【摘要】 目的 观察复明片对视网膜脱离(retinal detachment，RD)及复位视网膜组织中三磷酸腺苷(ATP)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。方法 将48只家兔随机分为4组，每组12只，采用视网膜下腔注射透明质酸钠的方法建立RD动物模型，10～14 d后视网膜自动复位。正常组、模型组给予生理盐水，西药组给予西药混合溶液，复明片组给予复明片混悬液灌胃，并于造模后1周(视网膜脱离未复位)及造模后3周(视网膜复位早期)进行各组兔视网膜组织ATP、MDA含量及SOD活性测定。结果 复明片能在视网膜脱离时及复位后提高视网膜组织ATP含量及SOD活性，降低脂质过氧化产物MDA的含量，效果类似于ATP、维生素B1、维脑路通混合制剂。结论 复明片能明显改善视网膜能量供应，提高视网膜抗氧化能力，减轻脂质过氧化反应，在一定程度上减轻或延缓视网膜病变的发展。
【关键词】 视网膜脱离复位；复明片；三磷酸腺苷；丙二醛；超氧化物歧化酶；动物模型
Abstract： Objective To observe the effect of Fuming Tablet on the content of ATP and MDA， and the activity of SOD in retinal tissue of rabbit retinal detachment (RD) and reattachment model. Methods 48 rabbits were randomly pided into 4 groups， with 12 in each. 12 rabbits were taken as healthy control and fed with normal saline， the others in model group， western medicine group and Fuming Tablet group were prepared as RD model by injecting Sodium Halyuronate (Helen) into subretinal spaces， and the detached retinas were reattached automatically in 10～14 days. They were administered with normal saline， mixed preparation of western medicines and Fuming Tablet suspension respectively， then the content of ATP， MDA and SOD activity were determined in postoperative 1 week (the retina remained detached) and 3 weeks (the detached retina reattached). Results Effect of fuming tablet of increasing the content of ATP and the activity of SOD， reducing the content of MDA was similar with that of the mixed preparation of ATP， VitB1 and Venoruton. Conclusion Fuming Tablet can significantly improve the oxidation resistance and depress the lipid peroxidation of retinal tissue， thus alleviate and inhibit the development of retinal pathological changes to some extent.
Key words：retinal detachment and reattachment；Fuming Tablet；ATP；MDA；SOD；animal model
视网膜脱离(RD)是临床常见的致盲眼病，对视功能损伤极大。随着基础研究的深入和临床手术技术的发展，RD后的解剖复位率较高，但成功的RD复位手术并不意味着患者视力的恢复。如何提高患者的视功能是临床亟须解决的问题。现代医学一般是在术后应用扩血管和营养神经的药物，尚无公认的有针对性的药物；中医药在这方面有较好疗效，患者往往求治于中医。我们采用通过长期临床经验总结而成的院内制剂复明片治疗RD术后患者，取得了较好的临床疗效[1]。为了探讨其作用机理，2004年2月－2004年10月经动物实验观察了此药对RD及复位后三磷酸腺苷(ATP)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。
1 实验材料
1.1 动物
成年健康家兔48只，体重2.0～2.5 kg，雌雄各半，湖南中医药大学实验动物中心提供。
1.2 药物
复明片由黄芪、生地黄、茯苓、车前子、地龙、赤芍、红花、白术等中药按现代制剂制备工艺制成，0.3 g/片，选用同一批号药物，湖南中医药大学附属第一医院药剂科提供。使用时去掉糖衣，研成粉末，温开水混合，配制成浓度为10%的混悬液。西药混合溶液：包含三磷酸腺苷二钠片(A.T.P.)，20 mg/片，福建古田药业有限公司生产，批号040327-1；维生素B1，10 mg/片，湖北华中药业有限公司生产，批号20040301；维脑路通，60 mg/片，山西晋新药业集团有限公司生产，批号040311。使用时将3药研成粉末，温开水混合，配制成每升水含维生素B1 276 mg、ATP 1 102 mg、维脑路通734 mg的混合溶液。
1.3 试剂
ATP测试盒、SOD测试盒、MDA测试盒由南京建成生物工程研究所提供。
2 实验方法
2.1 分组、给药及标本采集方法
48只成年健康有色家兔随机分成4组，分别为正常组、模型组、西药对照组、复明片组，每组12只兔24只眼。除正常组外，其余3组兔参照文献[2]方法造成视网膜脱离动物模型。造模后第2天开始给药，正常组与模型组予温开水灌胃，5 mL/kg，每日1次。西药组予西药混合溶液灌胃，5 mL/kg；复明片组予复明片混悬液灌胃，3.3 mL/kg，均为每日1次(相当于成人等效最大剂量)。连续灌胃1周后，各组随机抽取6只兔，用25%乌拉坦麻醉，即刻摘除眼球，在解剖显微镜下剥离脱离部位视网膜(正常组取相应部位)，用滤纸吸干水分，电子天平称其湿重，再用双蒸水按照湿重∶体积＝1∶19配制成5%的视网膜匀浆液。各组余兔继续灌胃2周后，同法采集视网膜匀浆液。
2.2 观察指标与方法
取视网膜匀浆液，用无机磷测定法测ATP含量、用硫代巴比妥酸法测MDA含量、用黄嘌呤氧化酶法测SOD活性。操作严格按照试剂盒说明书进行。
2.3 统计学方法
所有实验数据以x±s表示，用SPSS12.0进行统计学处理。先做方差齐性检验，方差齐者用方差分析，组间比较用q检验。方差不齐者作数据转换变为方差齐后，再行方差分析和q检验。
3 结果
（见表1～表3）表1 视网膜组织Na+-K+转运ATP酶活性变化（略）
注：与正常组比较，*P&<0.05，**P&<0.01；与模型组比较，▲P&<0.01
(下同)。表2 视网膜组织SOD活性变化（略）表3 视网膜组织MDA含量变化（略）
4 讨论
RD后视网膜外层营养供应中断，组织缺氧，一方面通过黄嘌呤脱氢酶向氧化酶转化，另一方面由于内源性自由基清除酶系(如SOD)降低而产生大量自由基。氧自由基的生成和积聚使细胞及亚细胞膜发生脂质过氧化反应，脂质过氧化产物MDA可从多方面对膜结构产生损伤，并造成膜的运输过程紊乱。Na+-K+转运ATP酶是生物膜的标志酶，其位于磷脂膜的两侧，而磷脂是生物膜的重要组成部分，并对不饱和脂肪酸有重要作用。ATP酶活性减低直接反映视网膜能量代谢发生障碍，能量来源短缺，依靠耗能起作用的“离子泵”运转趋于停止，其中Na+-K+转运ATP酶还参与神经兴奋和传递功能所必需的膜电位的生成，此泵功能如停止，视网膜就不能产生和传导兴奋，视功能势必严重受损[3-4]。对实验性RD的研究发现，视网膜组织MDA含量随病程发展逐渐增高，SOD活性随病程发展逐渐降低，Na+-K+转运ATP酶活性逐渐降低[5]；RD患者视网膜下 [6]、血液及玻璃体内均存在较多的脂质过氧化反应产物[7]，其含量与眼部病变程度呈正相关，并与增生性玻璃体视网膜病变密切相关。
RD时视网膜组织缺血缺氧；视网膜复位后，其缺血缺氧的状态也未能完全得以解除，无论是玻璃体视网膜手术还是巩膜扣带术，术后患者视网膜血流量、血流速、红细胞移动速率均降低，术中硅油填充亦影响患者的眼底血流量及红细胞移动速率[7]。虽然严重缺血综合征少见，但很多眼球都处于亚临床缺血缺氧状态，由其导致的病理损害在术后仍广泛存在。因此，在视网膜复位后，仍有进一步改善视网膜组织血氧供应的必要。
复明片由黄芪、茯苓、地龙、赤芍、红花、白术等中药按君臣佐使配伍而成，具益气活血利水之功。本实验发现，复明片能在视网膜脱离时及复位后两个时相提高网膜组织ATP含量及SOD活性，降低脂质过氧化产物MDA含量，其效果类似于ATP、维生素B1、维脑路通混合制剂(P&>0.05)。这表明复明片能改善视网膜能量供应、提高视网膜抗氧化能力、减轻脂质过氧化反应，由此在一定程度上减轻或延缓视网膜病变的发展。这可能是复明片促进视功能恢复的机制之一。
参考文献
[1] 彭清华，罗 萍，李伟力.益养活利法对视网膜脱离术后视功能的临床观察[J].辽宁中医杂志，1996，(2)：21－23.
[2] 彭清华，朱志容，陈 吉，等.视网膜脱离复位动物模型的建立[J].中国中医眼科杂志，2005，2(3)：153－155.
[3] Shvedova AA， Alekseeva OM， Kuliev LYA. Damage of photoreceptor membrane lipids and proteins induced by photosensitized generation of single oxygen[J].Curr Eye Res，1982，2(10)：683－689.
[4] 曹锡清.脂质过氧化对细胞和机体的作用[J].生物化学与生物物理学 进展，1986，(2)：18－24.
[5] 李玉军，郭希让，陈玉枝.实验性视网膜脱离组织脂质过氧化与Na+-K+转运ATP酶活性的改变[J].中华眼底病杂志，1998，9(3)：170－171.
[6] 田清芬，郭希让，尹卫靖.视网膜脱离PVR形成与脂质过氧化关系的实验研究[J].眼科研究，1999，6(3)：220－222.
[7] 陈 松，韩 梅，张珑俐，等.应用共焦扫描激光多普勒视网膜血流分析仪检测视网膜脱离术后患者眼底血流参数[J].中华眼科杂志，2002， 38(3)：140－143.