青秦液对高尿酸血症大鼠尿酸代谢及有关酶活性的影响

　　 作者：孟凤仙，刘世菊，张继胜，郝桂香，陶晓华，刘慧，孙华，倪青，张润云，宋金玲

【摘要】 目的 观察青秦液对高尿酸血症大鼠尿酸代谢及相关酶活性的影响。方法 将70只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组及青秦液大、中、小剂量组。采用灌服腺嘌呤及乙胺丁醇进行造模。阳性药组按0.09 mg/kg体重灌服秋水仙碱；大剂量组给予5 g/(kg·d)青秦液灌胃，中剂量组给予2.5 g/(kg·d)青秦液灌胃；小剂量组予1.25 g/(kg·d)青秦液灌胃。采用磷钨酸法测定血尿酸和尿尿酸，采用酶比色法测定黄嘌呤氧化酶(XOD)和腺苷脱氨酶(ADA)的含量。结果 秋水仙碱及青秦液均具有明显降低高尿酸血症大鼠血尿酸水平的作用，但二者比较差异无统计学意义(P＞0.05)；在降低高尿酸血症大鼠血ADA活性作用方面，阳性药组及青秦液大、中、小剂量组均明显低于模型组(P＜0.05，P＜0.01)，且青秦液中、小剂量组大鼠血ADA含量明显低于阳性药组(P＜0.05)；阳性药组及青秦液大、中、小剂量组大鼠血XOD含量均明显低于模型组(P＜0.05，P＜0.01)。结论 青秦液具有明显降低高尿酸血症大鼠血尿酸水平及血ADA、XOD活性的作用；在降低高尿酸血症大鼠血ADA活性作用方面，青秦液中、小剂量组明显优于阳性药组。

【关键词】 青秦液；高尿酸血症；尿酸代谢；代谢酶；大鼠

　　Abstract：Objective To observe the effect of Qingqinye on hyperuricemia uric acid metabolism and related enzymes activity. Methods Seventy Wistar rats were pided into normal group， model group， positive medicine group， Qingqinye high dosage group， Qingqinye middle dosage group and Qingqinye low dosage group. Model was made with adenine and ethambutol by gavage. Colchicine 0.09 mg/(kg·d) were administered to the rats of positive medicine group by gavage. Rats of Qingqinye high dosage group were administered Qingqinye 5 g/(kg· d)， middle dosage group were 2.5 g/(kg·d) and low dosage group were 1.25 g/kg·d by gavage. The level of serum uric acid and urinary uric acid were determined by phosphotungstic acid method. The level of XOD and ADA were determined by enzymic colorimetric method. Results Colchicine and Qingqinye significantly lowered serum uric acid level of hyperuricemia rats， while there was no significant statistical difference between them (P＞0.05). Positive medicine group， Qingqinye high dosage group， Qingqinye low dosage group and Qingqinye middle dosage group reduced blood ADA activity and better than model group (P＜0.05， P＜0.01)， what’s more， Qingqin ye middle dosage group and Qingqinye low dosage group were obviously better than positive medicine group in this respect (P＜0.05). Positive medicine group， Qingqinye middle dosage group， Qingqinye low dosage group， Qingqinye high dosage group were better than model group in reducing blood XOD activity (P＜0.05， P＜0.01). Conclusion Qingqinye can decrease the level of serum uric acid， ADA and XOD activity in rats hyperuricemia model. Qingqinye middle dosage group and Qingqinye low dosage group were better than positive medicine group in reducing blood ADA activity.

　　Key words： Qingqinye；hyperuricemia；uric acid metabolism；metabolic enzymes；rat

　　高尿酸血症属于复杂的多基因遗传病。现已研究证明，嘌呤代谢过程中某些酶发生基因突变，致酶活性改变，使体内
的尿酸生成过多，或清除过低，引发高尿酸血症。青秦液是由青蒿、秦艽、秦皮、土茯苓、车前子、虎杖、苏木、等组成的纯中药制剂，为临床经验方。临床观察结果显示，可以明显改善高尿酸血症血尿酸及尿尿酸水平并能调节高尿酸血症相关酶的活性。为进一步明确其作用机制，笔者进行了此项研究。

　　1 实验材料

　　1.1 动物

　　健康雄性Wistar大鼠70只，体重(250±10)g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证号：SCXK(京) 2002-0003。实验动物在中国中医科学院实验动物中心饲养。

　　1.2 药物

　　青秦液药物组成：青蒿15 g，秦艽15 g，秦皮10 g，土茯苓15 g，车前子15 g，虎杖15 g，苏木8 g，忍冬藤25 g，黄柏8 g，苍术8 g。上述药物由北京同仁堂有限公司提供，共煎煮2次。合并2次药液，浓缩成2.2 g原药材/mL，4 ℃储存备用。腺嘌呤(美国Amresco，批号0183)；乙胺丁醇，杭州民生药业集团有限公司(国药准字：H33021602)。秋水仙碱，昆明制药集团有限公司(国药准字：H53021389)。

　　1.3 试剂

　　尿酸试剂盒(批号20070809)、黄嘌呤氧化酶(XOD)试剂盒(批号20070711)、腺苷脱氨酶(ADA)试剂盒(批号20070712)，均由南京建成生物工程研究所提供。

　　2 实验方法

　　2.1 分组、造模及给药

　　将实验大鼠随机分为正常组(10只)、模型组(12只)、阳性药组(12只)、青秦液大剂量组(12只)、青秦液中剂量组(12只)、青秦液小剂量组(12只)。除正常组外，各组大鼠每日上午按0.2 g/kg体重灌服腺嘌呤及按0.25 g/kg体重灌服乙胺丁醇进行造模[1]。

　　阳性药组每日下午按0.09 mg/kg体重灌服秋水仙碱；青秦液大剂量组每日下午按5 g原药材/kg体重灌服青秦液，青秦液中剂量组每日下午按2.5 g原材料/kg体重灌服青秦液，青秦液小剂量组每日下午按1.25 g原药材/kg体重灌服青秦液，正常组灌服等容量蒸馏水。

　　2.2 指标检测
　　
　　第14、21、28日各组大鼠空腹眼眦采血，每只0.5 mL， 5 000 r/min离心10 min，分离血清，采用磷钨酸法测各组大鼠的血尿酸值，第21天将各组大鼠留尿3 h，尿液采用磷钨酸法测尿尿酸值。具体操作按试剂盒说明书进行。同时对第28天采集的血清用酶比色法检测血清中XOD和ADA的含量，具体操作按试剂盒说明书进行。实验过程中有部分大鼠死亡脱落。

　　3 统计学方法

　　采用SPSS11.0统计软件进行统计学处理，所有数据均用x±s表示。均值之间比较采用t检验。

　　4 结果

　　(见表1～表3)表1 青秦液对高尿酸血症大鼠血尿酸的影响(略)注：与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与正常组比较，**P＜0.01(下同)表2 青秦液对高尿酸血症大鼠尿尿酸的影响(略)表3 青秦液对高尿酸血症大鼠血ADA及XOD的影响(略)

　　5 讨论

　　随着基因分子生物学、细胞免疫学的深入发展，对本病病理机制有了全新的认识。研究发现，高尿酸血症病理机制与基因遗传有关。尿酸是由体内合成或核酸分解代谢产生，占体内总尿酸的80%，从含嘌呤或核蛋白的食物中核苷酸分解占20%。参与尿酸代谢的嘌呤核苷酸有次黄嘌呤核苷酸(GMP)。研究表明，嘌呤代谢过程中某些酶发生基因突变，致酶活性改变，最终使体内尿酸生成过多。嘌呤代谢催化酶发生缺陷主要包括：①磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRS)。嘌呤代谢过程中PRS活性过高可加速核糖焦磷与嘌呤核苷酸的合成，从而导致体内尿酸生成过多。研究表明，鼠肝脏的PRS是由催化亚基PRS1、PRS2(34KD)和结合亚基PAP39(39KD)及PAP41 (41KD)组成的四聚体，形成PRS家族，结合亚基PAPs总的氨基酸序列与催化亚基略有不同，形成PAPs亚家族，可抑制机体催化亚基的作用。人PRS的结构与鼠相似，有研究发现，编码PRS的PRPs基因发生突变，可导致嘌呤核苷酸反馈抵抗的PRS活性增高。②次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核苷酸转移酶(HGPRT)。

　　HGPRT基因发生突变可致HGPRT活性降低，从而导致鸟嘌呤转化为鸟嘌呤核苷酸和次黄嘌呤转化为次黄嘌呤核苷酸减少，以致后两者的嘌呤代谢反馈减弱，使代谢终产物尿酸升高。迄今已发现HGPRT基因编码区1～9外显子至少存在2 000种突变，这些突变可产生单纯高尿酸血症及高尿酸血症合并复杂的神经、行为障碍(Lesch-Nyhan综合征)等不同的疾病形式。③亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)。目前研究证实，仅有1%～2%的原发性高尿酸血症/痛风与MTHFR及PRS等酶缺陷有关。近年通过对代谢综合征相关基因多态性研究发现，亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因c677t突变与高尿酸血症有关，是高尿酸血症的一个独立危险因素。此外，腺嘌呤磷酸核糖转移酶、黄嘌呤氧化酶、谷胱甘肽还原酶、葡萄糖-6-磷酸酶等酶的异常也与高尿酸血症的发病有关[2]。

　　青秦液为纯中药制剂，具有清热解毒、化瘀止痛功效，临床对高尿酸血症或急性痛风发作均有良好的治疗效果，能有效降低患者血尿酸水平，并有消肿止痛改善临床症状的作用。实验结果表明，青秦液改善血尿酸水平、治疗高尿酸血症及其急性关节炎病理损伤的作用机制在于能有效抑制炎性介质的过度释放，减少炎症反应过程中的免疫损伤，以及调节血尿酸代谢过程中相关酶的分泌水平，从而达到纠正高尿酸状态的目的。青秦液对ADA、XOD的作用机制及对其他相关酶作用效果和机制仍在研究中。

参考文献