关于反相高效液相色谱法测定接骨胶囊中阿魏酸的含量

【摘要】 目的 建立接骨胶囊中阿魏酸的含量测定方法。方法 采用反相高效液相色谱法，色谱柱：Hypersil C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-1%冰乙酸(33∶67)，检测波长为320 nm，流速为1.0 mL/min。结果 阿魏酸在0.12～1.2 μg范围内呈良好的线性关系(r＝0.999 9)，平均回收率为99.6%，RSD＝1.8%。结论 该方法简便、准确，可用于控制接骨胶囊制剂的质量。

【关键词】 接骨胶囊；阿魏酸；高效液相色谱法；含量测定

　　Abstract：Objective To establish a method for determination of Ferulic acid in Jiegu Capsule. Method The samples were determined by RP-HPLC on a Hypersil C18 column (4.6 mm×250 mm， 5 μm). The mobile phase consisted of methanol and 1% acetic acid (33∶67). The detection wavelength was at 320 nm and the flow rate was 1.0 mL/min. Results The calibration curves of Ferulic acid was linear in the range of 6～60 μg/mL (r＝0.999 9). The average recovery was 99.6% and RSD was 1.8%. Conclusion The method is simple and accurate， which can be used for the quality control of Jiegu Capsule.
　　
　　Key words：Jiegu Capsule；Ferulic acid；HPLC；content determination

　　接骨胶囊是在接骨片[《卫生部药品标准·中药成方制剂》(第2册)WS3-B-0402-90]的基础上研制的新制剂，由四号铜粉、川芎、制川乌、当归、乳香(醋炙)、没药(醋炙)、自然铜(煅)7味中药组成，具有散瘀、活血、止痛的功效，临床用于跌打损伤、筋伤骨折、瘀血肿痛。阿魏酸为本品有效成分之一，且含量较高。本试验采用高效液相色谱法对接骨胶囊中的阿魏酸进行了含量测定，为控制本品的质量提供依据。
　　
　　1 仪器与试药

　　日本岛津高效液相色谱仪LC-6A系列；LC-6A溶剂输送泵；SPD-6AV紫外-可见分光检测器；NASTA色谱工作站；7125型定量进样阀。接骨胶囊(自制，规格：0.2 g/粒，批号070810、070812、070814)；阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号110773-9910)。甲醇为色谱纯，醋酸为分析纯，水为重蒸水。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件与系统适用性试验

　　Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇-1%冰乙酸(33∶67，v/v)；检测波长：320 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min。在此条件下，阿魏酸与其他组份分离度大于1.5，按阿魏酸峰计算理论塔板数不低于2 000，色谱峰的对称因子为0.95～1.05。

　　2.2 溶液制备

　　2.2.1 对照品溶液的制备

　　取阿魏酸对照品适量，精密称定，用甲醇配成每1 mL含0.06 mg的溶液。

　　2.2.2 供试品溶液的制备

　　取接骨胶囊50粒，取研细内容物约2.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-水(50∶50， v/v)25 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率200 W，频率40 kHz) 30 min，放冷，再称定重量，用甲醇-水(50∶50，v/v)补足减失的重量，混匀，滤过，取续滤液，即得。

　　2.2.3 阴性对照溶液的制备

　　按照处方比例和制备工艺，制备不含川芎和当归的阴性模拟制剂，照“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。

　　2.3 分析方法验证

　　2.3.1 专属性考察

　　取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液，在上述色谱条件下进样20 μL，记录色谱图，结果见图1。由色谱图知，阿魏酸峰保留时间约15.6 min，阴性对照样品溶液在阿魏酸峰位置无干扰峰，阿魏酸与其他组份可完全分离。

　　2.3.2 标准曲线制备

　　精密吸取阿魏酸对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、10.0 mL，分别置10 mL棕色量瓶中，加甲醇-水(50∶50，v/v)稀释至刻度，摇匀，各进样20 μL，按上述色谱条件进行测定。以阿魏酸浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算得回归方程：Y＝82 824X－560.95，r＝0.999 9，表明阿魏酸在0.12～1.2 μg范围内线性关系良好。

　　2.3.3 精密度试验

　　精密吸取阿魏酸对照品溶液2.0 mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇-水(50∶50，v/v)稀释至刻度，摇匀，进样20 μL，重复进样5次，按上述色谱条件进行测定，结果阿魏酸峰面积RSD＝1.1%。

　　2.3.4 重复性试验

　　取同一批样品(批号070810)约2 g，精密称定，共5份，按“2.2.2”项下方法操作，测定结果的RSD＝1.7%。

　　2.3.5 稳定性试验

　　取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、24 h，精密吸取20 μL，注入液相色谱仪，测定阿魏酸峰面积，RSD＝1.6%，说明供试品溶液在24 h内基本稳定。

　　2.3.6 加样回收率试验
　
　　取已知含量的样品(批号070810)约1 g，精密称定，共9份，分别加入1.5、3.0、4.5 mL阿魏酸对照品溶液，按“2.2.2”项下方法操作，按上述色谱条件测定，结果见表1。表1 接骨胶囊中阿魏酸的加样回收率试验结果（略）

　　2.4 样品测定

　　精密吸取供试品溶液20 μL，按上述色谱条件测定，3批样品测定结果见表2。表2 3批样品的阿魏酸含量测定结果(略)

　　3 讨论

　　样品提取方法及条件考察[1-2]分别采用甲醇-水(50∶50， v/v)、甲醇、流动相为溶剂，分别超声提取15、30、60 min，比较阿魏酸的含量，结果表明，样品用甲醇-水(50∶50，v/v)超声提取30 min较为适宜。另外，本试验曾用甲醇-水(50∶50，v/v)加热回流，结果阿魏酸含量与超声提取30 min比较没有明显提高，但因加热回流操作繁琐，故采用超声提取为样品提取方法。

　　本试验采用高效液相色谱法测定接骨胶囊中阿魏酸的含量，方法简便，结果可靠，可作为该制剂的质量控制方法。

参考文献