关于趋化因子受体CCR7在不同类型肺癌组织中的表达及其临床意义

【摘要】 目的：探讨趋化因子受体CCR7在不同类型肺癌组织中的表达及其临床意义. 方法：采用免疫组织化学方法检测110（鳞癌40，腺癌40，小细胞癌30）例肺癌和30例癌旁正常肺组织中CCR7的表达. 结果：在110例肺癌组织中有77例CCR7表达阳性（70.0%），30例癌旁正常肺组织中仅5例表达阳性（16.7%，P&<0.05）. 鳞癌、腺癌及小细胞癌CCR7阳性率分别为60.0%，92.5%，53.3%（P&<0.01）；腺癌CCR7阳性率明显高于鳞癌和小细胞癌（分别P&<0.01，P&<0.01）. 68例伴淋巴结转移的病例CCR7阳性率83.3%，42例不伴淋巴结转移的病例CCR7阳性率47.6%（P&<0.01）. Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期肺癌病例CCR7阳性率分别为59.5%，76.2%，69.2%，100.0%（P&<0.05）. 不同性别患者肺癌组织中CCR7阳性率分别为男66.7％，女80.8％（P&>0.05）. 小于等于60岁和大于60岁年龄组肺癌组织中CCR7阳性率分别为70.3％，69.6％（P&>0.05）. 结论：CCR7上调表达是肺鳞癌、腺癌及小细胞癌的一个普遍特征，高水平的CCR7表达与肺癌的淋巴结转移和高TNM分期有关，而与年龄、性别无关.
【关键词】 肺肿瘤 趋化因子受体CCR7 趋化因子 淋巴结转移
　　 0引言
　　CCR7（CC chemokine receptor 7）是CC家族趋化因子受体的成员之一，通过与其配体CCL21相互作用在淋巴细胞的归巢过程中起重要作用. CCL21在淋巴结中特异性高表达，同时许多肿瘤细胞表面有CCR7的表达. 研究证实，CCR7的表达与多种恶性肿瘤的淋巴结转移密切相关［1-3］. 但有关肺癌组织中CCR7的表达及其与淋巴结转移关系的研究目前报道很少. 我们通过观察CCR7在不同类型肺癌组织中的表达，探讨CCR7表达与肺癌临床病理特征和淋巴结转移的关系.
　　1材料和方法
　　1.1材料收集我院200306/200606肺癌根治手术标本110（男84，女26）例，平均年龄58（32～76）岁，其中肺腺癌40例，肺鳞状细胞癌40例，肺小细胞癌30例，并以癌旁正常肺组织30例做对照. 所有病例经病理复诊并进行TNM分期：Ⅰ期37例，Ⅱ期42例，Ⅲ期26例，Ⅳ期5例. 山羊抗人CCR7多克隆抗体（美国Santa Cruz公司）；即用型SP免疫组化检测试剂盒（山羊SP kit）（北京中杉金桥生物技术有限公司）；ZEISS Avxioskop2显微镜（德国）；MICROM切片机（德国）；PYXDHSX恒温培养箱（德国）；Haier BCD238WF冰箱.
　　1.2方法
　　1.2.1免疫组织化学染色用SP法，将中性甲醛固定和石蜡包埋的肿瘤组织制成4 μm厚的切片，经二甲苯和梯度乙醇脱蜡至水，在30 mL/L h3O2溶液中室温孵育10 min以消除内源性过氧化物酶活性. 切片在 EDTA溶液（1 mmol/L， pH 8.0）中煮20 min进行抗原修复. 在封闭用正常山羊血清中室温孵育10 min. 倾去血清，滴加一抗（山羊抗人CCR7多克隆抗体，1∶70稀释），4℃过夜. PBS冲洗3次后滴加生物素标记二抗工作液（生物素标记兔抗山羊IgG），37℃孵育30 min. PBS冲洗3次，滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃孵育30 min. PBS冲洗3次. DAB显色. 用自来水冲洗，苏木素复染，脱水透明，常规封片. 用PBS代替一抗做阴性对照.
　　1.2.2结果判断由两位病理医师分别双盲阅片，按肿瘤细胞阳性细胞率和着色强度分别进行记分. 肿瘤细胞阳性细胞率记分标准：阳性细胞≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分；着色强度记分标准：无着色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分. 两种记分标准所得分值的乘积为0表示阴性(-)，大于1为阳性，其中1～2弱阳性(+)，3～4阳性()，≥5强阳性().
　　统计学处理: 采用四格表及行×列表资料的χ2检验，以P&<0.05认为差异有显著性.
　　2结果
　　2.1肺癌及癌旁正常肺组织中CCR7的表达CCR7阳性部位定位于胞膜和（或）胞质（图1）. 在110例肺癌组织中CCR7阴性33例，弱阳性22例，阳性27例，强阳性28例，阳性率为70.0%；30例癌旁正常肺组织CCR7阴性25例，弱阳性5例，阳性0例，强阳性0例，阳性率为16.7%. 肺癌组织CCR7阳性率明显高于癌旁正常肺组织（P&<0.005）.
　　2.2不同类型肺癌组织中CCR7的阳性表达肺鳞癌、腺癌及小细胞癌组织中CCR7阳性率分别为60.0%(24/40)， 92.5%(37/40)， 53.3%(16/30) (P&<0.01)；腺癌CCR7阳性率明显高于鳞癌和小细胞癌（P均&<0.01），鳞癌和小细胞癌组织中CCR7表达无明显差异（P&>0.05）.
　　2.3CCR7表达与肺癌临床病理特征的关系伴淋巴结转移的肺癌病例CCR7阳性率为83.3%(57/68)，不伴淋巴结转移的肺癌病例CCR7阳性率为47.6%(20/42)，组间比较有显著性差异（P&<0.01）. Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期肺癌病例CCR7阳性率分别为59.5%(22/37)，76.2%(32/42)，69.2%(18/26)，100.0%(5/5)（P&<0.05），CCR7阳性率越高，TNM分期越高. 不同性别患者肺癌组织中CCR7阳性率分别为男66.7%(56/84)，女80.8%(21/26)（P&>0.05）. 小于等于60岁和大于60岁年龄组肺癌组织中CCR7阳性率分别为70.3%(45/64)，69.6%(32/46)（P&>0.05）.
　　3讨论
　　趋化因子受体是一种介导趋化因子行使功能的GTP蛋白耦连的跨膜受体，趋化因子与其受体的相互作用在人体细胞的生长、发育、分化和凋亡，以及肿瘤细胞的生长和转移，淋巴细胞向炎症部位的聚集，HIV感染等许多生理和病理过程中发挥重要作用［4］. CCR7属CC类趋化因子受体亚家族的成员，功能性表达于多种组织和细胞类型，通过与其配体CCL19，CCL21结合参与机体内多种生理和病理过程，尤其是在肿瘤生长和转移中的作用倍受关注. 马飞等［5］的研究发现，CCR7的表达能够促进乳腺癌细胞的趋化和侵袭； Muller等［3］的研究也发现阻断CCR7受体与配体的结合可抑制乳腺肿瘤的转移，说明CCR7通过与其配体结合可能在乳腺癌淋巴结转移中发挥重要作用. CCR7与肿瘤生长和淋巴结转移的相关性还见于甲状腺癌、子宫颈癌、口腔和口咽鳞状细胞癌等的研究中［6-8］，而有关肺癌组织中CCR7表达及意义的研究较少，尤其小细胞肺癌组织中CCR7表达情况的研究尚未见报道. 苏丽萍等［9］研究了趋化因子受体CXCR4在肺癌及癌旁正常肺组织的表达，发现与癌旁正常肺组织相比，肺癌组织表达较高水平的CXCR4，并且CXCR4高表达与肺癌的淋巴结转移有关. CCR7与CXCR4分属不同趋化因子受体亚家族，在肿瘤的发生发展过程中可能具有某些相同作用. 我们观察了包括30例小细胞肺癌在内的110例肺癌组织中CCR7的表达情况. 结果表明，肺癌组织CCR7表达显著高于癌旁正常肺组织，并且与肺癌的组织学类型有关；腺癌CCR7阳性率显著高于鳞状细胞癌和小细胞癌，这提示CCR7在一定程度上与肺癌的发生有关，同时CCR7上调表达可能是肺鳞癌、腺癌及小细胞癌的一个普遍特征. 研究结果还显示， CCR7高表达与肺癌的淋巴结转移和高TNM分期有关，提示CCR7可能参与了肺癌的淋巴结转移过程，进而影响肺癌患者的TNM分期和预后，这与文献报道一致［10-11］. CCR7的配体CCL19和CCL21在淋巴结中高表达［12］，从而诱导CCR7表达阳性细胞向淋巴结定向迁移可能是CCR7表达阳性肿瘤更容易发生淋巴结转移的原因之一.

目前认为，CCR7及其配体CCL21在肿瘤发生发展中的作用是多方面的，其作用机制与CCL21与CCR7作用诱导树状突细胞及淋巴细胞的抗肿瘤免疫反应和抑制肿瘤血管生成有关，并可能成为研发新的抗肿瘤药物的理论依据. 越来越多的证据表明，肿瘤的转移是嗜器官的，趋化因子及其受体的表达在肿瘤的转移部位上起关键作用［13］. 我们的结果显示CCR7的上调表达与肺癌的发生有关，其高表达可能是判断肺癌是否发生淋巴结转移及TNM分期，进而判断患者预后的一个指标. 目前虽然肿瘤细胞上调表达相关趋化因子或趋化因子受体的分子机制还未完全阐明，但可以肯定的是，肿瘤细胞自身表达的趋化因子或趋化因子受体与宿主的特异性受体或配体结合与肿瘤的生长、播散和靶器官特异性转移有关. 因此有关CCR7的上调表达在肺癌生长及转移中的作用机制值得进一步深入研究.

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