关于绒毛膜羊膜炎早产子宫平滑肌、胎膜内皮素-1受体表达对早产的影响

【摘要】 目的 探讨绒毛膜羊膜炎子宫平滑肌、胎膜内皮素-1受体(ETA)表达对早产的影响。方法 早产孕龄28~36周60例，根据胎盘病理分为早产感染组孕妇30例，早产非感染组孕妇30例，对照组为同期正常足月产(37~41周妊娠)孕妇30例;所有病例均在剖宫产术前取子宫下段平滑肌和胎膜，利用免疫组织化学染色法结合图像分析技术检测临产后ETA在子宫平滑肌、胎膜上的表达。结果 早产感染组孕妇子宫平滑肌细胞、胎膜细胞ETA表达显著高于早产非感染组和正常足月组，差异均有显著性(P&<0.01);早产非感染组孕妇ETA水平虽高于正常足月组，但差异无显著性(P&>0.05)。结论 绒毛膜羊膜炎能引起孕母子宫平滑肌、胎膜细胞ETA表达显著升高。

【关键词】 早产;绒毛膜羊膜炎;子宫平滑肌;胎膜;内皮素-1受体

　　[Abstract] Objective To observe the expression of endothalin receptor A in myometrium and fetal membrane of preterm labor caused chorioamnionitis.Methods Patients of preterm labor(28~36 weeks)，60 in all， were pided into preterm labor infectious group with chorioamnionitis (n=30) and preterm labor noninfectious group without chorioamnionitis (n=30)acorrding to placental pathological results.Meanwhile，gravida women(28~36weeks， n=30)are the control group.All groups were drawn the myometrium，fetal membrane during the course of cesarean.With immunohistochemitry and image-analysis system， the expression levels of ETA were detected on tissues of the myometrium，fetal membrane regions in unit.Results Compared with the preterm labor noninfectious group or the gravida women， the expression levels of ETA was higher(P&<0.01)in the preterm labor infectious group.Conclusion The authors argued that chorioamnionitis would play important roles in stepping up the expression levels of ETA on the myometrium，fetal membrane regions.

　　[Key words] preterm labor;chorioamnionitis;myometrium;fetal membrane;endothalin receptor I

　　早产是常见而又复杂的妊娠并发症，病因较多，其中由各种微生物引起的绒毛膜羊膜炎与感染性早产的发生发展关系密切，是诱发早产引起围产儿患病及死亡的主要原因之一[1]; 如能阐明其诱发机制，将对临床预防和治疗感染性早产有一定的意义。据报道，绒毛膜羊膜炎早产发生时能使孕母血清中细胞间粘附分子-1(sICAM-1)含量增高[2]、组织胎盘中细胞因子白细胞介素-6(IL-6)mRNA表达升高[3]等，但其导致感染性早产的分子机制尚未完全明确。内皮素-1(endothalin receptor A，ET-1)是一种具有多种生物学效应的活性肽类物质，在分娩发动中有着不可忽视的作用，能刺激子宫平滑肌收缩及增加胎膜等组织合成前列腺素类物质(能刺激子宫强烈收缩);但必须通过与其受体ETA结合以后才能发挥作用。那么绒毛膜羊膜炎诱发的感染性早产发生时，孕母子宫平滑肌、胎膜内ETA的表达是如何变化的呢?国内外文献尚未报道。为此，本研究以绒毛膜羊膜炎早产孕母为研究对象，通过检查子宫平滑肌、胎膜内ETA的表达变化，阐述其发生关系，为临床探讨绒毛膜羊膜炎致早产发生的分子生物学机制提供一定的理论依据。

　　1 资料与方法

　　1.1 研究对象

　　选取2009年1—12月在宝丰妇幼保健院产科分娩的早产孕妇60例，正常足月分娩的孕妇30例，均行分娩后胎盘病理学检查。(1) 早产组：孕周为28~36周，单胎，分娩方式为临产后因产程异常或胎儿窘迫行剖宫产术。分早产感染组30例和早产非感染组30例。(2) 正常足月组：孕周为37~41周，单胎，分娩方式因产科手术指征或社会因素行剖宫产术。上述均排除前置胎盘、多胎妊娠、胎盘早剥、妊娠期高血压疾病、妊娠期肝内胆汁淤积症以及妊娠合并内外科疾病。

　　1.2 试剂与仪器

　　Rabbit Anti-ETA、SABC免疫组化试剂盒(编号：SA1020)(武汉博士得生物工程有限公司); LEICA-200图像分析仪(德国LEICA MICROSYSTEMS LTD)。

　　1.3 方法

　　1.3.1 标本采集

　　剖宫产时，在胎盘娩出、宫体及全身未用宫缩剂前，在子宫下段横切口上方中段无菌切取子宫平滑肌组织约1cm×1cm×0.2cm，无菌剪取胎膜组织约2cm×2cm，两份标本均用生理盐水冲净表面血液，立即置入4%多聚甲醛缓冲液。

　　1.3.2 免疫组化染色检测ETA表达

　　子宫平滑肌、胎膜组织按免疫组化染色方法固定、脱水、包埋、冠状切片，片厚4mm。然后选取组织结构完整的切片，每间隔20mm取一张，每个标本取3张，按免疫组织化学染色试剂盒操作进行染色。Leica-200细胞图像分析系统观察ETA免疫反应产物，并在同区相同光学条件下各取3个视野拍照(400倍)，Image-Pro Plus 软件计算每张照片的平均OD值。

　　1.3.3 结果判定

　　光镜下细胞膜、细胞浆内有棕黄色颗粒为阳性。阳性细胞必需结构清晰、定位好，着色明显高于背景。

　　1.4 数据统计

　　所得数据均用SPSS 16.0 软件统计处理。所有数据用x±s表示。

　　2 结果

　　在子宫平滑肌、胎膜组织，镜下可见ETA免疫反应阳性产物呈浅黄色或棕黄色颗粒状沉积;定量结果显示，早产感染组与早产非感染组比较，ETA的平均OD值均明显升高(P&<0.01);而早产非感染组与正常足月组类同(P&>0.05)(详见表1、图1)。表1 免疫组化检测子宫平滑肌、胎膜组织ETA平均OD值比较

　　3 讨论

　　绒毛膜羊膜炎是病原体进入羊膜腔引起羊水、胎膜(羊膜、绒毛膜)、胎盘的感染，又称羊膜腔感染或宫内感染，能致感染性早产，是围生儿、产妇的发病率、死亡率升高的主要原因。深入研究绒毛膜羊膜炎致感染性早产的分子生物机制，有助于为临床的预防和治疗提供新的思路;但由于其机制涉及大量细胞因子、受体的参与、释放等，国内外学者对其认识不一。而本实验通过免疫组织化学染色及图像分析方法，对以上各组孕母子宫平滑肌、胎膜内ETA表达的检测;发现在绒毛膜羊膜炎致感染性早产孕母子宫平滑肌、胎膜内，ETA的表达显著高于早产非感染组及正常足月组。有些作者认为：当孕母宫内发生绒毛膜羊膜炎感染时，绒毛膜细胞能分泌大量的炎性细胞因子 [4~6]，促使子宫平滑肌功能提前激活[7]，大量增多的ETA能与母血中高浓度的ET-1特异结合，激活蛋白激酶C(PKC)，引起子宫平滑肌细胞Ca2+大量内流，胞浆内急剧升高的Ca2+诱发了子宫收缩。本实验证实了早产感染组ETA在胎膜组织中的显著表达，而羊水中又有高水平的ET-1[8]，二者特异结合产生生物学效应，刺激羊膜中前列腺素前身物质的生成，使局部产生前列腺素(PGs，能刺激子宫强力收缩[9])增多;且已证实，PGs又可通过胎膜组织转运到子宫平滑肌，那么子宫平滑肌内PGs的大量积累可诱发子宫收缩。笔者认为，早产感染组子宫平滑肌、胎膜内ETA异常增高的表达，诱发了子宫强有力的收缩，致分娩发动提前，可能是引起感染性早产的原因之一。但迄今为止，感染性早产的发生分子机制还是一个未阐明的医学问题，且与妊娠相关的激素和细胞因子都可能参与其中，本实验证实ETA的异常增高的表达，通过哪种途径调节，有待进一步研究。

　　(本文图片见封三)

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参考文献

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