作者：姜绍伟，黄敏，刘鉴群，毛卫红
【摘要】 目的 观察和比较肛泰主要成分之一盐酸小檗碱经腹部皮肤、直肠和口服给药后在大鼠体内的药动学变化。方法 通过腹部皮肤和直肠单次给予大鼠肛泰，口服给予等量的盐酸小檗碱溶液，采用HPLC法测定了这3种途径给药后不同时间(0～30 h)大鼠血清中小檗碱浓度。结果 肛泰贴敷、直肠和口服给药的Tmax分别为1、0.5、0.5 h，Cmax分别为127.4、269.4、127.9 g/L，AUC0～30 h分别为1611.44、1055.61、765.88 g/(L·h)。结论 本实验为肛泰的临床应用提供了动物体内的药动学参考。
【关键词】 肛泰；给药途径；盐酸小檗碱；药代动力学；大鼠
Abstract：Objective To observe and compare the pharmacokinetics of hydrochloric berberine in rats administrated Gangtai by 3 routes. Method Rats were taken orally or administrated Gangtai by abdomen skin or rectal， and their serum concentrations of hydrochloric berberine at different time (0～30 h) were determined with HPLC method. Results The main pharmacokinetics parameters of hydrochloric berberine by abdomen skin， rectal and oral administration：Cmax was 127.4， 269.4， 127.9 g/L respectively， Tmax was 1， 0.5， 0.5 h respectively， AUC0-30 h was 161 1.44， 105 5.61， 765.88 g/(L·h) respectively. Conclusion The pharmacokinetics parameters of Gangtai in rats provided academic evidence for clinical application of Gangtai.
Key words：Gangtai；administrated routes；hydrochloric berberine；pharmacokinetics；rat
本实验采用高效液相色谱法测定肛泰口服、腹部皮肤和直肠给药后主要成分之一小檗碱在大鼠体内的经时血浓度(0～30 h)，观察3种给药途径盐酸小檗碱的药动学变化，为肛泰的临床应用提供动物体内的药动学参考和现代研究的理论依据。
1 实验材料
1.1 动物
清洁级SD大鼠，雄性，体重300 g左右，购自北京大学医学部动物中心，合格证号：SCXK(京)2002-0001。
1.2 药物及试剂
肛泰，烟台荣昌制药有限公司生产，批号030901，规格为0.5 g/片，每片含有盐酸小檗碱36 mg；盐酸小檗碱，购自东北制药总厂，含量99%，临用前用0.4% CMC-Na溶液配置成浓度为18 mg/mL的混悬液使用；盐酸小檗碱标准品购自中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯，其余化学试剂为市售分析纯。
1.3 仪器
Waters公司2996型高效液相色谱系统及其Empower工作软件；Mettler AX105十万分之一天平；天津药典标准仪器厂的ZH-2自动涡旋混合器；北京医用离心机厂的LG10-2.4A高速离心机等。
2 实验方法
2.1 给药及血样采集
将大鼠按体重随机分为3组，即腹部皮肤给药组、直肠给药组和口服给药组。腹部皮肤给药组：每只大鼠24 h前去毛贴敷1片肛泰，共贴敷30 h；直肠给药组：每只大鼠直肠给予1片肛泰；口服给药组：每只大鼠口服等量的盐酸小檗碱溶液。3个给药组中每组分为4个小组进行采血：在用药5 min时从眼静脉丛取血1 mL；在用药15 min时从眼静脉丛取血1 mL；在用药0.5、2.0、6.0、24、30 h时从眼静脉丛取血0.8 mL；在用药1.0、4.0、8.0、12、24 h时从眼静脉丛取血0.8 mL。各血样于3 000 r/min离心5 min，取血清，冷冻储存于-20 ℃冰箱待分析检测用。每个采血点动物数为6～8只，腹部皮肤给药组贴敷肛泰30 h者取棉签擦净皮肤表面剩余药物，棉签和肛泰的包装材料一起于20 mL甲醇中超声提取20 min，3 000 r/min离心5 min，取上清液于冰箱4 ℃冷藏保存，供分析检测用。
转贴于2.2 血清小檗碱浓度的测定
2.2.1 色谱条件
Kromasil-C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，北京润博公司产品；检测器为Waters 2996 PDA；泵为Waters 1525；流动相为乙腈-0.04 mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调pH至3)＝30∶70，流速1.0 mL/min；检测波长270 nm；柱温为室温。在该色谱条件下盐酸小檗碱的保留时间约为8 min。
2.2.2 血清样品的制备
准确吸取大鼠血清150 μL，加入150 μL的甲醇，于旋涡混合器上涡旋30 s后，8 000 r/min离心20 min，上清液作为进样液，进样体积为20 μL。
2.2.3 血清标准曲线
在大鼠空白血清150 μL中加入不同量的盐酸小檗碱甲醇标准液，配成0、12.5、25、50、100、200、500 μg/L的标准血样，按照样品制备方法进行样品制备，测得样品峰面积。以血药浓度(C)对样品峰面积(Y)作线形回归，得标准曲线方程：Y＝72.113C＋1096.5，R2＝0.999 9。本结果表明，盐酸小檗碱浓度在12.5～500 μg/L之间与峰面积呈良好的线性关系。
2.3 统计学方法
计算各给药途径各时间点血清盐酸小檗碱浓度的均值和标准差，再根据各时间点的动物数计算标准误；血清盐酸小檗碱浓度以x±s表示，2组的平均血药浓度-时间数据利用《DAS 实用药代动力学程序》(1.0版)处理，计算其主要药代动力学参数。
3 结果
(见表1、图1)表1 3种给药途径小鼠血清盐酸小檗碱浓度、药代动力学比较（略）
大鼠腹部皮肤给予肛泰1片，在1 h即达到最大血药浓度，而后随着给药时间的延长，血药浓度逐渐下降，给药8 h内，血药浓度维持在100 g/L以上，至30 h仍能检测到大鼠血清盐酸小檗碱浓度。大鼠腹部皮肤持续贴敷30 h给予36 mg盐酸小檗碱，还剩余18%的小檗碱未透过皮肤。大鼠直肠给予肛泰1片，达峰浓度时间为0.5 h，最大血药浓度比腹部皮肤高1倍，给药4 h内，血药浓度维持在100 g/L以上，而后血药浓度迅速下降，至给药30 h时大鼠血清盐酸小檗碱浓度低于最低检测限。大鼠口服给予盐酸小檗碱36 mg，达峰时间为0.5 h，比腹部皮肤给药达峰时间快，在给药6 h后血药浓度迅速下降，至给药30 h时大鼠血清盐酸小檗碱浓度低于最低检测限。
4 讨论
根据文献[1]报道，盐酸小檗碱的药代动力学特征为：家兔通过耳静脉注射或家兔前腿肌肉注射给予2 mg/kg盐酸小檗碱，盐酸小檗碱的药代动力学特征符合二室模型，其分布特征是属于全身分布。静脉给药末端消除半衰期为5.28 h；静脉给药48 h后盐酸小檗碱在尿中累积排泄量为4.93%，药后5.5 h在胆汁中的累积排泄量为0.5%。同等剂量的硫酸小檗碱给家兔肌肉注射，其绝对生物利用度为99.77%。Beagle犬静脉给药100 mg盐酸小檗碱的药-时曲线符合二室模型[2]。
本实验结果可见，3种给药途径盐酸小檗碱达峰浓度的排列顺序为直肠&>口服&>腹部皮肤，盐酸小檗碱达峰时间的排列顺序为口服＝直肠&<腹部皮肤，盐酸小檗碱生物利用度的排列顺序为腹部皮肤&>直肠&>口服，维持稳定的血药浓度最长的是腹部皮肤。本实验3种给药途径中，生物利用度口服最低。而直肠给药，虽然能迅速达到较高的血药浓度，但排便可使血药浓度迅速下降，因而也影响了盐酸小檗碱的吸收。透皮给药克服了口服给药的首过效应及直肠给药因排便影响药物的吸收，达到吸收药物较迅速(1 h达峰)、维持稳定的血药浓度时间长(12 h)，从而获得较高的生物利用度。
肛泰产品腹部皮肤和直肠这两种途径给药后盐酸小檗碱的药-时曲线经拟和后符合一室模型，而盐酸小檗碱口服给药符合二室模型，与文献报道的盐酸小檗碱在家兔和Beagle犬体内的药代动力学特征相似[2]；从AUC可见，肛泰产品通过直肠或腹部给药，均能达到有效的治疗效果。
参考文献
[1] Chen CM，Chang HC.Determination of berberine in plasma， urine and bile by high performance liquid chromatography[J].Chromatogr B，1995，665：117－123.
[2] 盛美萍，孙 淇，王 宏.盐酸小檗碱在Beagle狗静脉注射和口服药动学研究[J].中国药理学通报，1993，9(1)：64－67.