关于百合多糖对小鼠免疫功能的影响

代写论文网： 【摘要】 目的： 观察百合多糖（LP）对小鼠免疫功能的影响. 方法：环磷酰胺复制免疫抑制模型；测定胸腺、脾脏质量并计算脏器系数；鸡红细胞法测定单核巨噬细胞吞噬功能；绵羊红细胞法测定血清溶血素IgG， IgM含量；MTT 法测定小鼠脾细胞的增殖. 结果： 在100～400 mg/kg剂量范围内，LP可以提高免疫抑制模型小鼠的免疫器官指数，促进其吞噬指数和腹腔巨噬细胞增殖反应，提高其血清溶血素IgG， IgM含量；在75～150 mg/L剂量范围内能促进小鼠脾细胞的增殖. 结论： 百合多糖能增强免疫抑制小鼠的非特异性和特异性免疫功能.
【关键词】 百合 多糖类 免疫/药物作用
　　 0引言
　　多糖是自然界中含量丰富的生物聚合物，它是由醛糖或酮糖通过糖苷键连接在一起，是构成生命的四大基本物质之一，多糖类具有多种显著的生物活性和药理作用. 近年来，中药材所含植物多糖的免疫调理作用备受关注，已有100余种中药被用于相关研究. 但是百合多糖免疫调节作用的研究报道较少. 我们从兰州百合中提取水溶性多糖［1］，并观察其对环磷酰胺免疫抑制模型小鼠免疫功能的影响.
　　1材料和方法
　　1.1材料百合多糖（Lilypolysaccharide，LP）由本室从兰州百合中提取，含量为80.4％，用时无菌生理盐水溶解；环磷酰胺(CTX)，上海华联制药有限公司，批号31021703；多抗甲素口服液，西安光华制药厂，批号20041023； 刀豆蛋白（Con A），Sigma公司；MTT，Sigma公司；DMSO(AR)，天津化学试剂一厂；小牛血清，杭州四季青生物工程有限公司；RPMI1640细胞培养基，GIBCO公司. ICR封闭群小鼠，清洁动物（生产合格证号：陕医动字08004），18～22 g；绵羊红细胞（SRBC）；均由西安交通大学医学院实验动物中心提供.
　　1.2方法
　　1.2.1百合多糖对小鼠巨噬细胞吞噬活性的影响ICR小鼠60只，随机分为6组，即正常对照组、CTX模型对照组、LP小剂量组（0.1 g/kg）、LP中剂量组（0.2 g/kg）、 LP大剂量组（0.4 g/kg）和阳性药多抗甲素对照组(0.0125 g/kg)，每组10只，雌雄各半. 小鼠免疫抑制模型按文献［2］方法复制，除正常对照组外，其他各组小鼠右侧前肢腋窝皮下注射4 g/L环磷酰胺溶液（25 mg/kg，无菌生理盐水配制），每隔48 h注射1次. 各组小鼠于给药第2， 5日分别腹腔注射50 g/L无菌可溶性淀粉溶液(25 mL/kg). 百合多糖实验组每日用不同剂量的LP灌胃1次（25 mL/g），药物阳性对照组每日用多抗甲素灌胃1次(25 mL/g)，正常对照组每日用生理盐水灌胃1次（25 mL/g），共7 d. 在末次给药后，所有小鼠腹腔注射无菌普通肉汤50 mL/kg，用注射器吸取腹腔液0.1 mL于洁净载物玻片，加0.1 mL（0.1 mL /L）鸡红细胞悬液，充分混匀；置于湿盒内37℃孵育30 min. 用生理盐水漂洗3次，室温干燥. 按文献［3］方法计算吞噬百分率和吞噬指数.
　　1.2.2免疫器官质量的测定上述各组小鼠在吸取腹腔液后断颈处死，用电子天平精确称取小鼠体质量、胸腺质量、脾脏质量. 按文献方法计算小鼠的胸腺指数和脾脏指数.
　　1.2.3血清溶血素滴度测定实验小鼠按1.2.1实验分组方法分组并给药，在给药的第2日腹腔注射500 mL/L绵羊红细胞悬液0.2 mL/只进行免疫. 每日给药1次，连续7 d，末次给药后1 h，小鼠眼球后静脉采血制备血清. 按文献［4］方法测定血清溶血素含量（HCIgG， HCIgM）.
　　1.2.4小鼠脾细胞增殖实验［4］按常规方法制成细胞浓度为1×1010个/L脾细胞悬液，混匀后加到96孔培养板中，每孔均加入脾细胞1×106个. 淋巴细胞增殖实验分两部分： ① 加Con A组：每孔均加入不同浓度的LP和终浓度为5 mg/L的Con A；② 无Con A组：每孔均加入不同浓度的LP. 以RPMI1640培养液为阴性对照，终浓度为10 mg/L的Con A组为阳性对照；每组均设4个复孔. 置37℃，50 mL/L CO2培养箱中静止培养68 h后，MTT法测A值. 　　统计学处理： 实验所得数据用x±s表示，采用SPSS 统计软件进行方差分析及Dunnettt检验.
　　2结果
　　2.1LP对小鼠巨噬细胞吞噬活性的影响CTX免疫抑制模型组吞噬百分率及吞噬指数低于正常对照组（P&<0.01）；LP小剂量组、中剂量组和大剂量组的吞噬百分率和吞噬指数均高于CTX模型对照组(P&<0.01)，随着LP剂量的增加，吞噬百分率和吞噬指数在逐渐提高（P&<0.05），呈量效关系（表1）.
　　2.2LP对小鼠免疫器官发育的影响CTX免疫抑制模型组胸腺指数和脾脏指数比正常对照组低（P&<0.01），说明造模成功；LP小、中、大三个剂量组胸腺指数和脾脏指数均高于CTX模型对照组(P&<0.01)（表2），但LP各组间无量效关系（P＞0.05）. 表1百合多糖对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响表2百合多糠对小鼠免疫器官重量的影响
　　2.3LP对小鼠血清溶血素水平的影响CTX免疫抑制模型组血清溶血素滴度比正常对照组低（P&<0.01）；而LP小、中、大三个剂量组血清溶血素水平均高于模型对照组，且随着LP剂量的增加，血清溶血素水平在逐渐提高，呈量效相关性（P&<0.05，表3）.表3百合多糖对小鼠血清溶血素水平的影响
　　2.4LP对小鼠脾细胞增殖的影响单纯用LP，两剂量组A值分别为0.216±0.017和0.291±0.130，而LP与Con A合用，其A值分别为0.543±0.060和0.630±0.021，与模型对照组A值0.115±0.012相比均可促进小鼠脾细胞增殖（P&<0.05），并且LP与Con A合用使细胞活力增长的作用比单独使用LP及单独使用Con A强（P&<0.01）. 3讨论
　　百合具有养阴润肺止咳、清心安神、补中益气的功效，是公认的补益之品. 百合多糖的研究在近年才逐步开展起来，其药理作用的研究也处于刚起步阶段，需要进一步的实验来补充验证，尤其是将体内实验和体外实验结合起来综合评价；而对百合多糖免疫调节作用的研究目前也比较稀少［5］. 本实验研究结果显示百合多糖能显著提高免疫功能低下小鼠的单核巨噬细胞的吞噬能力、胸腺和脾脏质量，提高免疫功能低下小鼠的血清特异性抗体水平，说明百合多糖能增强机体的特异性体液免疫功能. 此外，细胞培养实验观察百合多糖对小鼠脾细胞增殖的影响，发现百合多糖能促进小鼠脾细胞的增殖，结果表明，百合多糖能促进免疫功能低下小鼠的细胞免疫功能. 这与苗明三等报道的百合多糖具有免疫促进作用，可提高免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，促进溶血素及溶血空斑形成，促进淋巴细胞转化［6］，以及胡敏敏等报道的百合多糖可升高小鼠廓清指数、吞噬指数及免疫器官的质量指数，能提高血清溶血素含量［7］等相一致，因此可以认为百合多糖是一种免疫促进剂，它既能非特异性增强体液免疫又具有增强细胞免疫的功能；同时还可以认为百合多糖是百合的主要活性成分之一.

参考文献

［1］ 刘成梅，付桂明，涂宗财，等. 百合多糖提取的影响因素研究［J］. 食品科学，2002，23（2）：87-89.

［2］ 陈奇. 中药药理研究方法学［M］. 2版. 北京：人民卫生出版社，2006：309.

［3］ 徐叔云，卞如濂，陈修．药理实验方法学［M］．3版．北京：人民卫生出社，2001:1433-1437.

［4］ 徐叔云，卞如濂，陈修．药理实验方法学［M］．3版．北京：人民卫生出社，2001:1492-1493.

［5］ 苗明三，杨林莎. 百合多糖免疫兴奋作用［J］.中药药理与临床，2003，19（1）：15-16.

［6］ 任利君，刘俊田，弥曼，等. 百合多糖的研究进展［J］. 西北药学杂志，2005，20（6）：284-285.

［7］ 胡敏敏，蔡宝昌，张志杰，等. 百合多糖的药效学研究［J］. 中药新药与临床药理，2007，18（2）：107-109.