白癜灵颗粒质量标准分析

【摘要】 　　目的 提高白癜灵颗粒的质量标准。方法 采用薄层色谱法鉴别紫草、地榆；高效液相色谱(HPLC)法测定制何首乌中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，色谱条件：使用C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈-水(1∶4)为流动相，检测波长为320 nm。结果 薄层色谱斑点清晰，易于识别；HPLC法测定2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量在26.84～134.20 μg/mL范围内呈现良好的线性关系，r=0.999 8，平均回收率为101.2%，RSD=1.3%。结论 所建立的标准方法简单，专属性强，结果准确可靠，可以用作白癜灵颗粒的质量控制方法。

【关键词】 紫草 地榆 HPLC 回收率 苯乙烯类 葡糖苷类 薄层色谱法 颗粒剂 质量控制

　　【Abstract】 Objective To improve the standard of quality of Baidianling Granules.Methods Radix Arnebiae and Radix Sanguisorbae were distinguished by thin layer chromatogrphy (TLC). 2，3，5，4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside in Prepared Radix Polygoni Multiflori was determined by HPLC. The C18 column (250×4.6mm， 5μm) was used.The mobile phase was acetonitrile- water (1∶4). The wavelength of detector was set at 320nm.Results The spots were clear in TLC and could be identified easily. The linear detection range of 2，3，5，4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside was in 26.84～134.20 μg/mL，r=0.9998.The average recovery was 101.2% and RSD was 1.3%.Conclusion This method is simple and accurate with a good reproducibility and can be used for the quality control of Baidianling Granules.

　　【Key words】 Radix Arnebiae;Radix Sanguisorbae;HPLC;Recovery;Styrene class;Glucose glucoside class;Thin layer chromatography；Granular formulation；Quality control

　　白癜灵颗粒是河北省廊坊市中医医院研制的制剂(冀药制字Z20051453)，由制何首乌、当归、红花、丹参、紫草、地榆、墨旱莲、郁金、牡丹皮、石决明、刺蒺藜、陈皮等12味中药经提取制成，具有养血活血、调补肝肾的功效，用于白癜风的治疗。方中制何首乌具有补肝肾、益精血的功效［1］，为君药；紫草、地榆具有凉血、活血、解毒的功效［1］，共为臣药。原质量标准只有丹参及陈皮的理化鉴别，不能有效地控制白癜灵颗粒的内在质量。本研究建立了白癜灵颗粒中制何首乌的有效成分2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法，增加了紫草、地榆的薄层鉴别，为进一步完善白癜灵颗粒的质量标准提供了科学的依据。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器

　　SSI PC-3000高效液相色谱仪(天津先德科学仪器有限公司)；Sartorius BP-211D电子天平(赛多利斯仪器有限公司)；AE-260电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；SK3200LH超声清洗仪(上海科导超声仪器有限公司)。

　　1.2 试药

　　2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号为110844-200505，供含量测定用)；紫草、地榆对照药材(中国药品生物制品检定所提供，批号分别为121430-200401、121286-200402)；白癜灵颗粒样品3批(规格：每袋15 g，批号：060621、070719、070906)及缺紫草、地榆、制何首乌的阴性样品各1批，均由河北省廊坊市中医医院提供；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

　　2 紫草、地榆的定性鉴别

　　2.1 紫草的薄层鉴别

　　取白癜灵颗粒样品15 g，研细，加石油醚(60～90℃)50 mL，超声处理15 min，滤过，滤液挥去石油醚，残渣加丙酮1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺紫草的阴性对照样品15 g，同法制成阴性对照溶液。再取紫草对照药材1 g，加石油醚(60～90℃)20 mL，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法［1］试验，吸取上述3种溶液各5 mL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶5∶0.5∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点；再喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，斑点变为蓝色。阴性对照未出现相对应的斑点。见图1(封3)。

　　2.2 地榆的薄层鉴别

　　取白癜灵颗粒样品15 g，研细，加水50 mL，煮沸30 min，放冷，离心10 min，取上清液，用盐酸饱和的乙醚振摇提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺地榆的阴性对照样品15 g，同法制成阴性对照溶液。再取地榆对照药材2 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法［1］试验，吸取上述3种溶液各5 mL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯(用水饱和)-乙酸乙酯-甲酸(6∶3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照未出现相对应的斑点。见图2(封3)。

　　3 2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的高效液相色谱(HPLC)法含量测定

　　3.1 色谱条件

　　phenomenex C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-水(1∶4)，流速1 mL/min，检测波长320 nm，进样量10 μL。按此色谱条件测定，理论板数按2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰计应不低于4 000。

　　3.2 对照品溶液的制备

　　精密称取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品12.5 mg，置25 mL量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取5 mL，置25 mL量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

　　3.3 供试品溶液的制备

　　取白癜灵颗粒供试品10袋的内容物，混匀，取适量研细，精密称取7.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用稀乙醇补足减失的质量，滤过，取续滤液，以微孔滤膜(0. 45 μm)滤过，取滤液作为白癜灵颗粒供试品溶液。

　　3.4 线性关系考察

　　精密称取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品13.42 mg，置50 mL量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密吸取上述溶液1、2、3、4、5 mL，置10 mL量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，制成浓度为26.84、53.68、80.52、107.36、134.20 μg/mL的对照品溶液，依次进样10 μL，测定峰面积。以对照品的浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标进行线性回归，得回归方程为：Y=37 900X－134 524，相关系数r=0.999 8(n=5)，结果表明2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在26.84～134.20 μg/mL范围内线性关系良好。

　　3.5 稳定性试验

　　取供试品溶液在室温下放置0、2、4、8、24 h，分别进样10 μL，记录2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面积，结果峰面积RSD为0.82%。

　　3.6 精密度试验

　　精密吸取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液(C=0.048 12 mg/mL)10 μL，连续进样6次，结果峰面积RSD为0.97%。

　　3.7 重复性试验

　　取同一批号白癜灵颗粒供试品6份，每份7.5 g，按样品测定方法测定。供试品中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量平均值为0.575 mg/g，RSD为1.12%。

　　3.8 专属性试验

　　取缺制何首乌阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图(见图3)。供试品色谱图中，呈现与2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品保留时间相同的色谱峰，阴性对照无干扰。

　　3.9 加样回收率试验

　　取已知含量(0.575 mg/g)的样品6份，精密称取各3.75 g，分别精密加入2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品，按样品测定方法操作，测得平均回收率为101.2%，RSD=1.3%。见表1。表1 2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷加样回收率试验结果（略）

　　3.10 样品的测定

　　精密称取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，照上述对照品溶液的制备方法制成对照品溶液。取供试品3批，照上述供试品溶液的制备方法制成供试品溶液。分别精密吸取对照品及供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按3.1色谱条件测定供试品中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量。见表2。表2 2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷样品含量测定结果（略）

　　4 讨 论

　　4.1 样品提取时间的选择

　　采用稀乙醇作为溶剂，提取时选用回流提取，提取时间分别为20、30、40、60、90 min，其他同供试品测定方法操作，结果供试品提取时间为60 min时，2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量最高，经回收试验证明提取方法可行。

　　4.2 流动相比例的选择

　　采用了乙腈-水系统，由于样品中成分比较复杂，通过比较供试品中待测成分的分离情况，确定了乙腈-水(1∶4)的比例，使待测成分得到较好的分离；同时在方法学考察中，也研究了柱温对测定的影响，结果表明柱温对本试验无明显影响。

　　4.3 本研究建立的高效液相色谱法测定白癜灵颗粒中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，具有操作简便、分析条件易于控制等优点，具备较好的重现性和较高的精密度，为进一步完善白癜灵颗粒的质量标准提供了科学的依据。

参考文献