微生物室间质评分析

　　　　 作者：李光烨 岳燕军 马海乾

【关键词】 微生物学;培养基;微生物敏感性试验

在2008年3月河北省微生物室间质评活动中，130家医院微生物室参加了临床微生物学检测活动，有效回报109家，通过89家，通过率81.65%。我院微生物室在此次室间质评活动中得94分。现将我室在这次活动中的质控过程进行回顾分析。

　　1 材料与方法

　　1.1 标本来源 河北省2008年3月下发的2007—2008年度微生物室间质控菌0801～0805号共5株菌，最初为河北省临床检验中心从临床血液、便、痰、伤口分泌物和痰标本中分离病原菌。

　　1.2 质控要求 将0801～0805号5株菌按照标本来源鉴定，0804，0805两株菌加做药敏试验。

　　1.3 材料来源 培养基、药敏纸片、鉴定小管、β内酰胺酶纸片均购自天津金章科技有限公司，沙门菌多价诊断、分型血清由兰州生物制品研究所生产。

　　1.4 药敏方法 采用CLSI推荐的KB纸片扩散法，结果依M100—S16抗微生物药物敏感性试验的执行标准，质控菌：ATCC25922，ATCC25923，ATCC27853，ATCC29212，ATCC700603。

　　2 结果

　　2.1 0801号标本 心脏瓣膜置换术后体温升高的52岁男患者血培养中分离菌，接种血平皿和中国蓝培养基于(35±1)℃培养24h后，在血平皿和中国蓝培养基上均生长，革兰染色，见图1，2，转种法国科玛嘉显色培养基(35±1)℃培养24h后呈蓝绿色，界于白色念珠菌和热带假丝酵母菌之间，芽管试验阴性，否定了白色念珠菌，孢子和假菌丝的形态大致偏向于热带念珠菌，由于显色结果有偏差，怀疑是都柏林念珠菌，42℃生长实验否定了都柏林念珠菌，最后定为热带念珠菌。质控结果阿萨希毛孢子菌，符合率70%。

　　2.2 0802号标本 男性，35岁，食用不洁蔬菜后腹痛、腹泻，便培养的分离菌。接种血平皿和中国蓝、SS培养基均生长，在SS为透明发亮红色中等大小的菌落，在中国蓝上为粉红色中等大小透明菌落，双糖结果为乳糖阴性，葡萄糖产酸产少量的气，硫化氢阳性，动力阳性，与AFO多价血清凝集、O4凝集、gf凝集，鉴定为德儿比沙门氏菌。Bio20鉴定99%为沙门氏菌，鉴定为德儿比沙门氏菌符合率100%。

　　2.3 0803号标本 7岁男孩，临床症状为发热、流涕、咳嗽。痰培养的分离菌。接种巧克力培养基、血培养基、中国蓝培养基于(35±1)℃的烛缸中培养24h，血平皿菌落为灰白色、中等大小较干的菌落，巧克力培养基里菌落为湿润、圆的、有光泽的、接种环可以推动整个菌落，易切割，革兰染色阴性双球菌，葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖均阴性，氧化酶、触酶、硝酸盐还原、DNA酶均阳性，鉴定为卡他莫拉菌。符合率100%。

　　2.4 0804号标本 患者女，55岁，手术后不愈合伤口分泌物培养的分离菌。(35±1)℃培养24h，血培养基上生长白色、湿润、扁的菌落、中国蓝上不生长，革兰染色阳性葡萄球菌，凝固酶、触酶、DNA酶、VP和甘露醇阳性。经葡萄球菌Rap.S16试剂鉴定100%金黄色葡萄球菌。β内酰胺酶阳性。药敏结果苯唑西林、头孢西丁，青霉素、氨苄西林舒巴坦、头孢唑林、头孢呋辛、庆大、左氧氟沙星、红霉素耐药，万古霉素敏感，抑菌环17mm，克林霉素抑菌环25mm，D实验阳性(红霉素诱导可林霉素耐药)，红霉素和克林霉素耐药，鉴定为多重耐药甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌(MRSA)，符合率100%。

　　2.5 0805号标本 男性76岁，COPD患者，胸闷，咳嗽，痰培养分离菌。(35±1)℃培养24h，血平皿上灰白色、光滑、湿润、圆形菌落，中国蓝白粉色、中等大小、光滑、湿润的菌落、48h后菌落变为黏液性，革兰染色阴性双球菌，双糖，氧化酶阴性，硝酸盐还原阴性，触酶阳性，BIOKONT 20E革兰阴性杆菌鉴定为不动杆菌属，10%的乳糖阳性，42℃生长鉴定为鲍曼不动杆菌。药敏结果：氨苄西林、哌拉西林、头孢西丁、头孢呋辛、头孢唑林、头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、庆大、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、头孢吡肟均耐药，亚胺培南、米诺环素中界、美罗培南敏感，结果正确，符合率100%。

　　3 讨论

　　3.1 0801号标本 阿萨希毛孢子菌(35±1)℃培养24h，血琼脂平板生长白色、干燥、边缘不整齐，触之易碎的菌落，继续培养至72h，表面皱褶较明显，转种法国科玛嘉显色培养基(35±1)℃培养24h后呈绿色显色，与白色假丝酵母菌的呈色易混淆，但菌落较之干燥。革兰染色后镜检可见大量菌丝、关节孢子和多种形状的小分生孢子，菌丝分枝分隔粗细不等，节孢子数目不等、长短不一，每一节孢子呈矩形或椭圆形。提示可疑毛孢子菌属，进一步鉴定和确认。对于阿萨希毛孢子菌我们也是第一次接触，仅仅依靠科玛嘉显色培养基的显色结果是远远不够的，通过这次实验增加了认识，全省准确率为4.6%，希望有关部门加强对微生物检验人员的培训，更新知识，提高真菌的检验技术水平。质控结果回来以后，重新鉴定此菌，在氯霉素沙堡弱琼脂培养基30℃培养48h生长酵母样菌落，转种念珠菌科玛嘉显色培养基，菌落皱褶，天蓝色色素扩散到琼脂中，转种玉米吐温80培养基生长，10%KOH压片，显长方形关节孢子，在牛心脑浸液羊血平板上37℃培养，白色干燥菌落，无溶血，生长分隔的菌丝，偶见孢子，API TBM系统生化编码：2744734，阿萨希毛孢酵母菌。阿萨希毛孢子菌，(Trichosporon，asahii)原属皮肤毛孢子菌，为酵母样真菌，为条件致病菌，多造成移植患者、血液病、恶性肿瘤、免疫缺陷、白细胞减少症等患者的系统播散性感染。同时，该菌极易在医院内广泛使用的生物材料如导尿管、尿袋、呼吸机导管等表面黏附并形成生物膜，近些年检出率出现上升的态势[1]。

　　3.2 0802号标本 德儿比沙门氏菌，此结果的准确得益于我们备用的多价诊断血清和分型血清，微生物实验室应该准备肠道门诊的各种诊断血清，如沙门氏菌、志贺氏菌、大肠O157、霍乱弧菌的诊断和分型血清。药敏专家系统提示：对沙门氏菌引起的腹泻、菌血症，一、二代头孢菌素及氨基糖苷类抗生素不管体外敏感与否，均报耐药，对三代头孢菌素敏感，建议临床首先选用三代头孢菌素。

　　3.3 0803号标本 卡他莫拉菌，属于呼吸道感染的常见病原菌，在儿童和老年人中的分离率较高，常引起呼吸道感染及脑膜炎、菌血症。近年来由于此菌β内酰胺酶发生率在80%～100%，CLSI要求检测β内酰胺酶，本菌对阿莫西林克拉维酸、头孢曲松、左氧氟沙星、莫西沙星100%敏感[2]。

　　3.4 0804号标本 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)，耐苯唑西林机制是金黄色葡萄球菌的青霉素结合蛋白(PBP)发生了突变，突变的PBP2a保持了合成细胞壁的功能，但却降低了对苯唑西林的亲和力。由于PBP5是所有β内酰胺酶类的作用靶位，所以MRSA株或多或少地降低了对所有β内酰胺类的敏感性，而且MRSA株的药敏试验结果报告对某几个β内酰胺酶药敏感时，临床治疗效果常不理想。MRSA株也多为多重耐药株，除了对多种β内酰胺酶耐药外，也常对其他抗生素耐药，如氨基糖苷类、氟奎诺酮类、大环内脂类等。此次菌株即为多重耐药的MRSA，本菌作为质控菌主要是药敏试验，规范MRSA药敏谱，检测结果判定，红霉素诱导克磷霉素耐药的D试验阳性，虽然克林霉素抑菌环大小在敏感范围，也报耐药。

　　3.5 0805号标本 鲍曼不动杆菌为条件致病菌，广泛存在于自然界中。随着广谱抗生素在临床上的大量使用，由鲍曼不动杆菌引起的院内感染逐年增加，而其对抗菌药物的耐药性也随着各时期抗生素使用情况不同而发生变化，表现对多种抗菌药物的耐药率上升，给临床治疗带来一定困难。鲍曼不动杆菌其耐药机制复杂，可通过产生多种β内酰胺酶、主动外排及渗透下降等使大多数抗菌药物活性下降，临床治疗多选用碳青霉烯类药物，本菌显示亚胺培南、米诺环素中界、美罗培南敏感，此株菌对碳青酶烯类药物活性下降，应该引起重视。因此，掌握其检出率和对药物敏感率的变化情况十分重要，有利于加强对鲍曼不动杆菌耐药谱及其动态变化的检测，指导临床合理用药，通过分析其变化的原因及时采取有效的措施，可减少及延缓耐药性发生，避免院内感染的暴发流行及给临床治疗提供科学的数据资料。

参考文献