作者：姜永红，姜之炎，马晶，胡鹏，张婧延，石李，徐彬彬
【摘要】 目的 探讨TH1、Th3、TH17的效应因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-4、IL-17与小儿肺炎支原体肺炎(MPP)中医证型的关系。方法 选取55例MPP住院患儿，根据症状体征进行中医辨证分型，检测血清IFN-γ、IL-4、IL-17含量，与33例正常组儿童进行比较。结果 55例MPP中，风热闭肺证25例，痰热闭肺证3例，痰瘀互阻证11例，脾虚痰蕴证16例。MPP患儿血清IFN-γ、IL-4、IL-17较正常组儿童均升高，IL-4、IL-17显著升高(均P&<0.01)， IFN-γ升高无统计学意义。痰热闭肺证的血清IFN-γ、IL-4含量均高于其余3组(P&<0.01);脾虚痰蕴证IL-4低于其余3组(P&<0.01);IL-17含量各证型之间差异无统计学意义。结论 MPP患儿中医证候与TH细胞具有相关性，可为不同证型分期论治提供较客观的免疫学指标。
【关键词】 小儿;支原体肺炎;中医证候;TH细胞;相关性
Abstract：Objective To study TCM syndromes characteristic of mycoplasma pneumoniae pneumonia (MPP) and explore its relationship with TH1， Th3， TH17 cells’ effect factors IFN-γ， IL-4， IL-17. Method Fifty-five cases of MPP hospitalized children， detemined TCM syndrome differentiation according to symptoms and signs， were detected serum levels of IFN-γ， IL-4， IL-17， with 33 normal children as normal control group. Results In 55 cases， there were 25 cases of the wind-heat blocking the lung syndrome， 3 cases of the phlegm-heat blocking the lung syndrome， 11 cases of the binding of phlegm and blood stasis syndrome， 16 cases of the phlegm accumulate due to spleen deficiency syndrome. Serum IFN-γ， IL-4， IL-17 level increased in MPP patients compared with control group， with significant difference in IL-4 and IL-17 (P&<0.01)， while no difference in IFN-γ level. Serum levels of IFN-γ and IL-4 in syndrome of phlegm-heat blocking the lung were higher than the other three syndromes significantly (P&<0.01). Serum level of IL-4 in syndrome of phlegm accumulate due to spleen deficiency was lower than the other three syndromes significantly (P&<0.01). There was no difference in IL-17 levels among the various syndromes. Conclusion The TCM syndrome and TH cells of MPP children have relativity， which provides more objective immunology index sign for the MPP clinical treatment based on syndrome differentiation.
Key words：children;mycoplasma pneumoniae pneumonia;TCM syndrome;TH cells;correlation
肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae，MP)是引起小儿社区获得性肺炎的常见病原，其发病机制与免疫高度相关。目前对肺炎支原体肺炎(Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia，MPP)与TH细胞的关系正处于探索阶段，尤其是新发现的TH17细胞，对其在发病中作用的研究，将为治疗提供新的思路。为此，我们对MPP不同中医证型的TH1、Th3、TH17细胞的效应因子，血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-4、IL-17进行了检测，探讨TH细胞与MP中医证型的关系。
1 资料与方法
1.1 病例选择
1.1.1 纳入标准
(1)符合MPP诊断标准，参照《诸福堂实用儿科学》[1]：①发热，热型不定，热程1～3周;②刺激性咳嗽湿啰音;④胸部X线摄片肺门阴影增浓，支气管肺炎改变，间质性肺炎改变，均一的实变影;⑤血清特异性MP-IgM阳性(≥1∶80)。(2)年龄4～12岁。(3)监护人知情同意，并能够配合治疗者。
1.1.2 排除标准
(1)有哮喘病史，或过敏性疾病者;(2)近期使用过糖皮质激素及免疫调节剂者;(3)血清学检查合并病毒感染者;(4)痰或深部咽拭子细菌培养为阳性者;(5)合并有严重的心血管、肝、肾、内分泌、血液系统、神经系统疾病者。
1.2 一般资料
55例MPP病例均来自2009年9月-2010年5月本院儿科住院患儿，其中男29例，女26例，平均年龄(6.0±1.7)岁。正常对照组33例，来自健康体检儿童，其中男18例，女15例，平均年龄(5.5±1.6)岁。
1.3 研究方法
1.3.1 辨证分型
参照1994年国家中医药管理局制定的《中医病证诊断疗效标准》[2]和上海市中医儿科小儿肺炎临床优势专病诊疗方案。①风热闭肺：初起发热，恶风，有汗热不解，口渴引饮，咳嗽痰黏或黄，咽部红赤，舌红，苔薄黄或薄白而干，脉浮数。②痰热闭肺：发病较急，壮热烦躁，咳嗽喘促，呼吸困难，气急鼻煽，喉间痰鸣，声如拽锯;重证颜面口唇青紫发绀，两胁煽动，摇身撷肚，舌红绛或紫黯，苔黄腻而厚，脉滑数。③痰瘀互阻：咳嗽迁延不愈或反复发作，昼轻夜重，痰黏难咯，可伴发热或无发热，或诉胸痛，痛有定处，口渴不欲饮，舌黯红，苔白腻或黄腻而干，脉细涩或弦滑。④脾虚痰蕴：咳嗽迁延不愈，痰声漉漉，气短多汗，神疲乏力，面色少华，纳少便溏，舌淡，苔薄白，脉细无力。
1.3.2 指标检测与方法
用颗粒凝集法检测MP-IgG、IgM抗体，各组患儿晨起空腹采集EDTA抗凝静脉血3 mL，低温离心(3 000 r/min， 5 min)，留取1.5 mL血浆，-70 ℃冻存待测，酶免法检测血清IFN-γ、IL-4、IL-17。MP病原学检测试剂盒由日本富士株式会社提供。人IFN-γ、IL-4、IL-17检测试剂盒由美国R&&D公司提供，用美国THERMO MULTISKAN MS酶标仪检测。
1.4 统计学方法
数据用SPSS15.0统计软件进行处理，结果采用±s表示，采用ONE-WAY ANOVA进行分析。
2 结果
2.1 支原体肺炎中医证候分布
本研究55例患儿，风热闭肺证25例(45.5%)，痰热闭肺证3例(5.5%)，痰瘀互阻证11例(20.0%)，脾虚痰蕴证16例(29.1%)。
2.2 支原体肺炎患儿血清干扰素-γ及白细胞介素-4、白细胞介素-17分析
结果显示，MPP患儿血清IFN-γ、IL-4、IL-17较正常对照组均升高，IFN-γ升高无统计学意义，IL-4、IL-17升高差异有统计学意义，均P&<0.01。与正常对照组比较，IL-4/IFN-γ和IL-4/IL-17差异有统计学意义，P&<0.01;IL-17/IFN-γ差异无统计学意义。见表1。
2.3 中医证型与血清干扰素-γ及白细胞介素-4、白细胞介素-17的关系
结果显示，血清IFN-γ含量痰热闭肺证高于其余3组(P&<0.01)，其余3组间差异无统计学意义。IL-4含量，痰热闭肺证高于其余3组(P&<0.01)，脾虚痰蕴证低于其余3组(P&<0.01)。IL-17含量各证型之间差异无统计学意义。IL-4/IFN-γ各证型之间差异无统计学意义。IL-17/IFN-γ痰热闭肺证低于其余3组，与脾虚痰蕴证比较差异有统计学意义(P&<0.05);脾虚痰蕴证高于其余3组，但差异无统计学意义。IL-4/IL-17痰热闭肺证高于其余3组(P&<0.01);脾虚痰蕴证低于其余3组，与风热闭肺证和痰热闭肺证比较差异有统计学意义(P&<0.01)。见表2。表1 MPP患儿血清IFN-γ、IL-4、IL-17含量与正常对照组比较表2 不同证型MPP患儿血清IFN-γ、IL-4、IL-17含量比较
3 讨论
国内外研究显示，MPP发病中存在TH1/Th3失衡[3]，但对于哪种免疫细胞占优势众说纷纭。近年来新发现的TH17细胞，也参与了MPP的发病，但其在发病中的作用研究尚不足。本研究显示，MPP患儿TH1、Th3、TH17的效应因子IFN-γ、IL-4、IL-17均升高，以Th3的效应因子IL-4占主要优势，其次是TH17的效应因子IL-17，两者均显著升高，TH1的效应因子IFN-γ虽升高，但无统计学意义。MPP的IL-4/IFN-γ和IL-4/IL-17均显著升高，说明MPP的Th3/TH1和Th3/TH17均发生失衡。
MPP患儿IL-4含量浓度增高，可通过B淋巴细胞分泌IgE，而IFN-γ为IgE合成的潜在抑制物，所以，当IL-4及IL-4/ IFN-γ比值增高时可导致机体IgE增高，引起气道高反应性。Koh等[4] 发现，14例MPP患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4和IL-4/IFN-γ显著增高，而12例肺炎链球菌肺炎和8例正常对照组差异无统计学意义，3组中IFN-γ含量差异无统计学意义。Romero-Rojas等[5]对感染MP大鼠的脾细胞进行研究显示，与非感染组比较，MP感染大鼠的脾细胞产生更多的IL-4和较少的IFN-γ。这些都与本研究结果一致。
TH17细胞是新发现的一种IL-23相关且能够分泌IL-17的新的TH细胞亚群，它的分化过程和生物学功能等方面与THl和Th3细胞亚群均有不同之处，其可介导免疫调节、宿主防御和自身免疫。Qun Wu等[6]研究显示，MP感染时BALF中IL-17蛋白的水平显著增加，肺内IL-17、IL-17C和IL-17F的基因表达显著上调。上述研究也和本研究的结果相符。细胞因子IL-17、IL-6、IL-4、TNF、IFN-γ等在免疫调节方面相互诱导、相互制约形成了免疫调节网络。 (下转第99页)
当MP感染时，这些细胞因子出现紊乱，导致肺内炎症加重并出现肺外各系统的并发症[7]。本研究发现，中医证型与TH细胞具有相关性。痰热闭肺证TH1、Th3、TH17的效应因子IFN-γ、IL-4、IL-17均高于风热闭肺证，说明TH细胞随病情的严重而升高。痰瘀互阻证各细胞因子的值低于MPP重症痰热闭肺证，而略高于轻症风热闭肺证，且我们发现，这种趋势在TH17细胞尤为明显。其机制考虑两方面，一方面各细胞因子在疾病的发展过程中存在逐渐上升的趋势，另一方面可能与痰瘀有关。脾虚痰蕴证各细胞因子的值均低于其余3个证型，说明疾病在向愈的过程中，TH细胞因子也逐渐向正常回落。
痰热闭肺证Th3/TH1比值低于风热闭肺证，考虑其标准差过大所致，痰瘀互阻证和脾虚痰蕴证均低于风热闭肺证，说明疾病恢复过程中，该比值逐渐回落。痰热闭肺证TH17/TH1比值低于风热闭肺证，且疾病恢复过程中逐渐升高，说明病情越轻，该比值越大。Th3/TH17比值与Th3/TH1基本一致，病情越重比值越高，疾病恢复期逐渐回落。
本研究结果显示，MPP存在TH1、Th3、TH17细胞的紊乱，其效应因子IFN-γ、IL-4、IL-17均升高，且不同中医证型的TH细胞具有不同的特点，为中医辨证施治及机制研究提供了免疫学的思路。
参考文献
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