作者：谭勇，吕诚，赵宏艳，丁晓蓉，李小冰，鞠大宏，吕爱平
【摘要】 目的 探索白附片对正常和肾阳虚大鼠血液生化指标影响的差异。方法 80只SD雄性大鼠随机平均分为肾阳虚模型组和正常组;采用肌注氢化可的松琥珀酸钠的方法造模。造模结束后，将2组大鼠各自随机分为低剂量、小剂量、中剂量和大剂量给药组和空白对照组，每组8只;对各给药组大鼠连续14 d灌胃给予不同浓度的白附片溶液。末次给药24 h后取血进行放免和生化检测。结果 给药前模型组环磷酸腺苷(cAMP)/环磷酸鸟苷(cGMP)和促肾上腺皮质激素(ACTH)低于正常组，随着给药剂量的增加，两者有升高的趋势;给药前模型组血糖(GLU)低于正常组，随着给药剂量的增加，模型组GLU有升高的趋势，而正常组有下降的趋势;中剂量给药时模型组总胆固醇(CHO)显著高于正常组;随着给药剂量的增加，2组丙氨酸氨基转移酶(ALT)均有升高的趋势，且正常组ALT升高的幅度更大;给药前模型组尿素氮(BUN)高于正常组，低、小剂量给药有降低模型组BUN的趋势。结论 白附片对正常大鼠和肾阳虚模型大鼠血液生化指标的影响不同，对正常大鼠的毒性效应更明显。
【关键词】 白附片;肾阳虚模型;血液生化指标;大鼠
Abstract：Objective To explore the differences of blood biochemical indicators between normal and kidney Yang deficient rats administered orally different doses of white prepared lateral root of aconite. Method Eighty Sprague-Dawley (SD) male rats were pided randomly into normal group and kidney Yang deficient model group， forty rats in each group. After producing kidney Yang deficient model by injecting hydrocortisoni natrii succinas in intramuscular， normal and model rats were respectively and randomly pided into little， low， medium， great dose group and blank group， eight rats in each group. Those rats were administered orally with different concentrations of white prepared lateral root of aconite every day for two weeks. Twenty-four hours after the last oral administration， the blood were obtained and used for testing adrenocorticotrophic hormone (ACTH)， cyclic adenosine monophosphate (cAMP)， cyclic guanosine monophosphate (cGMP)， glucose (GLU)， cholesterol (CHO)， alanine aminotransferase (ALT)， urea nitrogen (BUN). Results Before taking medicine， model rats’ cAMP/cGMP and ACTH were lower than normal rats’， and they showed a trend of rise with adding dose. Before taking medicine， model rats’ GLU was lower than normal rats’. With adding dose， model rats’ GLU increased， however， normal rats’ GLU reduced. When taken medium dose white prepared lateral root of aconite， model rats’ CHO was higher than normal rats’. Taking medicine made both groups ALT rise， but normal rats’ went up more quickly than model rats’. Model rats’ BUN was higher than normal rats’， and taking low dose or little dose medicine could lead to incline of reduction. Conclusion White prepared lateral root of aconite caused different blood biochemical effects on normal and kidney Yang deficient rats， and more remarkable toxicity effect on normal rats.
Key words：white prepared lateral root of aconite;kidney Yang deficient model;blood biochemical indicators;rat
现代毒理学研究表明，机体功能状态与药物毒性反应密切相关[1]。中药临床应用特别强调药证对应的重要性，认为只要对证，就能最大程度避免药物毒性反应的发生。目前多采用正常动物评价中药的毒性，这与中医辨证论治的临床实践不相符。因此，应该在机体“证候”状态下研究中药毒性反应[2]。本研究通过比较具有代表性的有毒中药白附片对正常大鼠和肾阳虚模型大鼠的效应差异，探索基于对证模型评价中药毒性的合理性。
1 实验材料
1.1 动物
选用SPF级雄性SD大鼠80只，体重180～220 g，军事医学科学院提供[合格证号：SCXK-(军)2007-004]。饲养在中国中医科学院中医基础理论研究所实验动物室(许可证号：SKY11-00-0039)，室温(23±2)℃，食用全价营养颗粒饲料，饮用纯净水。
1.2 药物
注射用氢化可的松琥珀酸钠(天津生物化学制药有限公司，批号20080604)，用生理盐水配成浓度为71.43 mg/mL的溶液;白附片(北京燕京饮片厂，批号081117，产地：四川)，用乙醇提取制成2 g原药材/mL的溶液(中国中医科学院中医基础理论研究所方证研究中心提取)。
1.3 仪器
Sn-69513型免疫计数器，SABA-18全自动生化分析仪。
2 实验方法
2.1 分组及造模
80只大鼠适应性喂养7 d后随机分为2组(正常组和模型组)，各40只。模型组和正常组中的每只动物每日上午在臀部肌肉丰厚处各注射0.5 mL/kg的氢化可的松琥珀酸钠溶液和生理盐水溶液，连续9 d。然后，再把2组动物分别随机分为低剂量、小剂量、中剂量、大剂量4个给药组和空白对照组，每组8只。
2.2 给药
分组当日对给药组和空白对照组大鼠分别灌胃给予10 mL/kg的白附片溶液和生理盐水，每日1次，连续14 d。给药组给药浓度从低到高依次为：0.32、0.64、1.28、2.56 g/kg。
2.3 指标检测
末次给药禁食24 h后股动脉取血，采用放免法检测促肾上腺皮质激素(ACTH)、环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP);采用全自动生化分析仪检测血糖(GLU)、总胆固醇(CHO)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和尿素氮(BUN)。
3 统计学方法
采用广义线性模型两因素方差分析。显著性水平取P&<0.05。
4 结果
4.1 正常和肾阳虚模型大鼠相关指标变化(见表1)表1 各组大鼠相关指标的比较表1显示，给药前模型组cAMP/cGMP低于正常组，不同给药剂量对正常组和模型组cAMP/cGMP的影响不同，随着给药剂量的增加，模型组cAMP/cGMP有升高的趋势。2组ACTH比较不符合广义线性模型，但给药前模型组ACTH低于正常组，低剂量给药有升高模型组ACTH的趋势。
4.2 正常和肾阳虚模型大鼠血液生化指标的变化(见表2)表2 各组大鼠血液生化指标的比较表2显示，给药前模型组GLU低于正常组，不同给药剂量对正常组和模型组GLU的影响不同，随着给药剂量的增加，模型组GLU有升高的趋势，而正常组有下降的趋势。不同给药剂量对正常组和模型组CHO的影响存在差异，尤其在中剂量给药时模型组CHO显著高于正常组。不同给药剂量对ALT有显著的影响，随着给药剂量的增加，2组ALT均有升高的趋势，且正常组ALT升高的幅度更大。2组BUN比较不符合广义线性模型，但给药前模型组BUN高于正常组，低、小剂量给药有降低模型组BUN的趋势。
5 讨论
血液生化检查是药物毒性评价中的常规检测项目，其指标的异常变化体现了药物的毒性反应。本研究建立肾阳虚大鼠模型，通过比较白附片对正常大鼠和肾阳虚证大鼠血液生化指标的影响，探索白附片对两者的效应差异。
通过肌注糖皮质激素建立的肾阳虚大鼠模型，是比较公认的肾阳虚证中医动物模型。现代研究证实，“下丘脑-垂体-靶腺”轴不同环节、不同程度的功能紊乱导致的肾上腺皮质功能减退是肾阳虚证的主要病理基础，主要表现为ACTH和cAMP/cGMP的下降[3-5]。上述两者的下降，被认为是评判肾阳虚证的客观指标。本研究采用肌注氢化可的松琥珀酸钠溶液的方法造模，所造模型符合肾阳虚的评判标准。本研究发现，给白附片后，模型大鼠随着给药剂量的增加，cAMP/cGMP和ACTH有升高并趋于正常的趋势。这反映了白附片的治疗作用，进一步证明本研究所造模型具有肾阳虚证特征。
糖皮质激素对维持血糖的正常水平有重要作用。长期连续大量使用糖皮质激素，反馈性抑制垂体-肾上腺皮质轴，引起肾上腺皮质萎缩和机能不全，致使糖皮质激素分泌减少，从而抑制糖原异生和加速葡萄糖的分解代谢，导致血糖降低。随着白附片剂量的增加，肾阳虚模型大鼠GLU升高并趋于正常，而正常大鼠GLU降低并偏离正常，提示白附片可能对模型大鼠发挥了治疗效应，而对正常大鼠表现出了毒性效应。不同剂量白附片对肾阳虚模型大鼠和正常大鼠的CHO影响不同，产生的治疗或毒性效应有差异。ALT是肝功能损害最敏感的检测指标。随着剂量的增加，正常大鼠和肾阳虚模型大鼠的ALT有升高的趋势，正常大鼠升高更快，提示白附片对正常大鼠的肝损害更突出。BUN增高是肾小球滤过功能减低的表现，糖皮质激素造模导致肾功能损害，低、小剂量白附片使模型大鼠BUN降低，表现出一定的趋正效应。而对于正常大鼠，随着剂量的增加，BUN有升高的趋势，反映了白附片对正常大鼠可能有一定的肾毒性，并存在剂量依赖性。
总之，白附片对正常大鼠和肾阳虚模型大鼠血液生化指标的影响不同，产生的药物效应有差异;白附片对正常大鼠可能存在的毒性效应更明显。本研究为“基于对证动物模型评价中药毒性”的合理性提供了客观依据。
参考文献
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