关于妊娠期外阴阴道假丝酵母菌病与阴道局部免疫环境变化

【摘要】 目的 了解妊娠期妇女阴道局部免疫特点，探讨妊娠期外阴阴道假丝酵母菌病的免疫学发病机理。 方法 选取 2005年 9月至 2006年8月在卫生部北京医院妇产科门诊就诊及进行健康体检的育龄妇女，分为妊娠外阴阴道假丝酵母菌病组(妊娠VVC，50例)、单纯外阴阴道假丝酵母菌病组(单纯VVC，55例)、正常对照组(35例)，经显微镜镜检初步筛选，留取阴道灌洗液，离心后分离上清液、淋巴细胞和上皮细胞成分。用ELISA法测定IgE浓度、流式细胞仪检测淋巴细胞表面免疫标志CD 4、CD 8。 结果 IgE水平妊娠VVC组为(1.903±0.274)g/L，单纯VVC组为(2.032±0.289)g/L，正常对照组为(1.347±0.287)g/L，妊娠VVC组与单纯VVC组和对照组比较，单纯VVC组与正常对照组，差异均有统计学意义(P&<0.05);妊娠VVC组CD 4+细胞数、CD 4 /CD 8均低于正常对照组，CD 8+细胞数高于正常对照组，差异均有统计学意义(P&<0.05)。 结论 阴道局部免疫环境变化参与妊娠期VVC发病。

【关键词】 外阴阴道假丝酵母菌病;妊娠;免疫

　　【Abstract】 Objective To examine the local immune condition of vagina， and to investigate the immunological pathogenesis of vulvovaginal candidiasis during pregnancy.MethodsWomen who visited Beijing Hospital for prenatal care or for health examination during September 2005 to August 2006 were chosen and pided into three groups: pregnant women with vulvovaginal candidiasis (pregnant VVC group， 50 cases)， nonpregnant women with VVC (nonpregnant VVC group， 55 cases)， healthy women (control group， 35 cases). After primary microscopical screening， vaginal lavage was centrifuged to separate supernatant， lymphocyte and epithelium. Concentration of IgE was measured by ELISA， and surface immunological markers of CD4 and CD8 were detected by flow cytometer.ResultsIgE concentration of the pregnant VVC group was lower than that of the nonpregnant VVC group， but higher than that of the control group (all Ps&<0.05). CD4+ cells and CD4 /CD8 ratio for the pregnant VVC group were lower than those of the control group (P&<0.05). However， CD8+ cells for the pregnant VVC group was higher than that of the control group (P&<0.05).ConclusionThe changes in immune environment of vagina may play a role in the pathogenesis of pregnant vulvovaginal candidiasis.

　　【Key words】 Vulvovaginal candidiasis， Pregnancy， Immunity.

　　外阴阴道假丝酵母菌病(vulvovaginal candidiasis， VVC)是一种常见的妇产科感染性疾病，可引起外阴瘙痒不适，严重时可影响工作和生活。妊娠期妇女假丝酵母菌感染率明显高于非孕妇女，妊娠合并假丝酵母菌感染可导致一系列妊娠合并症的发生。影响妊娠期VVC发病的因素很多，了解其发病机理将对其防治有重要指导意义。本实验通过免疫指标的测定了解阴道局部免疫环境与妊娠期VVC的关系，从而更全面、更深入的认识妊娠期VVC。

　　对象与方法

　　一、对象

　　2005年 9月至 2006年8月在卫生部北京医院妇产科门诊就诊及进行健康体检和产前检查的已婚育龄妇女140例为研究对象，按疾病类型分为妊娠期VVC组，50例，平均年龄(29.4±7.0)岁，单纯VVC组，55例，平均年龄(31.52±8.2)岁，正常对照组，35例，平均年龄(32.6±7.9)岁，3组年龄比较，差异无统计学意义(P&>0.05)。所有研究对象均除外内外科疾病和免疫系统疾病，3年内均未进行免疫接种，除外特殊药物和食物服用史，并知情同意。妊娠VVC组孕妇，1周内无阴道上药和阴道冲洗，无孕期合并症，妇科检查见 VVC典型豆渣样分泌物，清洁度I度，未见滴虫，镜检见假丝酵母菌菌丝及芽孢;单纯VVC组月经规律，3个月内未服用甾体类激素，1周内无阴道上药和阴道冲洗，妇科检查见 VVC典型豆渣样分泌物，清洁度 I度，未见滴虫，镜检见假丝酵母菌菌丝及芽孢;正常对照组月经规律，3个月内未服用甾体类激素，1周内无性生活和阴道冲洗，妇科查体无异常，无内科合并症。

　　二、方法

　　1.诊断标准：依照参考文献[1]的诊断标准，有典型临床症状和体征，经妇科检查取阴道分泌物，外阴阴道假丝酵母菌镜检阳性者诊断为VVC。

　　2.标本采集和检测：所有对象均以15 ml生理盐水冲洗宫颈管(于宫颈外口通过注射器注入生理盐水后回抽)、阴道上段，于后穹窿吸取灌洗液约14～15 ml，所有灌洗液中均不含血液成分。所得灌洗液以1 500 r/min离心5 min(长沙平凡仪器仪表公司的TDZ5WS型台式低速离心机)，分离上清液及细胞成分，细胞成分再用密度梯度离心法分离淋巴细胞和上皮细胞，分别放置于液氮中30 min后，于-80 ℃冰箱冻存。上清液采用ELISA方法(晶美生物工程有限公司的人IgE ELISA试剂盒，Labsystems Dragon公司的Wellscan MK3酶标仪)测定免疫因子IgE。淋巴细胞采用流式细胞学方法(BD公司的FACS流式细胞仪)测定细胞表面免疫标志(CD 4、CD 8)。为除外标本中过多的死细胞对流式细胞学准确性的影响，流式细胞仪检查前，显微镜下观察细胞，活细胞数&<80 %或细胞浓度1 ml&<1×106个的标本被排除，妊娠VVC组、单纯VVC组和正常对照组分别为35、34和22例进行CD4和CD8+细胞数检测。

　　3.统计学处理：所有数据分析用SPSS 10.0分析软件包完成。计量数据比较采用方差(F)分析，计数资料或等级资料采用χ2或秩和检验，双侧检验的显著性水准为α=0.05。

　　结 果

　　一、体液免疫水平比较

　　IgE水平，妊娠VVC组为(1.903±0.274)g/L，单纯VVC组为(2.032±0.289)g/L，正常对照组为(1.347±0.287)g/L，妊娠VVC组低于单纯VVC组、高于正常对照组，单纯VVC组高于正常对照组，差异有统计学意义(P&<0.05)。

　　二、细胞免疫水平比较

　　CD 4+细胞数，妊娠VVC组、单纯VVC组均低于正常对照组，差异有统计学意义(P&<0.05)，妊娠VVC组与单纯VVC组比较，差异无统计学意义(P&>0.05);CD8+细胞数，妊娠VVC组、单纯VVC组均高于正常对照组，差异均有统计学意义(P&<0.05)，妊娠VVC组与单纯VVC组比较，差异无统计学意义(P&>0.05);CD 4/CD 8比值，妊娠VVC组和单纯VVC组均低于正常对照组，差异有统计学意义(P&<0.05)，妊娠VVC组与单纯VVC组比较，差异无统计学意义(P&>0.05)，见表1。表1 3组细胞免疫水平比较

　　讨 论

　　妊娠期由于雌激素的增加使阴道黏膜充血、水肿、通透性增强，同时宫颈腺体分泌明显增加，致使阴道分泌物显著增多。高水平的雌激素导致高糖原含量的阴道环境，从而为假丝酵母菌的生长和黏附提供了丰富的糖原，所以妊娠期是VVC的好发阶段。Tarry等[2]对雌激素敏感的假丝酵母菌进行研究发现，这类白假丝酵母菌通过表达具有高亲和性的雌激素结合蛋白(estrogenbindingprotein，EBP)与雌激素相互作用，从而大大增加其在阴道内的寄居，进一步形成假菌丝，增强假丝酵母菌的毒力。雌激素既能与假丝酵母菌结合，又能促进其生长，提高其毒力，使得妊娠期VVC的临床治愈率明显降低，并且由于对胎儿健康的考虑，治疗常不彻底，易导致复发[3]。通过本实验结果可看出，妊娠VVC组IgE浓度、CD 4+、CD 8+细胞水平和CD 4/CD 8比值均与正常对照组比较，差异均有统计学意义(P&<0.05)，且IgE浓度与单纯VVC组比较也有差异，说明妊娠期VVC存在阴道局部的免疫异常。IgE介导Ⅰ型超敏反应。假丝酵母菌经阴道黏膜上皮间的通道转运并与其特异性的IgE结合，其结合诱导肥大细胞去颗粒并放出组织胺及其他炎症介导物，引起阴道炎症状。此外，组织胺是前列腺素E 2的潜在诱导物，后者是T 淋巴细胞活化的免疫抑制物。因为单核淋巴细胞控制着阴道黏膜表面的假丝酵母菌浓度，前列腺素E 2介导的免疫抑制使在阴道的假丝酵母菌繁殖，故假丝酵母菌性阴道炎是继发于过敏性阴道炎的。IgE浓度与正常对照组和单纯VVC组比较，差异有均统计学意义(P&<0.05)，可能妊娠期存在阴道局部免疫抑制，较非妊娠期过敏反应小，IgE浓度低于单纯VVC组。通过对T细胞分离，纯化CD 4+T比CD 8+T抗假丝酵母菌感染更有效，CD 4+T细胞发挥明显的局部防御功能，CD 4+细胞计数偏低造成免疫功能低下，当CD 4+细胞计数低于200个细胞/mm3时，可能发生VVC[4]。妊娠VVC组CD 4+细胞数减少和CD 4/CD 8比值下降，说明妊娠期阴道局部存在免疫异常，以免疫抑制为主，局部免疫功能低下或缺陷，局部防御机制下降，造成VVC在妊娠期易发作且不易治疗。

　　影响妊娠期VVC的发病因素是多方面的，免疫因素参与了妊娠期VVC的发生，是否可以用免疫疗法治疗妊娠期VVC目前还有待进一步研究。

【参考文献】
　1乐杰， 主编.妇产科学[M].第6版.北京：人民卫生出版社，2004，259261.

　　2Tarry W， Fisher M，Shen S，et al.Candida albicans:the estrogen target for vaginal colonization[J].JSurgRes，2005，129(2)：278282.

　　3凌秀风.外阴阴道念珠菌感染研究进展[J].国外医学妇幼保健分册，2003，14(3)：152155.

　　4Shifrin E， M atityahu D，Feldman J，et al.Determ inants of incident Vulvovaginal candidiasis in human immunodeficiency viruspositive woman[J]. Infect Dis Obstet Gynecol，2000，8(34)：176180.