【摘要】 目的 建立羟甲香豆素制剂的溶出度测定方法。 方法 依照《中国药典》(2005年版)附录溶出度项下第二法， 以硼酸缓冲液1 000 mL为溶出介质，转速为75 r·min-1；紫外分光光度法测定，测定波长360 nm。结果 30 min内产品的溶出率达到80%以上，辅料对主药测定无干扰，羟甲香豆素线性范围为2.000 2～10.001 0 μg·mL-1(r=0.999 9)，回收率为100.3% (RSD=0.8%，n=9)。结论 本法操作简便、准确可靠，填补了羟甲香豆素制剂质量标准的空白。
【关键词】 羟甲香豆素制剂 溶出量 紫外分光光度法
Abstract:Objective To develop a method for determination of dissolution of hymecromone preparation. Methods According to the dissolution test (Pharmacopoeia of the Peoples Republic of China (2005 Edition， volume 2， supplemental method 3 )， 1 000 mL boric acid buffer solution was selected as release medium， rotate speed was 75 r·min-1， and determined by UV with the detection wavelength at 360 nm. Results The dissolution rate of hymecromone preparation was over 80% in 30 min. The excipients did not interfere with the determination. The calibration curve was linear in the range of 2.000 2-10.001 0 μg·mL-1(r=0.999 9). The average recovery (n=9) was 100.3% (RSD=0.8%).Conclusions The method was simple， accurate and precise， and might be used in dissolution determienation of hymecromone preparation.
Key words:hymecromone preparation; dissolution; UV
羟甲香豆素(hymecromone)是香豆素衍生物，能松弛奥狄括约肌，具有较强的解痉、镇痛作用，同时也能温和、持续地促进胆汁分泌，加强胆囊收缩和抑菌作用，具有明显的利胆作用。中国药典2005年版收载了胶囊剂和片剂，但没有收载溶出度的测定方法［1］。目前国内未见有该药物的溶出度试验方法研究的文献报道。该药物水溶性差［2］，有必要制定其溶出度测定方法。本文按中国药典2010版的“溶出度及释放度应用指导原则”（草案）对羟甲香豆素制剂的溶出度试验进行了研究，建立了该制剂的溶出度测定方法，填补了该制剂质量标准的空白。
1 试药与仪器
1.1 试药 羟甲香豆素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100241200501），羟甲香豆素胶囊、羟甲香豆素片（均为国内厂家生产），水为纯化水，其他试剂均为分析纯。
1.2 仪器 ZRS8型智能溶出仪(天津大学无线电厂)；通用U1901紫外分光光度计。
2 溶出度测定方法的建立与结果
2.1 溶出介质选择 分别以质量分数0.1%吐温，pH7.4磷酸盐缓冲液（中国药典），硼酸缓冲液（12.37 g硼酸加14.91 g KCl，加水至1 000 mL，取此液50 mL，加0.2 mol/L NaOH 11.8 mL，加水至200 mL，用1 mol/L NaOH调节pH为8.6），0.5%十二烷基硫酸钠，3%十二烷基硫酸钠等溶剂作为溶出介质进行饱和度试验。以上介质加入羟甲香豆素原料，在37 ℃振摇20 h以上，取出放冷，滤过，取续滤液，参照英国药典2008版羟甲香豆素［3］下有关物质检查方法，用高效液相色谱法测定各介质中羟甲香豆素的含量。结果在3%十二烷基硫酸钠中羟甲香豆素的质量浓度最高（975.2 mg/L），在0.5%十二烷基硫酸钠中的质量浓度仅为335.0 mg/L。中国药典2010版的“溶出度及释放度应用指导原则”（草案）规定“十二烷基硫酸钠的浓度不超过0.5%”，因此弃用3%十二烷基硫酸钠，而选择非表面活性剂溶剂中饱和度较高的硼酸缓冲液（质量浓度500.4 mg/L）1 000 mL作为溶出介质。
2.2 溶出度测定
2.2.1 检测波长的确定 用硼酸缓冲液配制质量浓度为6 mg/L的羟甲香豆素对照溶液，按照中国药典2005年二部附录ⅣA在200～400 nm波长范围内进行扫描，结果羟甲香豆素在360 nm波长处有最大吸收。因此选定360 nm作为检测波长，测定质量浓度为6 mg/L，采用同时测定对照品溶液，计算得样品溶出量的方法。
2.2.2 线性关系试验 精密称取羟甲香豆素对照品适量，用介质溶解并稀释成每1 mL中含羟甲香豆素2.000 2～10.001 0 μg的5个溶液，依法测定，以吸光度为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=0.096 3x+0.001 8，r=0.999 9 (n=5)。
2.2.3 回收率试验 按羟甲香豆素标示量约50%、80%和100%配制样品，用介质制备回收溶液（各3份），依法测定，结果平均回收率为100.3%，RSD=0.8%（n=9)。
2.2.4 稳定性试验 取线性试验溶液3于0、2、4、18 h测定，结果平均吸光度为0.580 6，RSD=0.1%，表明溶液在18 h内测定稳定。
2.2.5 溶出方法及转速的选择 用浆法（75 r·min-1）和篮法（100 r·min-1），以硼酸缓冲液1 000 mL作为溶出介质，分别进行片剂和胶囊剂的溶出度试验，于45 min取样，经0.45 μm微孔滤膜过滤，用所选介质稀释，按“2.2.1”项下方法测定。结果见表1。
从表1结果可见，浆法溶出效果较篮法好。因此选用浆法（75 r·min-1）为溶出度试验方法。
表1 溶出方法及转速选择试验结果（略）
Table 1 Results of different dissolution methods and rotating speeds of dissolution test
2.2.6溶出取样时间及限度确定 按选定的溶出度试验方法，取本品片剂及胶囊剂各1批，分别在15、30、45、60 min（胶囊至90 min）取样，每次吸取溶液5 mL，经0.45 μm微孔滤膜过滤，用所选介质稀释，测定溶出量，同时立即在溶出杯中补充溶剂5 mL，结果见表2。
表2 不同取样时间试验结果（略）
Table 2 Results of different dissolution time of dissolution test
注：A厂片剂规格：0.2 g/片;D厂胶囊规格：0.2 g/粒
从表2结果可见，样品在30 min后溶出量均达90%以上。考虑到本品为难溶性药物，因此把取样时间定为45 min，限度定为标示量的70%。
2.2.7 空白干扰试验 按处方配制空白片，按“2.2.1”项下方法测定吸光度（浓度为样品测定液的5倍），结果吸光度在0.001左右；取各厂家胶囊，倾出内容物，用甲醇洗净，用介质配制空胶囊溶液（浓度为样品测定液的4倍），按“2.2.1”项下方法测定吸光度，结果吸光度均在0.006左右。表明辅料及胶囊壳均对样品测定基本无影响。
2.3 样品测定 按选定溶出度测定方法测定7批样品的溶出度，结果见表3。
3 讨论
3.1 羟甲香豆素为难溶性药物，为控制产品质量，有必要制订制剂的溶出度测定方法和限度。根据中国药典2010版的“溶出度及释放度应用指导原则”（草案），进行了多种溶剂的饱和度试验以考察所选介质是否符合漏槽条件。结果选定的硼酸缓冲液1 000 mL基本符合漏槽条件（对规格为0.2 g的样品，完全满足漏槽条件则体积应为1 200 mL）。虽然此介质pH值稍高于中国药典2010版“溶出度及释放度应用指导原则”（初稿定为pH值一般不超过7.5），样品规格为400 mg时也不符合漏槽条件。但此品种特殊，至今无法找到完全符合中国药典2010版“溶出度及释放度应用指导原则”的介质，因此暂定以硼酸缓冲液1 000 mL为溶出介质。国外已有对溶解度小的药物的溶出度试验采用流通池法或把溶出杯增大至4 000 mL的方法［4］。待这些方法成为中国药典的法定方法，相信溶解度小的药物的溶出度试验方法可得到解决。
表3 样品溶出度测定结果（略）
Table 3 Results of dissolution tests of samples from different manufactures
3.2 经方法学研究表明，线性试验、回收率试验及稳定性试验等均符合要求，确证本方法简单、准确，能有效控制羟甲香豆素制剂的质量。
3.3 羟甲香豆素制剂的溶出度方法试验是《中国药典》2010版二部研究课题，现此品种的起草及复核工作已上报国家药典委员会。
致谢:本文得到我所原药典委员会委员何铭新及药典委员会委员潘锡强、董顺玲的技术指导；还得到国家药典委员会2010版中国药典“《溶出度试验指导原则（新增）》”起草者之一、上海市药品检验所的谢沐风老师的实验方法设计指导，在此一并致谢！
参考文献
［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005年版二部［M］.北京：化学工业出版社，2005：659-660.
［2］ 张莉， 朱晶.复方胆通胶囊中羟甲香豆素的含量及溶出度的测定 ［J］.中药新药与临床药理，2006，17（3）：222-224.
［3］ BP 2008［S］.1107-1108.
［4］ ROYAL H，VIVIAN G.溶出度试验技术［M］.5版.宁保明，张启明，译.北京：中国医药科技出版社，2007：94.