作者：柳维军，阳云平，徐志强
【摘要】 目的 探讨TopoⅡ及Ki-67在食管鳞癌的表达及其与肿瘤分化程度、淋巴结转移的关系。方法 应用免疫组化检测75例食管鳞癌组织中TopoⅡ和Ki-67的表达情况。结果 TopoⅡ和ki-67的表达与食管鳞癌的组织分化程度和淋巴结转移均有密切关系（P＜0.05），并且TopoⅡ和ki-67阳性表达具有较强的一致性。结论 检测TopoⅡ和ki-67的表达可作为判断食管鳞癌预后的重要指标。
【关键词】 食管鳞癌；TopoⅡ； ki-67； 免疫组化
ABSTRACT Objective To discuss the expression of Topo II and Ki-67 in esophageal sqauamous cell carcinoma and their relationship with the histodifferentiation grades and lymph node metastasis. Methods Immunohistochemistry was applied to study the expression.Results Topo II and Ki-67 were closely related to the histodifferentiation grades and lymph node metastasis of esophageal squamous cell carcinoma， and there existed a great consistence between the positive expression of Topo II and Ki-67.Conclusions The expression of Topo II and Ki-67 can be used as the important index in judging the prognosis of esophageal squamous cell carcinoma.
KEYWORDS esophageal squamous cell carcinoma Topo II Ki-67 immunohistochemistry
DNA拓普异构酶(TopoⅡ)是一种核内酶，是DNA复制时必需的酶，也是某些抗肿瘤药物的“靶分子”，抗肿瘤药物通过与其结合而行使抗肿瘤作用。当基因突变时，此酶的转录水平或活性下降，抗癌药物不能与其结合而产生耐药，使抗肿瘤药物不能发挥抗癌活性而耐药。细胞增殖和凋亡在肿瘤发生时起着相当重要的作用。因此，了解肿瘤增殖动力学参数，可以监测病变的进展、指导临床治疗并对预后进行判断。Ki-67是一种与细胞增殖有关的核抗原，它的阳性率与肿瘤的恶性程度、分级，淋巴结转移也呈正相关［1］。但在食管鳞癌中的表达报道较少，我们应用免疫组化检测75例食管鳞癌TopoⅡ及Ki-67的表达情况，并观察其与肿瘤分化程度及淋巴结转移的关系。
1 材料与方法
1.1 材料
收集仪陇县人民医院2002年至2007年7月已确诊的食管鳞癌75例，其中高分化26例，中分化21例，低分化28例；59例有淋巴结转移。
1.2 方法
选择原病例蜡块（10%中性福尔马林液固定），4um厚连续切片3张，分别HE染色，TopoⅡ、Ki-67免疫组织化学染色（Emision Systen二步法），抗原修复液采用高PH值9.0修复液，试剂盒购自成都基因公司。
1.3 结果判定
每张切片选择典型部位2～3个视野观察，记数500个肿瘤细胞中TopoⅡ、Ki-67核表达阳性细胞数。判断标准如下：TopoⅡⅠ级为阴性（＜25%），Ⅱ～Ⅳ级为阳性（25～50%为Ⅱ级，50～75%为Ⅲ级，＞75％为Ⅳ级）。Ki-67＞５％阳性（其中5～25％为＋，25～50％为＋＋，50～75为＋＋＋，＞75％为＋＋＋＋）。
1.4 统计学处理
SPSS11.12软件进行χ2检验、kappa检验。
2 结 果
2.1 TopoⅡ的表达与生物学特征的关系见表1。表1 TopoⅡ的表达与食管鳞癌分化程度及淋巴结转移的关系（略）
从表1可知：TopoⅡ阳性表达率在高分化组明显低于中、低分化组（P＜0.05)；无淋巴结转移低于有淋巴结转移（P＜0.05)。一般肿瘤分化愈低，TopoⅡ阳性表达率愈高（见图1、2）。TopoⅡ阳性表达率在肿瘤原发灶与淋巴结转移灶中基本相近。
2.2 Ki-67的表达与生物学特征的关系见表2。表２ ki-67的表达与肿瘤分化程度及转移的关系（略）
ki-67阳性表达指数与肿瘤分化程度和淋巴结转移均有密切关系，一般地肿瘤分化愈低，阳性表达指数愈高（P＜0.05）（见图3、4）。有淋巴结转移者阳性表达指数较强（P＜0.05），且在肿瘤原发灶与淋巴结转移灶中其表达指数基本相近。
2.3 TopoⅡ与Ki-67在食管鳞癌组织中表达的关系：见表3。表3 TopoⅡ的表达与Ki-67的表达间的关系（略）
从表3可知，ki-67的表达与TopoⅡ的表达，具有较强的一致性（kappa=0.535，P＜0.05）。
3 讨 论
3.1 TopoⅡ是DNA复制时必需的酶，也是某些抗肿瘤药物的靶分子，抗肿瘤药物只有通过与其结合才能行使抗肿瘤作用，TopoⅡ活性的下降是肿瘤细胞产生耐药的机制之一。因此检查TopoⅡ在肿瘤中的表达情况有利于我们对肿瘤的化疗提供正确化疗方案，提高患者的生存率。通过对75例食管鳞癌TopoⅡ的表达情况的分析，TopoⅡ的阳性表达率分别是高分化鳞癌23.08%，中分化90.05%，低分化组高达96.4%，有淋巴结转移组79.66%，无淋巴结组31.25%，经统计分析，TopoⅡ的阳性表达率与肿瘤分化程度和淋巴结转移状况均有非常密切的关系，与文献报道其它类型恶性肿瘤基本相似［２，３］。
3.2 Ki-67是一种能识别存在于增殖细胞核基质内与细胞增殖相关的核蛋白，其表达根据细胞周期而异。有报道， Ki-67在不同临床分期恶性肿瘤之间的表达差异性显著，转移病例指数显著高于无转移病例［4，5］。通过对75例食管鳞癌Ki-67的表达进行观察（见表2），经统计分析，Ki-67表达特点为高分化鳞癌表达指数较低，中、低分化鳞癌表达指数较高，且肿瘤分化越低，表达指数越高。Ki-67阳性表达指数也与食管鳞癌的转移密切相关，有淋巴结转移病例中表达指数偏高，无淋巴结转移病例中表达指数较低，与文献报道基本相近，因此认为Ki-67是判断肿瘤预后的较好指标之一。
3．3 由于TopoⅡ常作为肿瘤耐药检查的指标，Ki-67常作为判断肿瘤预后的指标。研究中发现，TopoⅡ在对食管鳞癌阳性表达的同时，Ki-67也基本阳性表达（见表3），并且阳性表达细胞的部位与TopoⅡ基本相近，具有较强的一致性。通过分析对比， TopoⅡ除了能作为耐药基因检查的指标，也可与Ki-67一样可作为肿瘤预后判断的指标之一。
参考文献
［１］吴玉新，王靖华，王华等.Ki-67、早期凋亡之相关蛋白M30在子宫内膜的表达及其与预后的关系［J］.中华病理学杂志，2003，32（4）：314～318.
［2］孙丽梅，朱继江，王恩华等.耐药基因TopoⅡ在肺癌中表达与预后的研究［J］.中国医科大学学报，2000，29（1）：17～18.
［3］张军航，马琳，崔肃等.P-糖蛋白，GST-∏，TopoII在食管癌组织中的表达及其临床意义［J］.中国肿瘤临床杂志，2001，28（6）：455～456.
［4］张雪宝，陆天才，张超等.宫颈原位癌中Ki-67的表达及其与细胞凋亡的关系［J］.诊断病理学杂志，2004，11（6）：418～420.
［5］王怡，王国英，张华献等.星形细胞瘤中Ki-67、CyclinD1、P16表达及相互关系［J］.临床与实验病理学杂志，2003，19（4）：405.