作者：卢汝梅，李兵，苏醒，钟振国，张雯艳
【摘要】 目的研究紫玉盘提取物的体外抗肿瘤活性。方法紫玉盘乙醇总提取物用系统溶剂分离法分得极性不同部位，采用MTT法测定总提取物及各部位对宫颈癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901、人肝癌细胞株Bele7404增殖的抑制活性。结果紫玉盘总提取物及各部位随着浓度不同，对3种肿瘤细胞株增殖的抑制率各不同。结论紫玉盘总提取物及各部位有显著的体外抗肿瘤活性。
【关键词】 紫玉盘;提取物;抗肿瘤活性
紫玉盘Uvaria microcarpa Champ.ex Benth是番荔枝科紫玉盘属植物，药用全株，具有祛风除湿、行气健胃、止痛、化痰止咳之功效，广西民间用其根来治疗风湿痛、跌打损伤和腰腿痛等症，其叶用于止痛消肿[1，2]。近二十年来的研究表明，紫玉盘同属植物有显著的抗肿瘤作用，但关于紫玉盘的研究报道较少，仅报道从其种子中分得几个番荔枝内酯类和生物碱类成分 [3，4]，对药材的主要药用部位茎的药理作用研究报道甚少，因此很有必要对其药理作用进行系统深入的研究。本实验采用MTT法测定紫玉盘乙醇总提取物及各部位对宫颈癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901、人肝癌细胞株Bele7404增殖的抑制活性。
1材料与仪器
1.1紫玉盘提取物紫玉盘采于广西南宁，经广西中医学院刘寿养副教授鉴定为番荔枝科植物紫玉盘Uvaria microcarpa Champ. ex Benth。紫玉盘茎用乙醇提取得其总提取物(以下简称UAAE)， 总提取物经系统溶剂分离法处理得到石油醚部位(以下简称UPE)、氯仿部位(以下简称UCE)、醋酸乙酯部位(以下简称UEE)、正丁醇部位(以下简称UBE)和乙醇部位(以下简称UAE)。临用前以蒸馏水溶解，无菌过滤后备用。
1.2肿瘤细胞株宫颈癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901购自上海细胞生物研究所细胞库，人肝癌细胞株7404由广西医科大学药学院药理教研室提供。
1.3试剂MTT(四甲基噻唑蓝)为德国Sigma公司产品;FBS(胚胎牛血清)为美国Hyclone公司产品;RPMI1640和DEME培养基为GIBCO公司产品;Trypsin(胰蛋白酶)由天津市灏洋生物制品有限责任公司提供;DMSO由天津汇英化学试剂有限公司提供。
1.4仪器Thermo Forma型CO2培养箱，美国赛默飞世尔科技。Clympus型倒置显微镜，日本产。Biocell型酶标仪，奥地利产。3001型培养皿，美国产。HV-50自动高压灭菌器，日本产。
2方法
2.1MTT法测定在96孔培养板(NUNC)中每孔加入200 μl(含有5 000个/ml肿瘤细胞)含10%FBS的RPMI1640培养液，细胞置37℃，10%CO2培养24 h后，实验组分别加入最终浓度为10，20，40 μg/ml提取的培养液，对照组则加入等体积溶剂的培养液，每组4孔。置37℃，10%CO2培养5 d后，弃去上清液，加入200 μl/孔新鲜配置的含0.2 mg/ml MTT的无血清培养液，37℃继续培养4 h，弃上清液，加入200 μl DMSO，振荡混匀后，在酶标仪上以波长为550 nm，参比波长为450 nm测定OD值，重复3次，按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率。
2.2药物对肿瘤细胞生长的抑制率的计算方法[5]肿瘤细胞生长抑制率(%)=(1-实验组平均OD值/对照组平均OD值)×100%。
2.3统计学方法所有的测定指标均采用均数加减标准差表示，用PEMS软件进行分析，计算相应的统计参数，两组间的均数比较采用t检验。以P&<0.05，P&<0.01表示有统计意义。
3结果
3.1总提取物(UAAE)对肿瘤细胞的抑制作用UAAE对宫颈癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901、人肝癌细胞株Bele7404的增殖均有显著的抑制作用，且抑制作用呈剂量依赖关系。UAAE对人胃癌细胞株SGC7901增殖的抑制作用最强。结果见表1。
3.2石油醚部位提取物(UPE) 对肿瘤细胞的抑制作用UPE对3种肿瘤细胞株的增殖均有抑制作用。在浓度为40 μg/ml时，对人胃癌细胞株SGC7901和人肝癌细胞株Bele7404的抑制率达到50%以上。但对宫颈癌细胞株Hela的抑制作用较弱。结果见表2。
3.3氯仿部位提取物(UCE)的抑制作用UCE对3种肿瘤细胞株的增殖均有显著的抑制作用。在浓度为10 μg/ml时，对3种肿瘤细胞株的抑制率均达到41%以上，在浓度为40 μg/ml时，抑制率均达到60%以上。结果见表3。
3.4醋酸乙酯部位提取物(UEE)的抑制作用UEE对3种肿瘤细胞株的增殖均有抑制作用。在浓度为10 μg/ml时，对宫颈癌细胞株Hela和人胃癌细胞株SGC7901的抑制率达到50%以上。但对人肝癌细胞株Bele7404的抑制作用较弱。结果见表4。表1不同浓度UAAE对肿瘤细胞的抑制作用表2不同浓度UPE对肿瘤细胞的抑制作用表3不同浓度UCE对肿瘤细胞的抑制作用 表4不同浓度UEE对肿瘤细胞的抑制作用
3.5正丁醇部位提取物(UBE)的抑制作用UBE对3种肿瘤细胞株的增殖均有抑制作用。但对人肝癌细胞株7404的抑制作用不强。结果见表5。表5不同浓度UBE对肿瘤细胞的抑制作用
3.6乙醇部位提取物(UAE)的抑制作用UAE对3种肿瘤细胞株的增殖均有直接的抑制作用。在浓度为40 μg/ml时，对3种肿瘤细胞株的增殖有显著的抑制作用。结果见表6。表6不同浓度UAE对肿瘤细胞的抑制作用
4讨论
MTT法具有经济、快速、高效的优点，是目前最常用的体外抗肿瘤药物筛选方法，我们采用MTT法，选用宫颈癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901和人肝癌细胞株7404，对紫玉盘总提取物及5个不同极性部位进行体外抗肿瘤活性的实验研究。结果表明以亲脂性成分为主的石油醚部位对人肝癌细胞株Bele7404抑制作用较强;以极性较大成分为主的醋酸乙酯部位、正丁醇部位、乙醇部位提取物对宫颈癌细胞株Hela和人胃癌细胞株SGC7901有显著的抑制作用，而氯仿部位则对上述3种肿瘤细胞株的增殖均有显著的抑制作用，是紫玉盘提取物中抗肿瘤活性最强的部位，我们已从中分得6个化合物，其抗肿瘤活性筛选研究正在进行中，这些研究结果将为紫玉盘药效学研究及抗肿瘤活性成分的寻找提供了科学依据。
参考文献
[1]中华本草编委会.中华本草，第3册[M].上海：上海科学技术出版社，1999，3:11.
[2]中国药材公司.中国中药资源志要[M].北京：科学出版社，1994:275.
[3]陈文森，姚祝军，吴毓林.紫玉盘种子中的番荔枝内酯类成分研究[J].化学学报，1997，55(7):723.
[4] 余冬蕾，郭剑，廖永红，等.紫玉盘中的新内酰胺[J].植物学报，1999，41(10):1104.
[5]徐叔云，卞如濂，陈修. 药理实验方法学，第2版[M]. 北京：人民卫生出版社，2002:1785.