作者：鲁卫东 ， 吴俊 倪俊学 莫骄， 林华
【摘要】 目的： 研究克拉霉素微囊的制备工艺，以提高儿童用药的顺应性。 方法： 以明胶为囊材，加入增塑剂，采用单凝聚法制备克拉霉素微囊。以微囊包封率、粒径和形态为评价指标，通过正交设计确定克拉霉素微囊的最佳制备工艺。 结果： 克拉霉素微囊最佳制备工艺为明胶液浓度40%，pH4 ，温度40 ℃，增塑剂与明胶用量比为0.25。 结论： 以最佳制备工艺条件制备含药微囊，重现性好，工艺稳定，口感得到极大改善。
【关键词】 微囊; 克拉霉素; 明胶; 包封率; 形态
[Abstract] Objective: Optimizing the preparation method for the clarithromycin microcapsules in order to increase the intaking compliance for children. Methods: Singlecondensation method was employed to prepare microcapsules. Using Orthogonal Design Method to optimize the preparation technique by using encapsulation rate， particle size and shape as evaluating index. Results: The optimized technique: gelatin concentration 40%，pH4， temperature 40 ℃， ratio of plasticizer and gelatin 0.25. Conclusion: Clarithromycin microcapsules produced from the excellent technique had good repeatability. And the taste for the resulted product has also been improved greatly.
[Key words] microcapsules; clarithromycin; gelatin; encapsulation rate;microstructure
克拉霉素(clarithromycin)又名甲氧基红霉素，利迈先，其化学结构为红霉素A 6位上的OH改为OCH3，是红霉素衍生物，化学名为6O甲基红霉素，为半合成大环内酯类抗生素。主要特点是抗菌活性强于红霉素;对酸稳定，口服吸收迅速完全，且不受进食影响;分布广泛且组织中的浓度明显高于血中浓度;不良反应发生率和对细胞色素P450影响均较红霉素为低。但此药味极苦，口服有不适感，不利于儿童用药。
微囊是利用天然或合成的高分子材料或共聚物(囊膜材料)将药物包裹而成的一种新的剂型，目前国内外有30余类药物制成微囊，药物微囊化可以掩盖药物的不良气味及口味;提高药物的稳定性;防止药物在胃内失活或减少对胃的刺激;使液态药物固态化便于应用与贮存;减少复方药物的配伍变化;可制备缓释或控释制剂[1-2]使药物浓集于靶区，提高疗效，降低毒副作用;可将活细胞或生物活性物质包裹等。本实验的目的在于掩盖克拉霉素的苦味以便于儿童服用。
药物微囊化的方法主要有物理化学法、物理机械法和化学法3类。本研究考虑到克拉霉素难溶于水，但与明胶有较好的亲和性，另外明胶是一种天然的高分子材料，无毒、成膜性好并且较稳定，因而选用物理化学法中的单凝聚法来制备微囊。微囊产品的质量在很大程度上取决于其粒径、形态以及对药物的包封率。本研究以此为指标筛选微囊化的最佳工艺。
1 材料及方法
1.1 实验原料、仪器、试剂
克拉霉素(云南永安制药厂，批号050120) ;明胶(上海化学试剂公司，批号20040718);醋酸(上海试剂一厂，批号20030401);无水硫酸钠(重庆北碚化学试剂厂，批号980423);甲醛(洛阳市化学试剂厂，批号030305);聚乙二醇400(上海化学试剂公司，批号20010430);克拉霉素对照品(中国药品生物制品检定所，批号130558-200501，含量97.5%);磷酸，分析纯(广州化学试剂厂);乙腈，色谱醇(天津市四友生物医学技术有限公司);Hypersil ODS2 液相色谱柱(4.6 mm×200 mm， 5 μm);数码显微镜(麦克奥迪实业集团有限公司)。
1.2 微囊制备
1.2.1 实验操作
称取明胶2 g及增塑剂适量，加适量蒸馏水制备胶液。称取克拉霉素1 g，加入明胶溶液，恒温磁力搅拌成乳，用10%醋酸溶液调节pH约为4。在搅拌下将30%硫酸钠溶液滴入上述乳剂中，至显微镜下观察已成囊为度。加入硫酸钠稀释液，使反复成囊，直至得到满意的囊形。加入甲醛溶液，搅拌15 min，再用20%氢氧化钠溶液调节至pH8～9，继续搅拌1 h，静置待微囊沉降完全。倾去上清液，微囊过滤，用蒸馏水洗至无甲醛气味(或用Schiff试剂试至不显色)，抽干，即得。
1.2.2 正交试验
根据预试验及
参考文献
[3-4]得知明胶液浓度、pH值、温度、增塑剂与明胶的用量比对微囊的形成影响较大。为了优化处方，得到理想的实验条件，设计以下3水平4因素的试验，见表1。表1 因素水平表
1.3 微囊包封率测定
1.3.1 标准曲线绘制
1.3.1.1 色谱条件
大连依利特Hypersil ODS2液相色谱柱 (4.6 mm×200 mm，5 μm) ;以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾9 111 mg，加水溶解并稀释至1 000 ml，加三乙胺2 ml，用磷酸调节pH至5.5) - 乙腈(60∶40)为流动相;检测波长为210 nm;流动相流速为1.0 ml/min;柱温45 ℃。进样量 20 μl;理论板数按克拉霉素峰计算应不低于3 000。
1.3.1.2 对照品溶液的制备
称取克拉霉素对照品适量，置50 ml量瓶中， 加流动相溶解后稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
1.3.1.3 线性回归方程
精密量取克拉霉素对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.7，1.0，2.0 ml分别置于10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。量取20 μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以浓度(C)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标， 回归方程为A=3665.25C-381.91， r=0.9992。结果表明，克拉霉素在3～110 μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
1.3.2 微囊包封率测定[2]
精密称取克拉霉素微囊100 mg 和空白微囊100 mg ， 于研钵中研细，置于50 ml量瓶中，加入0.1 mol/L 的盐酸溶液20 ml，超声30 min使微囊完全破坏(镜检已无微囊存在)，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，量取续滤液1 ml于10 ml量瓶中，加入无水乙醇定容至刻度，量取20 μl，注入高效液相色谱仪(以空白微囊的上述处理液作空白溶液)，按下列公式计算药物的包封率：包封率=微囊中药物量/投药量×100%
1.4 微囊形态观察
将适量微囊均匀分散于水中放于载玻片上，在数码显微镜下观察其形态，并测定其粒径分布情况。
2 结 果
2.1 正交设计试验结果
由表2可知，4个因素中对微囊性质影响顺序为C&>A&>D&>B。最佳处方和工艺条件为A3B2C1D3 ，即明胶浓度为40%，pH值为4 ，温度为40 ℃，增塑剂与明胶用量比为0.25。
2.2 包封率测定结果
根据最佳工艺制备3批微囊，其包封率分别为70.21 %、71.56% 和69.82%，说明最佳处方和工艺条件重现性好，工艺可靠。
2.3 微囊的形态及粒度分布结果
在数码显微镜下观察试验制备的微囊，其外观圆整，粒径分布均匀，粒径分布范围在5～106 μm(图1)。表2 正交设计试验及结果图1 克拉霉素微囊数码显微镜形态(×1 000)
3 讨 论
本研究尝试了克拉霉素微囊的多种制备方法，最终选定以单凝聚法制备。这可能是由于单凝聚法在水中成囊，克拉霉素难溶于水但也不过分疏水，并且与明胶有一定的亲和力，因而易被微囊化。
在制备过程中发现，明胶浓度以及成囊温度对微囊粒径影响较大，明胶浓度增加、温度降低有利于胶凝，但同时又影响到微囊粒径和形态分布，综合考虑各因素，选定明胶浓度为20%、30%、40%，成囊温度为40 ℃、50 ℃、60 ℃来进行正交设计实验。 本研究的模型药物克拉霉素对酸比较稳定，故微囊中药物的含量测定采用研磨—超声波提取法，使微囊囊材破裂，药物游离。该法与有机溶剂萃取法相比，无有机溶剂残留，毒性低，提取效果也较理想。
参考文献
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