关于CNTF、PDGF在成年猫背根节的分布

　　　　　　　　 作者：张连双 王希锋 李雅娜 张洪芹 赵伟 时彦 王东 刘桂香

【摘要】 目的 观察睫状神经营养因子（CNTF）、血小板源性生长因子（PDGF）在成年猫背根节(dorsal root ganglion， DRG)的表达情况。方法 成年健康雄猫5只，心内灌注固定后，随机取一侧L6背根节制作厚20 μm冰冻切片，采用免疫组织化学ABC法染色，观察CNTF、PDGF在正常背根节的分布。结果 CNTF、PDGF在成年猫背根节的大、中小神经元均有表达，但以中小神经元的表达为主；阳性反应物主要定位在胞浆；部分纤维也呈阳性反应，未见明显的卫星细胞着色。结论 CNTF、PDGF在成年猫的背根节有表达，可能与背根节神经元的生理功能有关。
【关键词】 睫状神经营养因子；血小板源性生长因子；背根节；免疫组织化学；猫
　　【Abstract】 Objective To investigate the distribution of ciliary neurotrophic factor(CNTF) and plateletderived growth factor(PDGF) in dorsal root ganglion(DRG) of adult cat.Methods Five healthy male adult cats were used and 20μm thick sections of L6 DRGs were cut with a cryostat. The sections were stained for CNTF and PDGF by immunohistochemical ABC method. Results CNTF and PDGF immunoreactants were distributed in large and mediumsmall sized neurons. Positive reactivity was mainly located in cytoplsma. Some fiber was also positive.Conclusion CNTF and PDGF are expressed in DRG of adult cat.
　　【Key words】 ciliary neurotrophic factor (CNTF)，plateletderived growth factor(PDGF)，dorsal root ganglion，imumunohistochemistry，cat
　　CNTF、PDGF是神经营养因子家族的两个成员。大量的研究显示，它们的生理作用不仅涉及神经元存活、增殖、分化和促进神经突起生长，而且对损伤后的神经再生亦有促进作用。已有实验表明，CNTF和PDGF在部分背根切断后的备用背根节表达有改变［１］。但CNTF、PDGF在正常成年猫背根节的分布报道不多。本实验的目的亦在了解该两因子在正常成年猫DRG的分布。
　　1 材料与方法
　　1．1 取材 成年健康雄猫（体重3～3.5 kg）5只，3.5%戊巴比妥钠（1.3 ml/ kg）腹腔注射麻醉，4％多聚甲醛心内灌注固定。随机取L6 DRG后固定12 h，再置于20％蔗糖PBS中下沉，恒冷箱纵切片，片厚20 μm，入0.01M PBS备用。
　　1．2 免疫组化染色 用免疫组织化学ABC法染色，所用抗体为兔抗CNTF（1∶500，Sigma），PDGF(1∶200，北京中山)。对照组用PBS代替一抗，结果阴性。
　　1．3 结果观察 在显微镜下观察CNTF、PDGF阳性产物在DRG中的分布。
　　2 结果
　　在Olympus显微镜下进行观察。按照文献报道，将背根节的神经元分为大、中小两类［２］。本实验观察到CNTF、PDGF在成年猫背根节的大、中小神经元均有表达，但以中小神经元的表达为主。阳性反应物主要定位在胞浆，部分纤维也呈阳性反应。未见明显的卫星细胞着色（见图1、图2）。
　　3 讨论
　　CNTF、PDGF在成体DRG的分布报道较少。顾晓松等［3］ 用原位杂交法显示，脊髓表达CNTF mRNA的部位主要在脊髓白质的前索和外侧索，而在脊髓灰质未见到明显的CNTF mRNA阳性信号。CNTF在成体DRG的分布报道较少。越来越多的证据表明，CNTF对感觉神经元有明显的营养作用。文献报道，在体外采用无血清培养鸡胚的背根节神经元和脊髓前角的运动神经元，加入不同浓度的人重组CNTF，背根节神经元对CNTF的缺乏更敏感［４］。本实验观察到CNTF在L6 DRG有表达，推测其可能是DRG自身合成或从外周靶器官摄取，而非脊髓运输而来。提示CNTF与成年猫DRG神经元的生理功能有关，对DRG神经元起营养作用。

实验显示，在出生后的所有时段，大鼠DRG的神经元都可以表达PDGF及其受体PDGFα和PDGFβ［5］。Marcus等［6］报道，PDGF由神经元的胞体产生，通过顺行轴浆运输进行转运。说明DRG产生的PDGF除对DRG的神经元有营养作用外，还可以通过顺行轴浆运输转运到脊髓进一步发挥作用。本结果显示，正常成年猫L6 DRG有PDGF阳性神经元，说明DRG可以产生PDGF，可能与DRG神经元的营养及存活有关。另外结合文献报道及本实验观察到的DRG部分纤维呈PDGF阳性，推测DRG产生的PDGF还可以部分运输至脊髓进一步发挥作用。
　　本文为CNTF、PDGF在成年猫DRG的分布提供了新的形态学证据，但其具体的合成部位及作用机制，还有待于进一步探讨。

参考文献

［1］ 张连双， 章为， 王廷华，等. 部分背根切断对备用背根节神经元CNTF、PDGF表达的影响［Ｊ］. 四川大学学报（医学版）， 2005， 36（2）:176179.

［2］ 王廷华， 吴良芳， 廖德阳，等. 成年猫L6DRG神经元按大小分类的形态学证据［Ｊ］. 昆明医学院学报， 2000， 21(1):4749.

［3］ 顾晓松， 丁斐， 刘炎，等. CNTF基因在大鼠脊髓中的表达及生后发育的变化［J］. 解剖学报， 2001， 32(4):305307.

［4］ Xian H， Lin S， Gu X， et al. Comparison between the effects of rhCNTF on sensory and motor neuron of chicken embryo［J］.Zhongguo Ying Yong Sheng Li Xue Za Zhi，1997， 13(3): 268270.

［5］ Eccleston PA， Funa K， Heldin CH. Expression of plateletderived growth factor (PDGF) and PDGF alpha and beta receptors in the peripheral nervous system: an analysis of sciatic nerve and dorsal root ganglia［J］.Dev Biol， 1993， 155(2): 459464.

［6］ Fruttiger M， Calver AR， Richardson WD， et al. Plateletderived growth factor is constitutively secreted from neuronal cell bodies but not from axons［J］. Curr Biol， 2000， 10(20): 12831287.

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