张家口地区健康中老年人群MspI多态性

　　　　　　 作者：刘芳 杨翠军 李华 孙黎

【摘要】 目的 探讨张家口地区健康中老年人群CYP1A1基因MspⅠ的多态性。方法 采用等位基因特异性扩增和聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP)技术，分析了360例张家口地区健康成人的CYP1A1基因3′端限制性内切酶MspⅠ位点的3种基因型的分布规律。结果 对照组MspⅠ基因型TT占35.8%，基因型TC占50.2%，基因型CC占14.0%，等位基因TC分别为60.9%、39.1%;实验组MspⅠ基因型TT占34.0%，基因型TC占51.2%，基因型CC占14.8%，等位基因T、C分别为59.6%、40.4%。结论 张家口地区健康老年人群CYP1A1基因存在MspⅠ的多态性，与健康中青年人群没有显著性差异。

【关键词】 细胞色素P4501A1;等位基因;基因多态性;MspⅠ

　 CYP1A1属细胞色素P(CYP)450超基因家族成员，是外源性和内源性化合物在体内代谢的重要Ⅰ相酶之一，参与多种内外源性化学物质的体内代谢过程〔1〕。现今，已发现CYP1A1基因MSPⅠ多态在不同的种族、年龄、民族和地区的分布具有差异，并有报道其多态性与某些癌变的发生相关〔2〕。CYP1A1基因主要分布于肺、肾、胃肠道、皮肤、胎盘等组织中，对内源性和外源性化合物在体内的代谢有重要的作用，主要通过氧化、还原、水解等作用，改变化合物所具有的功能基团，或使其分解。CYP1A1主要参与多环芳烃类化合物(PAH)的代谢，把其代谢为酚类物质活性很强的环氧化物，这些环氧化物在致癌、致突变中都有重要作用〔3〕。本研究采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP)的技术，探讨张家口地区健康中老年人群CYP1A1基因MspⅠ多态性分布，以期为本地区癌症的病发提供参考。

　　1 材料与方法

　　1.1 研究对象 对照组随机选择360例无血缘关系的健康张家口地区人员，均在原籍稳定居住2代以上，年龄18～55岁，其中男性186例，女性174例。老年组随机选76名无血缘关系的健康张家口人：年龄60～78岁，平均年龄65岁，其中女性32例，男性44例。经张家口河北北方学院第一附属医院门诊查体健康，无遗传疾病的健康人群。

　　1.2 标本收集 从上述人群中均抽取空腹外周静脉全血3 ml，应用赛百盛公司的基因组DNA快速提取试剂盒提取基因组DNA。

　　1.3 主要试剂及仪器 引物由北京纽英伦生物公司合成，限制性内切酶MspⅠ购于北京纽英伦生物公司，德国Eppendorf PCR扩增仪， DYYIII2稳压稳流电泳仪(北京六一仪器厂)，纽英伦生物公司的基因组DNA快速提取试剂盒，BioRad凝胶成像分析仪。

　　1.4 CYP1A1 MspⅠ位点基因分型 采用等位基因特异性扩增方法PCRRFLP技术为CYP1A1MspⅠ位点基因分型。PCR的反应条件:反应总体积50 μl，含有200 μmol/L dNTP，上游引物序列为5′CAGTGAAGAGGTGTAGCCGCT3′，0.4 μmol/L，下游引物序列为5′TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT3′，0.4 μmol/L，模板DNA 0.4 μg，1 U TaqDNA聚合酶，最后加灭菌双蒸水补齐至50 μl。扩增参数：97℃预变性7 min，然后95℃变性50 s，66℃退火50 s，72℃延伸1 min，30个循环后72℃继续延伸10 min。取10 μl PCR产物，加10 U MspⅠ限制性内切酶，37℃水浴4 h，酶切产物经2.0%琼脂糖凝胶(含0.5 μg/ml溴化乙锭)电泳60 min，电压100 V，在凝胶成像分析仪上观察结果。

　　1.5 CYP1A1 MspⅠ基因型测定 扩增产物经酶切后分为3种基因型：没有MspⅠ切割位点的等位基因为纯合子基因型TT(野生型)，可见340 bp一个片段;有MspⅠ切割位点的等位基因为纯合子基因型CC(突变型)，可见200及140 bp 两个片段;杂合子基因型TC(杂合型)，可见340、200、140 bp 3个片段。

　　1.6 统计学处理 采用SPSS11.5软件，分析等位基因和基因型频率分布，检验群体基因型频率分布是否符合HardyWeinberg平衡定律，组间进行t检验。

　　2 结 果

　　CYP1A1基因MspⅠ多态分布，张家口地区中青年健康人群该多态位点T及C等位基因的频率分别为60.9%，39.1%。TT，TC，CC基因型分布频率分别为35.8%，50.2%，14.0%。经χ2检验基因型分布符合HardyWeinberg平衡定律(χ2=0.031，P&>0.05)。张家口地区老年健康人群该多态位点T及C等位基因的频率分别为59.6%，40.4%。TT，TC，CC基因型分布频率分别为34.0%，51.2%，14.8%。经χ2检验基因型分布符合HardyWeinberg平衡定律(χ2=0.039，P&>0.05)。对张家口地区健康老年和中青年人群CYP1A1基因MspⅠ多态分布差异不显著。该多态位点PCR扩增产物的MspⅠ酶切电泳见图1。

　　3 讨 论

　　CYP1A1是细胞色素P450的同工酶，位于第15号染色体q22qter上，有7个外显子和6个内含子，基因全序列为6 311个碱基对〔4，5〕。CYP1A1在肝脏总的CYP450含量中存在不到1%，但是参与2.5%的物质代谢过程，广泛分布于机体组织中〔6～8〕。目前研究发现，CYP1A1基因发生在CYPIA1基因的3′非编码区腺苷酸下游264 bp处，位于6 235位点，由碱基T→C，即CYP1A1基因MspⅠ多态性，突变基因变异导致酶活性增高，而且提高了酶的诱导性，同时，CYP1A1基因MspⅠ多态分布具有明显的地区和种族差异。大量研究发现，CYP1A1基因多态性与环境毒素暴露相关的肿瘤遗传易感性有关〔9，10〕。本研究发现张家口地区健康中老年人群CYP1A1基因呈多态性分布，与中青年人群差异不显著，为进一步研究张家口地区CYP1A1基因多态性与肿瘤等疾病的关系奠定了基础，并有助于基因多态性与肿瘤易感性的研究，对识别肿瘤高危人群，有针对性地进行行为干预，对人类的身体健康和生活质量的保证，具有十分重要的临床意义和实用价值。

参考文献

　1 Miyoshi Y，Takahashi Y，Egawa C，et al.Breast cancer risk associated with CYP1A1 genetic polymorphisms in Japanese women〔J〕.Breast J，2002;8(4):20.

　　2 Singh V，Rastogi N，Sinha A，et al.A study on the association of cytochromeP450 1A1 polymorphism and breast cancer risk in north Indian women〔J〕.Breast Cancer Res Treat，2007;101(1)：738.

　　3 Belogubova EV，Ulibina YM，Suvorova IK，et al.Combined CYP1A1/GSTM1 at risk genotypes are overrepresented in squamous cell lung carcinoma patients but underrepresented in elderly tumorfree subjects〔J〕.J Cancer Res Clin Oncol，2006;132(5)：32731.

　　4 李佳圆，龙启明.有机氯农药、CYP1A1易感基因型与乳腺癌的相互作用研究〔J〕.现代预防医学，2008;35(1)：348.

　　5 Agundez JA.Cytochrome P450 gene polymorphism and cancer〔J〕.Curt Drug Metab，2004;5(3):21124.

　　6 雷霆雯，饶 敏.苗族人群细胞色素及CSTM1基因多态性分析〔J〕. 中国公共卫生，2009;25(10):12023.

　　7 曹文疆，盛 磊，杨 军，等.新疆伊犁哈萨克族居民载脂蛋白B基因多态性与血脂的关系〔J〕.实用医技杂志，2009;16(10):7702.

　　8 Hou L，Chatterjee N，Huang WY，et al.CYP1A1 Val462 and NQO1 Ser187 polymorphisms，cigarette use，and risk for colorectal adenoma〔J〕. Carcinogenesis，2005;26 (6):11228.

　　9 Purohit V，Khalsa J，Serrano J.Mechanisms of alcoholassociated cancers：introduction and summary of the symposium〔J〕.Alcohol，2005;35(3):15560.

　　10 Sato Y，Araki H，Kato J，et al.Human mesenchymal stem cell sxenografted directly to rat liver are differentiated into human hepatocytes without fusion〔J〕.Blood，2005;106(2):75663.