11±1.25) d， the healing time of BFGF is (19.21±1.12) d，but the Saline group is no healing.(3)Bacterial quantification under the scab finded that the Saline group was(4.22±1.65) log cfu/g，the BFGF group was(3.29±0.98) log cfu/g and the 4% Chitosan group was (2.52±1.01) log cfu/g.4% Chitosan can inhibit the Bacterial growing of the wound， improve cure rate of the wound and decrease the healing time.
Key words：Chitosan;Recombinant bovine basic fibroblast growth factor for external use(BFGF);Wound;Contaminated;;Heal
1 引 言
在手术过程中，如果麻醉及手术时间较长、创伤大、操作不规范或污染区域手术等，均易发生手术创面感染。严重的创面感染往往加剧患者的痛苦，影响手术的成败，甚至引起医疗纠纷。因此，防治创面感染的药物至关重要。理想的创面用药应该具有镇痛、减少渗出、利于引流、保护创面、促进创面生长、抗菌谱广、不产生或少产生抗药菌株、无毒性、副作用少、创面愈合后疤痕少、价格便宜等特点。壳聚糖生物膜有很好的生物相容性和生物可降解性，还具有抗菌、消炎、止血、减少创面渗出和促进创伤组织再生、修复、愈合的作用，并且柔韧性、吸水性和透气性在各种辅料材料中具有优势，适合裸露、需要保护的创面[1]。为探讨壳聚糖在防治手术创面感染中的影响，本实验用W istar大鼠造模，用4%壳聚糖进行实验，以贝复济为阳性对照组，生理盐水为阴性对照组，现将结果报告如下。
2 材料与方法
2.1 动物模型
雄性 W istar大鼠60只，体重200～250 g。实验前一天用8%硫化钠脱去大鼠背毛，面积约为30 cm2，用3.5%水合氯醛按10 ml/kg体重经腹腔注射麻醉后，用0.5%碘伏消毒。切开皮肤全层，切口长约2～3 cm，并沿切口两侧切去0.5 cm左右的皮肤全层，使缝合时产生张力。在切口内予，以标准金葡菌(106个/g组织涂抹，间断缝合，24 h后再次以标准金葡菌处理切口，制备成感染手术创面大鼠模型。
2.2 壳聚糖溶液的配制
称取2 g壳聚糖，溶于50 ml蒸馏水中，加热使其完全溶解，配成浓度为4%的壳聚糖溶液用前高温灭菌。
2.3 换药
模型制备完成当天开始实验。实验组动物予4%的壳聚糖溶液创面喷雾，阳性对照组用贝复济喷雾，阴性对照组用生理盐水喷雾，各组喷雾均为每日两次，喷雾后均覆以洁净纱布。
2.4 观测指标
2.4.1 创面愈合率 按Nagelschmidt等[2]报道的方法计算各时相点创面愈合率：用透明的称量纸(7.5 cm×7.5 cm，重量平均约为0.1654 g)覆盖在大鼠背部创面，将创面边缘描绘在透明的称量纸上，剪去多余纸边，下面公式计算创面面积，创面面积=(7.5 cm×7.5 cm×纸片重)/0.1654 g，记录创面面积，并按下面公式计算创面愈合率：创面愈合率(%)=(原始创面面积-未愈合创面面积)/原始创面面积
2.4.2 创面愈合时间 伤后各确定时相点观察伤口愈合情况，以创面完全上皮化、无渗出作为创面完全愈合的依据，记录创面愈合时间。
2.4.3伤口细菌定量 造模第21 d处死大鼠，创面细菌定量
2.5 统计学处理
实验所得数据采用均数±标准差(X±S)表示，t检验比较组间差异，P&<0.05有统计学意义。
3 结果
3.1 4%壳聚糖对创面愈合率的影响
如表1所示，4%壳聚糖组、贝复济组第3、7、14、21天4个时间点创面愈合率都明显高于自然愈合组(P&<0.01)，且4%壳聚糖组的创面愈合率也明显高于贝复济组。(P&<0.05) 表1 各组创面愈合率(%)(x±SD，n=20)*P&<0.01贝复济组和对照组相比;▲P&<0.01 4% 壳聚糖组和对照组相比;#P&<0.05 4% 壳聚糖组和贝复济组相比
3.2 壳聚糖对创面愈合时间的影响
至造模后21天处死大鼠，对照组创面尚未愈合;4%壳聚糖组较贝复剂组创面愈合时间明显缩短，有统计学意义(P&<0.05)。表2 创面愈合时间(d)(x±SD，n=20)*至造模后21天处死，尚未愈合;**P&<0.05，4% 壳聚糖组和对照组相比.
3.3 创面细菌培养
与对照组相比，4%壳聚糖组、贝复济组都可以明显减少创面细菌，有统计学意义(P&<0.05)。而4%壳聚糖组的创面细菌要明显少于贝复济组。表3 创面细菌定量(x±SD，n=20)*P&<0.01贝复济组和对照组相比;▲P&<0.01 4% 壳聚糖组和对照组相比;#P&<0.05 4% 壳聚糖组和贝复济组相比。
4 讨论
手术切口愈合是手术成败的重要指标。临床上由于操作不规范或原本就属于污染切口，切口愈合不良或污染时有发生。理想的创面敷料应具有以下功能：透气，透湿，保湿，防止水分与体液的损失：抵御细菌的入侵，防止感染;与创面有亲和力，有较好的黏合力;柔软，有一定力学强度;生物相容性好，促进皮肤生长，不留疤痕，不产生变形[3]。壳聚糖又名甲壳胺，是甲壳素脱乙酰的产物，是一种阳离子多糖。同时也是自然界存在的唯一碱性多糖，无毒，有很好的生物相容性和生物可降解性，还具有抗菌、消炎、止血、减少创面渗出和促进创伤组织再生、修复、愈合的作用[4-5]，并且柔韧性、吸水性和透气性在各种辅料材料中具有优势，适合裸露、需要保护的创面。
本研究证实壳聚糖具有促进创面愈合作用，4%壳聚糖组在3、7、14、21 d均比生理盐水对照组和贝复济组有明显的创面保护和修复作用，具有统计学意义。同时4%壳聚糖组大约在造模后17 d左右创面愈合，贝复济组大约在造模后19 d左右创面愈合，而生理盐水组至21 d仍未愈合，表明与贝复济和生理盐水相比4%壳聚糖能明显缩短愈合时间。蒋玉燕等研究表明壳聚糖具有天然的抑菌活性 ，抑菌谱较广 ，对革兰氏阳性菌、 革兰氏阴性菌和白色念珠菌均有明显的抑菌效果。本研究中用标准金黄色葡萄球菌两次涂抹创面造成污染创面，实验第21天取各组全部动物做创面细菌定量培养，4%壳聚糖组的平均细菌定量为(2.52±1.01) log cfu/g要明显低于贝复济组的平均细菌定量(3.29±0.98) log cfu/g(P&<0.05)，且大大低于生理盐水组的(4.22±1.65)log cfu/g(P&<0.01)。
壳聚糖以其良好的生物相容性和生物降解性、无毒、无免疫原性、抑菌等特点，近年来成为生物医学领域的新宠，有着极广阔的应用前景[6]。壳聚糖开发为外科敷料则天然具有止痛、止血、止痒，有效地促进创面表皮重建和伤口愈合，减低伤口感染率，减少瘢痕等诸多特点，必将成为未来外科敷料的主角[7]。
参考文献
[1]Howling GI， Dettmar PW， Golddara PA， et al. The effect of chitin and chitosan on the proliferation of human skin fibroblasts and keratinocytes in vitro[J].Biomaterials， 2001，2222，22(22):2959.
[2]Nagelschmidt M，Becker D，Bonninghoff N，et al.Effect of fibronectin therapy and fibronectin deficiency on wound healing:A study in rats[J].J Trauma，1987，27:1267.
[3]田建广，夏照帆.创面敷料的研究进展[J].解放军医学杂志，2003，28(5)：470-471.
[4]Muzzarelli R AA， Muzzarelli C. Chitosan chemistry : relevance to the biomedical science[J].Advance polymer Science，2005，186 :151-209.
[5]Kumar M N V R， Muzzarelli R AA， Muzzarelli C，et al. Chitosan chemistry and pharmaceutical perspectives[J]. Chemistry reviews， 2004， 104(12): 6017-6084.
[6]Kumar M N V R， Muzzarelli R AA， Muzzarelli C，et al. Chitosan chemistry and pharmaceutical perspectives[J]. Chemistry reviews， 2004， 104(12): 6017-6084.
[7]Azad A K， Sermsintham N， Chandrkrachan S， et al. Chitosan memberrance as a wound-healling dressing: Characterization and clinical application [J]. Journal of biomedical materials research (Part B):Applied Biomaterials ， 2004， 69B(2): 216-222.