【摘要】 目的 观察术前短期应用血管生长抑制剂人参皂甙Rg3对膀胱肿瘤组织微血管密度（MVD）变化的影响。方法 选取30例膀胱肿瘤患者，结合CT和膀胱镜检查活检的病理资料明确诊断，留取膀胱肿瘤组织标本。患者术前给予血管生长抑制剂人参皂甙Rg3，20 mg/次，每日2次，口服，连续用药10～14天。10～14天后手术，术后留取肿瘤组织标本。肿瘤组织切片经免疫组化染色，标记抗体。利用Leica Qwin V3图像分析系统对染色切片进行分析，计算肿瘤组织MVD，比较用药前后肿瘤组织MVD的变化。结果 用药后肿瘤组织MVD明显低于用药前〔（1.49±1.26） ×10-4/μm2 vs. (4.43±2.26) ×10-4/μm2，P&< 0.05〕。结论 术前短期应用血管生长抑制剂人参皂甙Rg3能明显降低膀胱肿瘤组织MVD。
【关键词】 膀胱肿瘤 血管生长抑制剂 微血管密度
Abstract: Objective To observe the effects of short-term preoperative administration of angiogenesis inhibitor ginsenoside Rg3 on the variation of microvessel density (MVD) of urinary bladder tumor. Methods Specimens of urinary bladder tumors were obtained by biopsy from 30 patients diagnosed with urinary bladder tumor， based on combined examinations of CT and cystoscopic biopsy. The 30 patients were each given a dose of 20 mg of ginsenoside Rg3 orally twice daily for 10 to 14 days preoperatively. Postoperatively， specimens of tumor tissues were retained for sections， followed by immunohistochemistry staining and antibody conjugates. The sections were analyzed by an image analysis system (Leica Qwin V3) to calculate the MVD of tumors and to compare the variations of the MVD of tumors before and after medication. Results The MVD of the tumor tissues after the medication was markedly lower than before ［(1.49±1.26）×10-4/μm2 vs. (4.43±2.26)×10-4/μm2，P&<0.05). Conclusion Short-term preoperative administration of angiogenesis inhibitor ginsenoside Rg3 can markedly reduce the MVD of tumor in patients with urinary bladder tumor.
Key words: urinary bladder neoplasms; angiogenesis inhibitor; microvessel density (MVD)
膀胱肿瘤是泌尿生殖系统中最常见的肿瘤。在国内，膀胱肿瘤的发病率在男性泌尿生殖器肿瘤中占首位，而且近年来有增加的趋势。膀胱肿瘤本身有易复发的倾向，保留膀胱治疗后2年内复发率超过50％［1］。膀胱肿瘤的治疗方法很多，以手术治疗为主， 还有放疗和化疗以及免疫治疗等。肿瘤新生血管抑制剂是目前临床上应用较新的治疗肿瘤的方法。血管的新生是肿瘤生长、发展的必经之路，与实体瘤的发生、转移有着密切的关系，许多肿瘤仅在新的血管生成出现之后才出现临床症状［2］。所以研究肿瘤的血管新生以及针对肿瘤血管新生进行抗血管新生治疗有着重要的理论意义和临床实用价值，血管生成抑制剂药物的应用将成为控制肿瘤生长和转移的一个重要策略。人参皂甙Rg3是一种四环三萜人参皂甙，现已人工合成，可抑制血管内皮细胞增殖，对肿瘤新生血管生成有较强的抑制作用［3-4 ］ 。本研究观察了术前应用血管生长抑制剂人参皂甙Rg3对膀胱肿瘤组织微血管密度（MVD）变化的影响，现报道如下。
1 资料和方法
1.1 一般资料和治疗方法 选取30例膀胱肿瘤患者，术前膀胱镜检查取活检送病理，明确诊断，同时留取用药前肿瘤组织标本。对本组膀胱肿瘤患者术前给予人参皂甙Rg3口服10～14天，20 mg/次，Bid，饭前口服。用药10～14天后行手术治疗，术后肿瘤标本送病理，与用药前资料对照分析，观察血管抑制剂对膀胱肿瘤组织MVD变化的影响。
1.2 实验方法 新鲜肿瘤组织标本用甲醛固定后，做病理组织切片。采用免疫组织化学方法染色。试剂盒采用美国GBI公司的PV-9000试剂盒。标记血管的抗体采用北京中杉生物技术有限公司提供的鼠抗人原始造血细胞单克隆抗体（CD34），克隆系为BI-3C5。做好的免疫组化切片用Leica Qwin V3 图像分析系统进行图像分析，计算血管密度，作为该切片组织的MVD。
1.3 统计学处理 应用SPSS 12.0 软件进行数据处理，计量数据用±s表示，组间比较采用配对t检验，P&<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
用药后肿瘤组织的MVD明显低于用药前〔（1.49±1.26） ×10-4/μm2 vs. (4.43±2.26) ×10-4/μm2，P&<0.05〕。用药13天后病理切片显示，膀胱肿瘤组织血管数目较用药前减少，管径也变细。
3.1 新生血管与恶性肿瘤的关系 恶性肿瘤的本质特征是具有侵袭性和转移性。恶性肿瘤患者有80％以上死于肿瘤晚期的侵袭和转移。所以防止和阻断肿瘤的侵袭和转移是恶性肿瘤治疗成败的关键。恶性肿瘤的侵袭和转移与肿瘤组织的血管生长有密切的联系，侵袭和转移都是以肿瘤血管的生长为基础的。1971年Folkman首先提出肿瘤生长依赖于新生血管形成的概念，同时认为肿瘤细胞和血管组成一个高度整合的生态系统，源于肿瘤细胞的弥散信号促使内皮细胞从休止状态变为快速增长状态。血管生成与肿瘤转移的关系体现在：一方面，血管是肿瘤的营养代谢通路，肿瘤通过肿瘤血管从宿主获取营养和氧并排除废物；另一方面，血管是肿瘤转移最直接和最快捷的途径。原发肿瘤通过血管源源不断地向宿主输送转移细胞，并在机体的其他部位继续生长和诱导血管形成，导致肿瘤转移。原发肿瘤的生长和转移依赖于血管生成。随着毛细血管内皮细胞培养技术的建立、血管生成抑制剂的发现以及血管生成活性蛋白纯化工作的完成，这一观点为越来越多的证据所支持，使这一领域成为肿瘤研究的热点及肿瘤治疗的新策略［5］。肿瘤的生长有两个不同的阶段，即从无血管的缓慢生长阶段转变为有血管的快速增殖阶段。血管内皮生长因子 、碱性成纤维细胞生长因子是重要的血管生成因子，对内皮细胞具有高度特异性，以它们为靶目标的治疗药物被证明具有极少副作用。实体肿瘤形成以后，处于无血管的浸润前期，肿瘤细胞主要靠弥散供给营养。肿瘤结节的直径一般小于2 mm，细胞数在107以内。肿瘤超过这样的体积若还缺乏新生的毛细血管和小血管的长入以供应营养，肿瘤细胞将停止生长或死亡，肿瘤组织发生退化。若新生的毛细血管长入肿瘤组织，肿瘤组织则迅速生长，是正常组织生长速度的50～200倍，且易发生浸润和转移。所以新生血管生成是肿瘤迅速增殖和发生侵袭、转移的重要条件之一。
3.2 血管生成抑制剂抑制肿瘤生长的机制［6-7］ 以血管生成的各个环节及其发生的过程中的生化改变为靶点来研究血管生成抑制剂，控制肿瘤的生长和转移已经成为肿瘤防治的一个重要途径。其可能的作用机制包括：①阻断血管因子的合成和释放，拮抗其作用;②直接抑制血管内皮细胞的功能;③阻断血管内皮细胞降解周围基质的能力;④阻断血管内皮细胞表面整合素的作用。
3.3 前景和展望 本研究选择肿瘤组织MVD作为观察指标，比较术前应用血管生长抑制剂人参皂甙Rg3对膀胱肿瘤组织MVD变化的影响。结果表明，术前应用人参皂甙Rg3可以明显降低膀胱肿瘤组织的MVD。由于肿瘤的侵袭和转移与肿瘤组织的血管生长有密切的联系，侵袭和转移都是以肿瘤的血管生长为基础的，肿瘤组织MVD与肿瘤的预后有密切的联系，MVD越高，肿瘤临床预后越差。因此，术前应用血管生长抑制剂对膀胱肿瘤有重要的辅助治疗作用。
参考文献
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