免疫组化检测乳腺癌细胞雌孕激素受体胞浆着色原因的分析

【关键词】 免疫组

　　免疫组化染色检测乳腺癌瘤细胞的雌、孕激素受体（ER、PR）不仅应用于诊断，而且对于指导临床治疗工作也已起着极其重要的作用。目前已被许多单位列为常规的检测项目。ER、RE表达的正确部位应在细胞内，但在ER、PR染色过程中，有时出现胞浆着色，这个问题令人困惑。我科自1993年以来对约500例的乳腺癌标本进行了ER、PR的检测，现结合我们工作的体会和教训，对ER、PR胞浆着色的原因进行分析，并就对策进行探讨。

　　1 材料与方法

　　1.1 抗原修复及其条件 抗原修复的条件不同会导致不同的染色结果，甚至出现胞浆着色的现象。对此，我们对抗原修复的条件做了多组实验：（1）酶消化条件:设3个温度组，即＜30℃、37℃、＞37℃；4个时间组，即5min、10min、20min、30min组。（2）微波加温处理抗原修复（柠檬酸缓冲液中）条件:设3个温度组，即80℃、85℃、95℃；3个时间组，即5min、10min、20min时间组。

　　1.2 第一抗体的稀释度 我们对同种试剂的几种稀释度进行实验，发现一抗稀释度低者出现胞浆着色。一抗稀释度过高者，阳性强度弱且阳性率低。由于一抗稀释度的不合适而引起胞浆着色的现象，我们采取的办法是对新进的一抗试剂分别进行不同稀释度的实验：设4个稀释度组，稀释度和制片数分别为：1∶30的10张、1∶50的10张、1∶80的10张、1∶100的10张。

　　1.3 显色剂浓度及显色时间的控制 我们对几种浓度的显色剂进行显色（同种切片），当浓度过高时出现了胞浆着色的现象。对几种显色时间进行显色（同种切片），显色时间过长者亦出现胞浆着色的现象。对此我们将显色剂浓度控制在：DAB 30mg，TBS 50mL，3% h3O2 20μL配置（特别是3% h3O2 量不可过多）。显色时间的控制尤为重要，我们做的几组实验中，显色时间控制在1min左右的不出现胞浆着色的现象，时间稍长就可能出现不同程度的胞浆着色。因此，显色时间的长短应严格控制。

　　1.4 其他条件 如洗液pH值及新鲜程度，各抗体的浓度及孵育条件等都可影响染色结果，导致胞浆着色。对此，我们把条件控制在，Tris－HCl pH7.4～7.6且每周应更换洗液1次，二抗、三抗浓度控制在1∶200且最好现用现配，孵育的条件以4℃或室温为宜，一抗最好4℃过夜，总之，应保持缓冲液适当的pH值及液体的新鲜程度，若染色切片的量增多，也应适当缩短缓冲液辅助试剂的更换时间。

　　2 结果
　　
　　抗原修复实验结果：只有先经过酶消化（0.4%胃酶）33℃10min后，再进行抗原修复加热处理（柠檬酸缓冲液煮），温度应95℃ 10min的方法是抗原修复的最佳条件。其染色结果比只用酶消化或只用柠檬酸缓冲液煮的结果要好，且无胞核浆着色的现象。
　　
　　第一抗体的稀释度实验结果：1∶30、1∶50细胞核着色较浅，不容易辨认，1∶100着色太重，致某些细胞显色，ER 1∶60、PR 1∶80染色强度较好且无胞浆着色。因此进每批新试剂（一抗）时都应对其稀释度进行检测，找出合适的稀释度，才可减少胞浆着色的现象。
　　
　　一抗的性能取决于试剂的质量。长期以来我们采用中山公司提供的Zymed公司试剂，用过许多批号的一抗，其染色效果很好，定位也准确。但有一次，当我们更换了新的一抗试剂后出现了胞浆着色的现象。我们设想这是否是一抗的特异性不强所致。确定或否定这种设想的简易办法是找出以前染色较好的（胞核着色）的阳性片加以对照，结果阳性片也出现了胞浆着色的现象，于是我们更换了另一批号的一抗试剂，用同样的阳性片去实验，结果这次阳性片显示仅胞核着色。由此可见，一抗产品批号不同，其染色结果会有不同，或在运输、储存过程中也会出现性能问题，影响其特异性。

　　3 讨论
　　
　　我们采用的是单克隆抗体，其特异性强，定位好。但在各染色步骤完全相同的条件下仍有个别病例出现胞浆着色的现象，它可能是核膜自溶所造成的。对此现象，我们加以阳性对照片，染色后阳性对照片的胞核着色，但前述病例仍有胞浆着色。再次更换试剂，并加阳性对照片，这次结果，阳性对照片为胞核着色，但那一例仍有胞浆着色。此时应考虑到标本固定对抗原体保存的影响，于是我们又将及时固定和不及时固定的两个乳腺癌组织块进行染色，其结果可见及时固定的乳腺癌组织块，染色效果较好，着色部位在胞核，而未及时固定组织块则出现有胞浆着色的现象。这一实验说明，组织未及时固定可致组织细胞核膜自溶，染色后胞浆出现着色的现象，甚至组织的基本形态也会有所改变。

参考文献