作者：杨玉梅 应康 王风华 关辉 覃建民 徐继辉 张长在 白音夫 宋一亭
【摘要】 目的：观察比较广枣中三种不同工艺提取物的抗心律失常作用，为找到一种抗心律失常作用较强的主要化学单体或简单复合物打下基础。方法：（1）乌头碱导致大鼠心律失常；（2）哇巴因导致豚鼠心律失常；（3）结扎冠脉导致大鼠心律失常。结果：样品1、样品2可显著延长乌头碱所致大鼠早搏、室速、室颤、心脏停搏出现时间，使哇巴因所致豚鼠心律失常出现时间延长，明显减少结扎大鼠冠状动脉所导致的室性异位搏动数、推迟心律失常出现时间、缩短室速时程、降低室颤发生率，并呈剂量依赖性。样品3使乌头碱所致大鼠室速、室颤出现时间缩短，使哇巴因所致豚鼠心律失常出现时间缩短，对结扎大鼠冠状动脉所导致的大鼠室性异位搏动数、心律失常出现时间和室速时程均有不同程度的负性影响。结论：样品1、样品2能对抗乌头碱、哇巴因、结扎冠状动脉等所导致的心律失常的发生；而样品3不仅没有对抗作用，还有可能促进心律失常的发生。
【关键词】 广枣提取物；乌头碱；哇巴因；结扎冠状动脉；心律失常
Abstract Objective：To compare the antiarrhythmia actions of 3 kinds of extracts by different methods from Choerospondias Axillaris (Roxb.) Burtt et Hill. Methods:（1）i.v aconitine was used to induce arrhythmia in the rats;(2)i.v ouabain was used to induce guinea pig arrhythmia;(3)Arrhythmia was induced by ligation of coronary artery in the rats. Results: Compared with the NS group， both sample 1 and sample 2 significantly prolonged the lasting time of ventricular ectopic beats(VE)，ventricular tachycardia(VT) ，ventricular fibrillation(VF) and heart arrest（HA） induced by using i.v aconitine in the rats，significantly prolonged the lasting time of arrhythmias induced by using i.v ouabain in guinea pig，and greatly reduced ectopic beats ，delay the beginning time of arrhythmias ， shortened the persisting time of ventricular tachycardia and decreased frequency of ventricular fibrillation in the rats of ligation of coronary artery. The actions showed a concentration-dependent tendency. Sample 3 produced opposite effect. Conclusion: Sample 1 and Sample 2 both resisted the occurrence of arrhythmias induced by aconitine， ouabain and ligation of coronary artery. Sample 3，however，promoted the occurrence of arrhythmias.
Key words Extracts of Choerospondias Axillaris (Roxb.) Burtt et Hill;Aconitine;Ouabain;Ligation of coronary artery;Arrhythmias
广枣，又名南酸枣Choerospondias axillaris(Roxb.) Burtt et Hill，系漆树科南酸枣属植物的干燥成熟果实，为蒙医常用药材之一，具有行气活血、养心、安神之功效，主治气滞血瘀、胸痹作痛、心悸气短、心神不宁等，临床上用于抗心律失常和增强心泵功能疗效显著［1］。药理实验也证明，广枣具有显著的抗心律失常和保护心肌缺血作用［2］，并一直认为广枣的心血管活性成分为黄酮类［2-4］。但广枣的这些作用究竟是总黄酮在发挥作用还是其中某一个成分或某一些组分在发挥作用？为了从广枣中找到一种抗心律失常作用较强的主要化学单体或简单复合物，内蒙古中蒙医研究所采用不同的提取方法得到16种广枣提取物。经我室试验，首先筛选出三种对心脏有较强活性的提取物，即样品1、样品2、样品3。本实验拟观察比较这三种提取物的抗心律失常作用。
1 材料与方法
1.1 广枣提取物
由内蒙古中蒙医研究所提供，批号030811。样品1：乙醇提取，醋酸乙酯萃取，生药质量浓度为8.25g/mL；样品2：乙醇提取，NKA树脂分离，10%乙醇淋洗浓缩，生药质量浓度为1.72g/mL；样品3：乙醇提取，NKA树脂分离，70%乙醇淋洗浓缩，生药质量浓度为2.41g/mL。实验时将三种被试药分别配成1.15、0.58、0.29g/mL的溶液。
1.2 实验动物
Wistar大鼠，许可证号SCXK（蒙）2002-0001（清洁级），购自内蒙古大学实验动物中心。豚鼠，购自内蒙古生物制药厂。
1.3 主要试剂
乌头碱，E.Merck产品，加盐酸溶解，调pH值7～8之间，用生理盐水配成所需浓度。哇巴因，卫生部药品检验所分装的标准品，批号1970.18(4)。维拉帕米，山东鲁能制药有限公司生产，批号0302293。奎尼丁（硫酸喹尼啶），中国医药公司北京采购供应站，批号950527。肝素，中国江苏万邦生化医药股份有限公司生产，批号0305111。
1.4 主要仪器
BL-410生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司）。自动抽注机ZCZ-50（浙江医科大学医学仪器实验厂）。DH-140型动物人工呼吸机（浙江医科大学医学仪器实验厂）。
1.5 方法
1.5.1 药物对乌头碱所致大鼠心律失常的作用
健康大鼠，雌雄兼用，随机分为11组，每组10只。（1）对照组:生理盐水20mL/kg；（2）奎宁丁组:15mg/kg；（3）～（5）分别为样品1大剂量组:23.0g/kg、中剂量组:11.5g/kg、小剂量组:5.8g/kg；（6）～（8）分别为样品2大剂量组:23.0g/kg、中剂量组:11.5g/kg、小剂量组:5.8g/kg；（9）～（11）分别为样品3大剂量组:23.0g/kg、中剂量组:11.5g/kg、小剂量组:5.8g/kg。各组大鼠均以2mL/100g的容量灌胃给药，连续3天。于末次给药后1h，腹腔注射3%戊巴比妥钠1mL/kg麻醉后，仰位固定，用BL-410生物机能实验系统观察并记录Ⅱ导ECG。静注10μg/mL乌头碱25μg/kg，5s注完，观察并记录30min内室性早搏（室早）、室性心动过速（室速）、心室纤颤（室颤）、心脏停搏（停搏）的出现时间，进行组间t检验或χ2检验。
1.5.2 药物对哇巴因所致豚鼠心律失常的作用
健康豚鼠，雌雄兼用，随机分为11组，每组10只。组别及给药剂量同1.5.1。各组豚鼠均以2mL/100g的容量灌胃给药，连续3天。于末次给药后1h，腹腔注射3%戊巴比妥钠1mL/kg麻醉后，仰位固定，用BL-410生物机能实验系统观察并记录Ⅱ导ECG。用自动抽注机通过左侧颈外静脉恒速注射30μg/kg的蛙巴因0.3mL/min，观察并记录室性早搏（室早）、室性心动过速（室速）。
1.5.3 药物对结扎冠脉所致大鼠心律失常的作用
健康大鼠，雌雄兼用，随机分为11组，每组10只。（1）结扎冠状动脉+生理盐水，（2）结扎冠状动脉+维拉帕米（20mg/kg），（3）结扎冠状动脉+样品1（23g/kg），（4）结扎冠状动脉+样品1（12g/kg），（5）结扎冠状动脉+样品1（6g/kg），（6）结扎冠状动脉+样品2（23g/kg），（7）结扎冠状动脉+样品2（12g/kg），（8）结扎冠状动脉+样品2（6g/kg），（9）结扎冠状动脉+样品3（23g/kg），（10）结扎冠状动脉+样品3（12g/kg），（11）结扎冠状动脉+样品3（6g/kg）。各组大鼠分笼喂养，观察2d后，均以2mL/100g的容量灌胃给药，对照组给予等容量的生理盐水，连续15d。于末次给药后1h，3%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔麻醉，仰位固定，用BL-410生物机能实验系统观察并记录Ⅱ导ECG，人工呼吸下在胸骨左侧剪断3、4肋间，切开心包膜，轻压胸壁挤出心脏，在肺动脉圆锥与左心耳之间用0号丝线结扎冠状动脉左前降支，然后将心脏送回胸腔，缝合胸壁。记录结扎冠脉后30min内室性异位搏动数（包括室早、室速、室扑）、室速持续时间、室颤发生率及心律失常出现时间。
2 结果
2.1 药物对乌头碱所致大鼠心律失常的作用
与生理盐水对照组比，样品1、样品2显著延长大鼠早搏、室速、室颤、心脏停搏出现时间，并呈明显的剂量依赖性；样品3使大鼠室速、室颤出现时间缩短，且也呈一定的剂量依赖性，早搏、心脏停搏出现时间虽然随着剂量加大也缩短，但无统计学意义。详见表1。表1 广枣提取物对乌头碱所致大鼠心律失常的影响（略）
2.2 药物对哇巴因所致豚鼠心律失常的作用
与生理盐水对照组比，样品1、样品2使豚鼠心律失常出现时间延长，出现心律失常所需哇巴因的量增加，并呈剂量依赖性。样品3却可使豚鼠心律失常出现时间缩短，出现心律失常所需哇巴因的量减少。详见表2。表2 广枣提取物对哇巴因诱发豚鼠心律失常的影响（略）
2.3 药物对结扎冠脉所致大鼠心律失常的作用
与生理盐水对照组比，样品1和样品2可明显减少结扎大鼠冠状动脉所导致的室性异位搏动数，推迟心律失常出现时间，缩短室速时程，降低室颤发生率。样品3对室颤发生率没有明显影响，但对室性异位搏动数、心律失常出现时间和室速时程均有不同程度的负性影响。详见表3。表3 广枣提取物对冠脉结扎所致大鼠心律失常的影响（略）
3 讨论
乌头碱能直接兴奋心肌，激活Na+通道，促进Na+内流，加速细胞膜的去极化，提高心房传导组织和房室束—浦顷野系统等快反应细胞的自律性，从而导致心律失常；哇巴因通过抑制Na-KATP酶，导致细胞内Na+高K+低、自律性升高、传导阻滞，并由于Ca2+内流紊乱而导致振荡性后电位，从而诱发多种类型的心律失常；结扎冠状动脉可使传导阻滞和兴奋折返，从而造成心肌缺血梗死诱发心律失常，且引起的室性早搏第一高峰期对Ca2+拮抗剂特别敏感［5］。实验结果表明，样品1、样品2可显著延长乌头碱所致大鼠早搏、室速、室颤、心脏停搏出现时间，使哇巴因所致豚鼠心律失常出现时间延长，明显减少结扎大鼠冠状动脉所导致的室性异位搏动数、推迟心律失常出现时间、缩短室速时程、降低室颤发生率，并呈剂量依赖性。结果提示，样品1和样品2具有广谱抗心律失常作用，且作用机制可能与抑制心肌组织上的Na+、Ca2+离子转运有关，这与我室前期实验结果是一致的［2，4，6］。
实验中发现，样品3使乌头碱所致大鼠室速、室颤出现时间缩短，使哇巴因所致豚鼠心律失常出现时间缩短，对结扎大鼠冠状动脉所导致的大鼠室性异位搏动数、心律失常出现时间和室速时程均有不同程度的负性影响。提示样品3不仅没有抗心律失常作用，反而可能促进心律失常的发生。一般认为，只有使心率减慢的药物才具有抗快速型心律失常作用，而加快心率的药物往往具有致心律失常作用［7］。离体心功能实验证明，样品1、样品2和样品3均可明显减慢大鼠离体心脏的心率而不影响心肌收缩力［8］。本实验结果提示，并非所有能减慢心率的药物都具有抗快速型心律失常作用。
化学成分分析表明，样品1中主要含有黄酮、脱氧尿苷、α-谷甾醇、没食子酸以及原儿茶酸；样品2中主要含有黄酮、脱氧尿苷及α-谷甾醇；样品3中则主要含有黄酮类。其中脱氧尿苷是首次在广枣中分离出来的一种新的天然产物［9］。长期以来，人们一直认为广枣中的心血管活性成分为黄酮类［3］。本实验表明，主要含有黄酮类的样品3却没有抗心律失常作用，而样品1和样品2的抗心律失常作用无明显差异。这至少给我们如下提示：（1）广枣的抗心律失常作用可能与黄酮类无关；(2)广枣黄酮类必须与其他成分合用可能才具有抗心律失常作用；(3)没食子酸以及原儿茶酸不是广枣抗心律失常作用的主要成分；(4)新的天然产物脱氧尿苷可能在广枣抗心律失常作用中起着重要作用。
参考文献
［1］宋一亭.广枣总黄酮对心脏舒缩功能，缺血型心电图改变和心律失常的即时效应［J］.内蒙古中医药，1986，(1):33.
［2］李增唏，田凤居，石山，等.蒙药广枣总黄酮抗实验性心律失常作用［J］.中国药理学报，1984，5（4）：251.
［3］邓丽嘉，王月梅，顾维彰.蒙药广枣化学成分研究［J］.中草药，1989，20(8)：3.
［4］徐继辉，杨玉梅，宋一亭，等.蒙药广枣总黄酮对大鼠离体心脏的抗心律失常作用［J］.中国民族医药杂志，2001，7（2）：25.
［5］徐叔云.药理实验方法学［M］.3版.北京：人民卫生出版社，2002：865.
［6］杨玉梅，覃建民，宋一亭，等.广枣总黄酮对大鼠心室肌细胞ICa、Ito和细胞［Ca2+］i的影响［J］.中国药理学通报，2004，20（7）：768.
［7］王培德，张慧灵，杨玉梅，等.刺乌头碱对麻醉大鼠心电图的影响及其抗实验性心律失常作用［J］.中国药理学通报，1997，13(3):263.
［8］王凤华，杨玉梅，徐继辉，等.蒙药广枣三种黄酮类成分对离体心功能的影响［J］.中国民族医药杂志，2005，11（5）：27.
［9］樊海燕，宋一亭，赛音.广枣中一种胸腺嘧啶脱氧尿苷的分离与鉴定［J］.中国天然药物，2005，3（2）：25.