关于心复康口服液对自发性高血压大鼠心肌纤维化及左室功能的影响

作者：李俊峡 曹雪滨 赵春生 赵玉英

【摘要】 目的: 观察心复康口服液对自发性高血压大鼠(SHR)心室重构及左室功能的影响. 方法: 12周龄SHR 30只随机分为3组，即空白对照组(SHRC组)、依那普利组(SHRY组)及心复康口服液组(SHRX组)，每组10只. 并以正常SD大鼠10只作对照(SD组). 治疗10 wk后测定各组大鼠收缩压(SBP)、左室舒张末压(LVEDP)、最大左室压力微分值(±dp/dt max)、心脏质量指数(HMI)、左室质量指数(LVMI)以及胶原蛋白含量和血浆血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）、醛固酮（ALD）等指标. 结果: 治疗10 wk后，各治疗组LVEDP，HMI，LVMI，胶原蛋白含量，Ang Ⅱ和ALD较对照组显著降低(P&<0.01)， ±dp/dt max较对照组显著增大(P&<0.05). 结论: 心复康口服液可通过抑制Ang Ⅱ和 ALD防止心肌纤维化，抑制心室重构，改善左室功能.
【关键词】 心复康口服液;高血压;左心室肥大;心肌纤维化
　　 0引言
　　任何原因引起的心肌纤维化最终将导致心力衰竭，抑制心肌纤维化可阻抑心力衰竭的发生和发展［1］. 我们观察心复康口服液对自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rat， SHR)心肌纤维化及左室功能的影响，探讨其抗心衰的作用机制.
　　1材料和方法
　　1.1材料12 wk龄SHR 30只，雌雄各半，购自中国医学科学院实验动物所；12 wk龄SD大鼠10只，雌雄各半，购自河北医科大学实验动物中心. 马来酸依那普利购自江苏恒瑞医药股份有限公司，心复康口服液（xinfukang oral liquid，XFK），主要成分为黄芪、人参、制附子、淫羊藿、灵芝、丹参、当归、川芎、枳实，由解放军第252医院提供. 羟脯氨酸测试盒购自南京建成生物工程研究所. 血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、醛固酮(ALD)放免试剂盒购自北京北免东亚生物技术研究所.
　　1.2方法
　　1.2.1实验分组与治疗实验大鼠采用随机数目表法随机分为3组：正常SD大鼠组(SD组)、空白对照组（SHRC组）、依那普利治疗组（SHRY组）、心复康口服液组（SHRX组），每组各10只. SHRY组每日依那普利10 mg/kg加入蒸馏水5 mL/kg灌胃，SHRX组每日给予心复康口服液2 mL(每亳升含生药1.5 g)灌胃［2-3］，SHRC组每日等剂量蒸馏水灌胃. 于治疗后10 wk处死进行检测. SHR均雌雄分笼饲养，标准饲料和自来水喂养，饲养在恒温（22±2）℃、恒湿(55±5)%、人工光照明暗各12 h 的安静饲养室内.
　　1.2.2血液动力学参数测定腹腔注射30 g/L戊巴比妥钠30 mg/kg麻醉大鼠，固定后分离右侧颈总动脉，插入内充肝素生理盐水的塑料管至左室腔，稳定10 min后用多道生理记录仪描记左室舒张末压（LVEDP，kPa）、左室最大收缩、舒张期压力微分(±dp/dt max， kPa/s）以反映左室收缩与舒张功能.
　　1.2.3血浆 AngⅡ，ALD的测定麻醉大鼠，迅速打开胸腔，右心室穿刺抽血 4 mL，其中2 mL注入冰水浴冷却的、预先加有抑肽酶的抗凝管中，摇匀，4℃，3000 r/min低温离心机离心5 min，分离血浆置于-20℃冰箱保存待测AngⅡ;另外 2 mL注入预先加有肝素的抗凝管中，摇匀，常温下3000 r/min离心5 min，分离血浆置于-20℃冰箱保存待测ALD. 两者均采用放射免疫方法检测，严格按 AngⅡ，ALD放免试剂盒说明书操作.
　　1.2.4心脏质量指数、左室质量指数的测定打开大鼠胸腔，取出心脏，用预冷的PBS(0.02 mmol/L，pH7.4)充分灌洗，滤纸吸干，称取心脏质量. 沿房室环剪去大血管、心房及右室游离壁，将余下的室间隔、左室游离壁作为左室质量. 心脏质量、左室质量与体质量的比值分别作为心脏质量指数(HMI)，左室质量指数(LVMI).
　　1.2.5心肌组织内胶原含量测定取左室游离壁部分心肌组织，约100 mg，生理盐水匀浆，采用消化法测定羟脯氨酸含量，并计算胶原含量. 胶原含量＝8.2×羟脯氨酸含量(mg/g).
　　1.2.6胶原定性及定量分析取左室游离壁中部横断面心肌组织，100 mL/L中性甲醇固定，石蜡包埋，切片厚4 μm，进行胶原Masson染色. 染色后心肌细胞呈现红色，胶原纤维呈现蓝色. 采用IBASⅡ图像分析系统测定心肌胶原容积分数（CVF）. 切片上随机选取10个视野，通过灰度调节区别胶原和非胶原成分，胶原容积分数为胶原面积与心肌面积的比值，取其平均值，其中胶原面积不包括血管周围胶原面积.
　　统计学处理:应用SPSS 10.0 软件进行统计学分析，所有数据以x±s表示，组间均数比较采用t检验.
　　2结果
　　2.1心复康口服液对SHR心功能的影响与SD组相比，SHR各组LVEDP显著升高(P&<0.01)，而±dp/dt max 均显著降低(P&<0.01). 与SHRC组相比，各治疗组对心功能有一定的改善作用（表1）. 表1心复康口服液对SHR血流动力学指标的影响 2.2心复康口服液对SHR左室重构及肾素血管紧张素醛固酮系统（RAAS）的影响与SD组相比，SHR各组HMI，LVMI，胶原蛋白含量，CVF，血浆AngⅡ，ALD均显著升高(P&<0.01). 与SHRC组相比，各治疗组的HMI，LVMI，胶原蛋白含量，CVF，AngⅡ，ALD均显著降低(P&<0.01或P&<0.05，表2，图1）. 表2心复康口服液对SHR左室重构及RAAS的影响
　　3讨论
　　充血性心力衰竭的基本病理机制为气阳两虚，血瘀水停. 据此我们拟定了具有益气温阳、化瘀利水功效的中药复方心复康口服液. 其中黄芪、人参补益心气；制附子、淫羊藿助阳温肾；灵芝可益气、安神，且有滋阴之效；丹参、当归、川芎活血化瘀，以助气血运行；枳实有行气利水之效，也有防止温补过度之用. 大量研究表明其对心衰有一定的改善作用［3-4］.
　　压力负荷是导致心肌纤维化及左室肥厚的重要机制之一. 压力负荷通过刺激成纤维细胞增殖、胶原蛋白合成及心肌细胞蛋白合成等机制诱导心肌纤维化、心肌细胞肥厚，降低心室壁的顺应性，使舒张期心室的充盈受阻. 本实验研究表明，心肌组织的胶原容积分数从正常的3%～5%上升到8%～12%时，舒张期的应力应变关系发生变化，此时收缩功能尚可维持，舒张功能受到损害. RAAS的激活是心肌纤维化及左室重构的主要机制. AngⅡ刺激心肌成纤维细胞有丝分裂、促进成纤维细胞胶原合成，抑制基质金属蛋白酶1活性，促进成纤维细胞增值，从而诱导心肌纤维化. 本实验研究表明，血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素受体阻断剂都能降低血压、预防和逆转左室肥厚和心肌纤维化，改善心功能. 本研究中我们分别观察依那普利、心复康口服液对SHR心肌纤维化及左室功能的影响，结果显示心复康口服液可通过抑制AngⅡ，ALD阻抑心肌纤维化，改善左室功能. 现代药理研究证明，川芎的主要成分川芎嗪，具有典型的钙离子拮抗剂的特性，有较强的扩张微血管、改善微循环作用，对AngⅡ引起的心肌成纤维细胞增殖也有抑制作用［5-6］. 丹参可显著抑制胶原合成、促进心脏局部胶原分解、抑制心肌局部醛固酮的生成、改善心肌血液供应、调节氧自由基代谢，从而对心肌纤维化有一定的抑制作用［7-8］. 黄芪甲苷为黄芪的活性成分之一，可以减少心肌炎小鼠心肌胶原合成，逆转病毒性心肌炎心肌纤维化作用［9］.
　　本研究结果显示心复康口服液能有效抑制心肌纤维化，从而改善左室功能，其作用机制可能与抑制RAAS有关.
【参考文献】
［1］ Swynghedauw B.Molecular mechanisms of myocardial remodeling［J］. Physiol Rev， 1999，79:215-262.

［2］ 胡元会，马铁民，陈双厚，等.心复康口服液对心肌梗死心衰大鼠心功能的影响［J］. 中国中医基础医学杂志，2006，12（9）：680-682.

［3］ 曹雪滨，胡元会，何建成. 心复康口服液的药效学研究［J］. 现代西医结合">中西医结合杂志，2004，13（2）：275-277.

［4］ 曹雪滨. 益气温阳活血化瘀法治疗充血性心力衰竭的中医机制探讨［J］. 现代中西医结合杂志，2003，12（23）：2618-2620.

［5］ 胡发明，胡红丁. 川芎嗪的实验研究及临床应用［J］. 中医研究，2004，17（3）：57-59.

［6］ 王亚平，李伯祥 .川芎嗪防治肾间质纤维化作用的实验研究［J］. 中国中西医结合肾病杂志，2002，3(2):77-78 .

［7］ 李明，张军，陈燕，等. 丹参抑制异丙肾上腺素引起的小鼠心肌肥厚和纤维化及其作用机制［J］. 中国药科大学学报，2003，34(6):565-568.

［8］ 童普德，吴小江，王晓玲. 丹参酸乙对心脏成纤维细胞增殖和胶原基因表达的影响［J］.中药药理与临床，2002，18(4):7-9.

［9］ 张召才，杨英珍，李双杰，等.黄芪甲苷对小鼠病毒性心肌炎心肌纤维化的影响［J］.中国新药与临床杂志，2003，22(9):515.