人胎儿脐带血代替成人血制备血平板的实验研究

【摘要】 　　目的 寻找和扩大血平板制备的血源。方法 采用人胎儿脐带血替代成人血制备血平板并与成人血平板分别进行78例标本细菌分离培养，观察细菌总出阳率、分类出阳率、出阳时间和4种不同血型板上的出阳率等几方面的实验指标。结果 经观察两种血平板的细菌总出阳率、分类出阳率、出阳时间和4种不同血型板上出阳率结果均一致。尽管细菌出阳时间在24小时，脐血平板出阳率100%较优于成人血出阳率97.6%，但培养48小时两钟血平板出阳率均为100%，菌株鉴定结果完全相同。结论 人胎儿脐带血替代成人血制备血平板培养细菌具有高度的可行性和可信性，是一种可作推广的实用新技术。

【关键词】 人胎儿脐带血 成人静脉血 细菌 培养

　　血平板是细菌分离培养的常用营养性培养基，迄今制备血平板普遍采用成人血或兔、羊血，然基层医院无血库又无动物室，故血源困难，常出现血平板供不应求的状况。为适应基层医院的需要，寻找、扩大血平板制备的血源，笔者于2006年1月至2008年10月采用人胎儿脐带血（以下简称脐血）替代成人血制备血平板，并与成人血平板进行细菌分离培养的效果比较，结果较为满意。现报道如下。

　　1 材料和方法

　　1.1 材 料

　　1.1.1 普通显微镜、电热恒温培养箱、冰箱、培养皿、三角烧瓶、小玻璃珠、量筒、粗天平、厌氧玻璃罐、蜡烛、载玻片、止血钳、剪刀。

　　1．1．2 试剂

　　普通营养琼脂粉、革兰氏染液，细菌鉴定常用试剂。

　　1．1．3 血源

　　人胎儿脐带血、成人静脉血。

　　1．1．4 标本

　　泸州市龙马潭泸化医院和古蔺县人民医院部分送检标本共78份（血18，痰16，脑脊液5，胸水4，关节囊液1，尿液14，粪便2，化脓创伤分泌物13，阴道分泌物5）。

　　1．2 方法

　　1．2．1 准备

　　(1)每次所用培养皿、止血钳、剪刀、玻片及2个装有小玻璃珠5～7粒的三角烧瓶均高压灭菌。(2)将已灭菌的4%普通营养琼脂（PH7.6） 隔水加热融化冷却至50℃左右备用。

　　1．2．2 血源采集

　　(1)成人血（AB、O、A、B）：按常规消毒抽取肘静脉血30ml左右置备好的三角烧瓶中，立刻摇动烧瓶3分钟左右以去纤维蛋白。(2)脐血（AB、O、A、B）：在胎儿娩出后，按接生要求，一止血钳夹住脐带胎儿一端，一止血钳夹住胎盘端，无菌操作取二钳之间脐带内残留血30ml左右，置备好三角烧瓶中，迅速摇动烧瓶3分钟左右以去纤维蛋白。

　　1．2．3 培养基制备程序

　　去纤维成人血→50℃左右4%普通营养琼脂＼
　　　　　　　　　　 →10%血琼脂
　　去纤维脐血→50℃左右4%普通营养琼脂 ／
培养基→倾注平皿→无菌试验。

　　1．2．4 检测程序

　　按常规检测程序分别将每份标本同时接种于两种血平板中，培养48小时进行细菌鉴定。

　　2 结 果

　　2．1 两种血平板细菌生长（出阳）对比

　　测量结果见表1。表1 两种血平板中细菌培养总出阳结果（略）

　　2.2 细菌分类出阳对比

　　78份标本细菌分类结果见表2。表2 两种血平板上出阳细菌分类（略）

　　2.3 两种血平板出阳时间对比

　　以培养12、18、24、30及48小时分别观察，在两种血平板上的出阳时间，其结果见表3。表3 两种血平板细菌培养出阳时间观察（略）

　　2.4 4种血型之两种血平板出阳对比

　　取5份标本分别接种于AB、0、A、B血型脐血及成人血平板中，出阳对比结果见表4。表4 不同血型的两种血平板细菌培养出阳结果（略）

　　3 讨 论

　　细菌生长需要的营养物质有氮源、碳源、生长因素和无机盐等几方面。人和兔、羊的血具备以上营养条件，能满足细菌生长需要，故血培养基在一般细菌培养中起着非常重要的作用，在人血制备培养基中，以成人血制备血平板为惯例，然人胎儿脐血虽与成人血成分较一致，却无制备血平板先例，而作废弃物处理。本研究从开发血源和利用废弃脐血出发，设计将成人血和脐血分别制备血平板，同时接种78份标本。经观察细菌总出阳率、分类出阳率、出阳时间和4种不同血型板上出阳率几方面实验指标，两种平板结果均一致。尽管细菌出阳时间在培养24小时，脐血平板出阳率100%较优于成人血平板出阳率97.6%，但培养48小时两种血平板出阳均为100%，菌株鉴定结果完全相同。两种血平板24小时出阳率的差异可能某些成人血含有较多的抗生素或抗体干扰细菌生长有关［1］，新生儿脐血中虽IgG已与成人相近，但大多数免疫指标低于正常成人［2］，因此细菌生长在脐血平板中相对受干扰较小。以上表明，人胎儿脐带血替代成人血制备血平板培养细菌具有高度的可行性和可信性，是一项可作推广的实用新技术。

参考文献