作者：贺成，唐晓晶，陈玉武，秦文杰，叶祖光
【摘要】 目的 建立沙苑子中沙苑子苷的含量测定方法，考察沙苑子炮制前后沙苑子苷的含量变化。方法 采用高效液相色谱法，Apollo-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸溶液(21∶79)为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长为266 nm。结果 沙苑子苷在0.041 6～0.665 6 μg范围内线性关系良好(r＝0.999 9)，平均加样回收率为100.6%，RSD＝0.73%。结论 本法简便、准确、重复性好、专属性强，为沙苑子药材质量控制提供了方法。盐炙可导致沙苑子中沙苑子苷含量下降。
【关键词】 沙苑子；沙苑子苷；高效液相色谱法；含量测定
Abstract：Objective To establish a method for the determination of complanatuside in Semen Astragali Complanati， and study the content change of complanatuside processed. Method HPLC was used with Apollo-C18 column (4.6 mm×250 mm， 5 μm)， acetonitrile-0.1%phosphoric acid (21∶79) as mobile phase， the flow rate at 1.0 mL/min， and detected wavelength was set at 266 nm. Result Complanatuside showed a good linearity relationship in the range of 0.041 6～0.665 6 μg， r＝0.999 9. The average recovery was 100.6%， RSD was 0.73%. Conclusion The method is simple， accurate， reproducibility and strong specificity. It can be used for the quality control of Semen Astragali Complanati. Processing with salt can lead to content decrease of complanatuside in Semen Astragali Complanati.
Key words：Semen Astragali Complanati；complanatuside；HPLC；content determination
沙苑子为豆科植物扁茎黄芪Astragalus complanatus R.Br.的干燥成熟种子，主要分布于陕西、内蒙。味甘、性温，归肝、肾经，具有温补肝肾、固精、缩尿、明目等功效，用于肾虚腰痛、遗精早泄、白浊带下、小便余沥、眩晕目昏等病症[1]。近年来对其生药鉴别、药理活性及化学成分研究均有报道[2]。《中华人民共和国药典》2005年版收载沙苑子炮制方法为净制法(即除去杂质，洗净，干燥)、盐炙法(照每100 kg净药材用食盐2 kg的比例，将食盐用适量水溶解后，滤过，备用。取净沙苑子，用盐水拌匀。闷透，置锅内，以文火加热，炒干。炒至表面鼓起，色泽加深，呈深褐绿色或深灰褐色，取出，放凉即可)。
国内相继有对沙苑子中沙苑子苷含量测定的报道[3-4]。但是，有关沙苑子炮制前后指标成分的含量变化研究尚未见报道。笔者收集了10批样品，采用高效液相色谱(HPLC)法测定沙苑子苷的含量，并进行了炮制前后沙苑子苷含量比较，为制定沙苑子的质量标准提供了方法和依据。
1 仪器与试药
Agilent 1200 series高效液相色谱仪。乙腈为色谱纯，乙醇、磷酸为分析纯，水为超纯水(自制)。
沙苑子药材样品10批，由中国药品生物制品检定所标本馆馆长张继老师鉴定，均为豆科植物扁茎黄芪Astragalus complanatus R.Br.的干燥成熟种子。沙苑子苷对照品为自制，由沙苑子药材中分离，经理化性质及波谱数据(UV、1H-NMR、13C-NMR、MS)鉴定为鼠李柠檬素3，4’-O-β-D-双葡萄糖苷，并用HPLC面积归一化法测定，其纯度为98.63%。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Apollo-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(21∶79)；流速1.0 mL/min；检测波长为266 nm；柱温25 ℃。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取沙苑子苷对照品适量，加60%乙醇制成每1 mL含15 μg的沙苑子苷，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品粉末(过3号筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 系统适用性试验
依上述色谱条件，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定(色谱图见图1)。理论塔板数按沙苑子苷峰计算应不低于4 000。
通过Agilent 1200二极管阵列检测器(DAD)检测样品，对样品中沙苑子苷峰进行了单一性验证(峰纯度检查)，其光谱重叠程度好，纯度因子(purity factor)为999.432，大于设定的阈值(Threshold)990，表明样品中沙苑子苷峰纯度较好。
2.5 线性关系考察
精密称取沙苑子苷5.20 mg，置于50 mL量瓶中，加60%乙醇溶解并定容，制成标准品储备液。分别精密量取此标准储备液0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mL至10 mL量瓶中，加60%乙醇溶解并定容至刻度，即得系列浓度依次为4.16、8.32、16.64、33.28、66.56 μg/mL的对照品溶液。分别进样10 μL，测定峰面积。以进样浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。其回归方程为：Y＝12.396X＋0.102(r＝0.999 9)，结果表明，沙苑子苷进样浓度在0.041 6～0.665 6 μg范围内呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液，注入液相色谱仪，连续进样6次，每次10 μL，测定沙苑子苷的峰面积，计算RSD＝0.57%，表明本色谱条件下的仪器精密度良好。
2.7 稳定性试验
取同一供试品溶液，于配制后0、2、4、6、8、10、12、24 h分别进样，依法测定。沙苑子苷峰面积RSD＝1.18%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.8 重复性试验
精密称取同一批沙苑子药材6份，制成供试品溶液，分别依法测定。结果沙苑子苷含量分别为0.072 6%、0.072 3%、0.071 3%、0.072 0%、0.072 0%、0.072 5%，平均含量为0.072 1%，RSD＝0.64%。表明重复性良好。
2.9 加样回收率试验
精密称取已知含量(含沙苑子苷0.0721%)的同一沙苑子药材粉末0.25 g，共6份。分别精密加入沙苑子苷对照品溶液(104 μg/mL)2 mL，按“2.3”项下方法制备供试液，进行测定。结果平均回收率为100.6%，RSD＝0.73%，表明本法准确度符合要求。见表1。表1 加样回收率试验结果(略)
2.10 样品测定
共测定10批样品，沙苑子药材及盐沙苑子中沙苑子苷含量(按干燥品计算)见表2。表2 沙苑子及盐沙苑子中沙苑子苷的含量测定结果(略)
3 讨论
迄今，历年版《中华人民共和国药典》均未收载沙苑子的含量测定方法。药效试验表明，沙苑子中黄酮类成分有降脂保肝的作用[2]，这与药典收载的沙苑子温补肝肾的功能与主治相一致。研究发现，沙苑子苷有较明显的抗血小板聚集作用[5]，故选择黄酮类成分中含量较高的沙苑子苷作为沙苑子含量测定的 指标性成分。
以沙苑子苷的含量为指标，对提取溶剂、提取方法和提取时间进行了优选，结果以60%乙醇回流提取1 h含量最高。沙苑子为种子类药材，含有油脂性成分，但由于提取溶剂为稀乙醇，试验比较后发现不脱脂直接提取测定与脱脂后提取测定未见差异，故确定不增加脱脂步骤。盐沙苑子色谱图与沙苑子基本相同，在沙苑子苷峰的前后均无新的干扰峰出现，不影响测定。
试验所用炮制品(盐沙苑子)均由相对应的沙苑子原药材加工制成。测定比较后发现，盐沙苑子中沙苑子苷的含量较沙苑子原药材有所下降，说明炒制过程中温度较高，沙苑子苷(熔点278 ℃)受到破坏。鉴于目前炮制工艺仍然停留在主观控制的水平，因此有必要对其炮制工艺进行系统的规范化研究，以确定客观的炮制工艺指标，保证其饮片的质量。
通过测定发现，陕西渭南产沙苑子中沙苑子苷含量最高，与我国古代确认的道地药材相吻合。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2000.127.
[2] 肖培根.新编中药志[M].北京：化学工业出版社，2002.56.
[3] 张建军，闫兴丽，张玉杰，等.HPLC测定沙苑子中沙苑子苷A的含量[J].中国中药杂志，2005，30(8)：600.
[4] 刘春宇，孙雄华，张经硕，等.RP-HPLC法测定沙苑子中沙苑子苷[J].中草药，2005，36(7)：1084.
[5] 薛 智，陈玉武，张永文，等.沙苑子抗血小板凝集有效成分的研究[J].中日友好医院学报，1987，1(2/3)：58－63.