作者：陈斌 罗荣城 崔斐 钱新宇
【关键词】 胃癌HER
摘 要：目的 研究胃癌人表皮生长因子受体(HER) -2/neu基因的表达与生存期的关系，探讨其作为胃癌预后指标的可行性。方法 应用免疫组织化学方法检测103例胃癌标本HER-2/neu基因的表达，并将检测结果与患者的随访资料及临床病理参数进行综合分析。结果 103例胃癌组织中HER-2/neu基因的阳性表达率为31.1% (32/103)；HER-2/neu基因在胃良性病变和癌旁组织中均无表达；HER-2/neu基因表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、部位、分化程度均无相关性（P&>0.05），而与肿瘤的浸润深度、临床分期、淋巴结转移、远处转移及患者的生存时间相关(P&<0.05 )。结论 HER-2/neu基因与胃癌的浸润、转移及预后密切相关，可作为判断胃癌生物学行为和预后的重要参考指标。
关键词：胃癌 HER-2/neu基因；免疫组织化学；预后
Abstract: Objective To investigate the association between the expression of human epidermal growth factor receptor (HER)-2/neu gene and prognosis of gastric cancer. Methods The expression of HER-2/neu in gastric cancer was detected by immunohistochemical technique and analyzed in relation with the follow-up and clinicopathologic data of the patients. Results Thirty-two of the 103 gastric cancer specimens (31.1 %) were positive for HER-2/neu， but whose expression was not found in benign gastric lesion and normal gastric mucosa. HER-2/neu expression was not correlated with the patients’ sex， age， tumor size and location or the degree of differentiation (P&>0.05)， but with the depth of invasion， clinical stage， lymph node and distant metastasis of the tumor and survival of the patients (P&<0.05). Conclusions HER-2/neu expression is closely related to invasion， metastasis and prognosis of gastric cancer and can be used to evaluate the biological behavior and prognosis of gastric cancer.
Key words: gastric cancer， prognosis; HER-2/neu gene; immunohistochemistry
胃癌的发生发展是一个多因素、多阶段的复杂过程，涉及到多个基因和多种分子水平变化，故在肿瘤基因水平上寻找新的预后指标是目前肿瘤研究的重点。本研究应用免疫组织化学方法， 检测了胃癌中人表皮生长因子受体(HER) -2/neu基因的表达， 旨在探讨其与胃癌的临床病理和预后的关系，报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
对2000年1月至2004年1月在我院手术切除并经病理确诊为胃腺癌（包括乳头状腺癌、管状腺癌、黏液腺癌、印戒细胞癌）的225例患者进行随访（随访截止时间为2006年1月，随访时间为2～6年）。 将有随访结果和资料完整（有完整原癌病灶、淋巴结和癌旁组织）的103例胃腺癌患者资料作为实验组，另选取20例胃良性病变作为对照组。实验组中男性67例、女性36例，年龄31～78岁，平均（57.97±12.28）岁，临床分期Ⅰ期＋Ⅱ期47例、Ⅲ＋Ⅳ期56例。
1.2试剂和仪器
1.2.1 试剂 试剂购自福州迈新生物技术开发公司，一抗为MBI RMA-0555 Rabbit Monoclonal anti-C-erbB-2 (克隆号SP3，批号50909555C1)。试剂盒选用即用型免疫组化(IHC)二步法EliVisionTM 染色试剂盒。
1.2.2 仪器 石蜡切片机(SHANDON AS325)；显微镜(OLYMPUS BX40)；电热恒温干燥箱(56 ℃～65 ℃，上海跃进医疗器械一厂，标准号：ZBY149-83，型号：GZX-DH-50×55 )；微波炉（WHIRL POOL VIP202S 850W）。
1.3方法
免疫组化（EliVisionTM二步法）：65℃烤片2～4 h；石蜡切片脱蜡至水；蒸馏水冲洗；抗原修复，本实验用法为浸泡于枸橼酸盐缓冲液(pH 6.0)中，在功率850 W的微波炉中加热11 min，放至室温后用蒸馏水冲洗2 min；3％h3O2中在功率350 w的微波炉中加热2 min 30 s，以消除内源性过氧化物酶的活性；蒸馏水冲洗2 min，PBS冲洗2 min×3次；滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1 h；PBS冲洗，2 min×3次；滴加试剂1(polymer helper)， 37℃孵育20 min；PBS冲洗，2 min×3次；滴加试剂2(poly peroxidase-anti-mouse/rabbit， IgG)，37℃孵育30 min，PBS冲洗，2 min×3次；DAB显色5 min；自来水充分冲洗，复染，脱水透明，封片。
1.4结果判断
每批实验设阳性和阴性对照。HER-2/neu蛋白阳性：细胞膜及细胞质呈棕黄色。阴性：细胞膜及细胞质无棕黄色颗粒样沉淀。染色分级:整张切片无一个阳性细胞（－）；阳性细胞数&<10%（＋）；阳性细胞数10%～50%（＋＋），阳性细胞数&>50% (＋＋＋)。
1.5统计学处理
采用χ2 检验和Fisher’s精确概率法，生存期分析采用Life-tables法和Logrank检验。
2 结果
2.1HER-2/neu基因在胃腺癌组织中的表达特点HER-2/neu基因主要表达于细胞膜及细胞质，HER-2/neu基因在胃良性病变和癌旁组织中均无表达。103例胃癌组织中32例表达阳性（阳性率31.1），其中（＋）8例(7.8)、（＋＋）9例（8.7）、(＋＋＋)15例（14.6），见图1～4。图 1 各组胃粘膜的免疫组化染色Fig .1 Immunohistochemical staining for HER-2/neu of the gastric mucosa of different subjectsA: Negative HER-2/neu expression in normal gastric mucosa (Original magnification:×200)B: Weakly positive HER-2/neu expression in the gastric mucosa of a patient with well differentiated adenocarcinoma (Original magnification:×400)C: Positive HER-2/neu expression in the gastric mucosa of a patient with well differentiated adenocarcinoma (Original magnification:×200)D: Strong positive HER-2/neu expression in the gastric mucosa of patient with moderately differentiated adenocarcinoma (Original magnification:×200)
2.2 HER-2/neu基因与临床病理特征间的关系HER-2/neu基因表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、部位、分化程度均无相关性（P&>0.05），与肿瘤浸润深度、临床分期、有无淋巴结转移和远处转移密切相关(P&<0.05，表1）表1 HER-2/neu基因表达与胃癌临床病理特征间的关系
2.3胃癌HER-2/neu基因表达与生存时间的关系HER-2/neu表达阳性者的中位生存时间为10.1个月，显著低于阴性者64.5个月的生存时间 (P&<0.05，表2）。表2 胃癌HER-2/neu基因表达与生存时间的关系
3 讨论
癌基因HER-2/neu又称c-erbB-2或Her-2 基因，定位于人染色体17q21，编码一种相对分子质量为185 000的跨膜蛋白，结构与表皮生长因子受体(EGFR)相似，其胞质区具有酪氨酸蛋白激酶(TPK) 活性。HER-2/neu在正常情况下处于非激活状态，与其特异性配体结合后可调节细胞的分裂、分化和增殖。当HER-2/neu 受到某些致癌因素的作用后，其结构或表达失控而被激活，转而具有肿瘤转化活性，可促使细胞发生恶性转化[1]。目前大量的研究发现，在多种恶性肿瘤中存在HER-2/neu基因的异常扩增及p185的过度表达，并且与其预后不良有关。人们已经证实（20～40）的乳腺癌中存在HER-2/neu基因的扩增及过度表达，并认为HER-2/neu基因表达是乳腺癌独立的预后因素[2]。另外，HER-2/neu基因在卵巢癌、结直肠癌、肺癌、胃癌等肿瘤中也均有不同程度的表达，对这些肿瘤的诊断、治疗及预后估计均很有意义[3-6]。因此，检测肿瘤组织中过度表达的HER-2/neu基因蛋白产物，有助于从蛋白水平认识肿瘤的本质。
HER-2/neu基因在本实验组103例胃癌中的表达率为31.1，与李敏[7]等报道相近，而在胃良性病变及癌旁组织中均未见阳性表达，表明胃粘膜上皮细胞一旦发生癌变后即可有HER-2/neu基因的表达，提示HER-2/neu基因在胃粘膜的表达是胃癌发生的晚期事件，是胃粘膜上皮细胞发生恶变的标志，可作为胃癌诊断和预后的参考指标，与Oya [8]等的研究结果相一致。
靶向治疗是目前肿瘤治疗的一个热点，HER-2/neu靶向抗体Herceptin针对HER-2/neu高表达的乳腺癌治疗已得以使用并取得良好疗效。对于Herceptin在胃癌上的使用因为HER-2/neu在胃癌的表达实验结果不一，故其在胃癌上的使用经验不多。Tanner[13]等报道Herceptin对有HER2/neu基因扩增的胃癌和乳腺癌细胞（N87和SKBP-3）都一样有抑制生长的作用；Safran [14]等应用Herceptin与紫杉醇、顺铂及放疗联合治疗食管腺癌取得良好疗效；Rebischung [15]等证实Herceptin联合化疗对HER2/neu基因过度表达的转移性胃癌有效。因此，如果对HER-2/neu基因在胃癌发病中的作用机制及其产物p185蛋白的表达状况能得出肯定的结果，则HER-2/neu靶向抗体Herceptin在胃癌中的使用的研究将会进一步深入。本研究结果表明HER-2/neu基因在胃癌中有较高的阳性表达率，为Herceptin在胃癌的治疗提供了理论依据。
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