儿童呼吸道感染病原菌分布与耐药浅析

作者：姚红艳 林丽 韩吉雪 李博 张睿

【关键词】 呼吸道感染　病原菌　耐药分析
　　呼吸道感染是儿童最常见的一种疾病。常引起儿童发热、咳嗽、咳痰、气急等呼吸道症状。严重影响儿童的身心健康。其中流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、卡他莫拉菌等苛养菌是引起儿童社区获得性感染和呼吸道感染的主要致病菌，可引起肺炎、支气管炎、支气管肺炎、中耳炎、脑膜炎和败血症等。由于其难培养的特性，很少在细菌室的常规培养中培养出。临床医生也常常是根据经验来治疗患儿的呼吸道感染疾病，忽视细菌培养和药敏分析的重要性。
　　1　材料和方法
　　1.1 标本来源
　　标本为本院2009年11月-2010年5月儿科门诊和儿科病房呼吸道感染患儿的咽拭子标本。大多数患儿于用药前采集标本，有39份标本采集于已用抗生素的住院患儿。
　　1.2 分离培养基
　　含有X因子和V因子的哥伦比亚巧克力琼脂培养基。脱纤维羊血哥伦比亚血琼脂平板
　　1.3 药敏培养基
　　HTM药敏培养基(英国Oxoid公司)
　　1.4 药敏纸片美国BD公司产品。
　　1.5 方法
　　咽拭子标本2h内接种于巧克力平板和血平板。置5%CO2培养箱35℃培养18～24h，分离鉴定致病菌。对疑似流感嗜血杆菌(巧克力皿上为小、湿润、透明的露滴样菌落)用金黄色葡萄球菌做卫星试验和X+V、X、V因子纸片法试验。对疑似肺炎链球菌的菌落做革兰染色、Optochin(法国生物梅里埃公司)实验、胆汁溶菌实验、菊糖发酵实验。化脓性链球菌用乳胶凝集法链球菌试剂鉴定。
　　1.6 药敏试验
　　根据NCCLS要求，按2005年NCCLS标准判读药敏结果，并进行统计分析。
　　1.7 质控菌株
　　流感嗜血杆菌ATCCA9243，肺炎链球菌ATCC49619和金黄色葡萄球菌ATCC25923
　　1.8 对卡他莫拉菌进行β-内酰胺酶测定(法国生物梅里埃公司)
　　用接种环挑取受试菌落于头孢硝噻吩纸片上，于10分钟由黄色转变为红色为阳性结果。
　　2　结果
　　2.1 从门诊和病房呼吸道感染患儿的286例咽拭子标本中分离出致病菌株112例。其中流感嗜血杆菌30株，肺炎链球菌26株，卡他莫拉菌16株，化脓性链球菌18株，金黄色葡萄球菌22株。
　　2.2 对分离到的16株卡他莫拉菌进行β-内酰胺酶试验，其中有11株产β-内酰胺酶，产酶率为68.75%
　　3　讨论
　　苛养菌是指对营养要求苛刻，在普通培养基上不生长或难以生长，体外培养需添加特殊因子或其他营养成分才缓慢生长的一类菌。它是儿童呼吸道感染的常见致病菌，包括流感嗜血杆菌，肺炎链球菌和卡他莫拉菌。有报道苛养菌引起的呼吸道感染达80%以上。本研究发现苛养菌为72例，检出率为儿童呼吸道感染致病菌的64.29%(72/112)，居小儿呼吸道感染的首位。其中流感嗜血杆菌30例，检出率为10.49%(30/286)，在苛养菌中位居首位。其次为肺炎链球菌26例，检出率9.09%(26/286)。与国内报道较相符。化脓性链球菌等非苛养茵的检出率也较高，同样是不容忽视的问题。
　　氨苄青霉素作为治疗流感嗜血杆菌的首选药物曾经取得良好的疗效，但自1972年在欧洲首次发现对氨苄青霉素耐药流感嗜血杆菌，其耐药性在世界各地相继被报道。由表1可知，流感嗜血杆菌对氨苄青霉素的耐药率高，为66.66%。与宋葳等报道的73.3%相似。近几年，耐氨苄青霉素的流感嗜血杆菌的发生率各国逐渐上升。Tamargo等对古巴1990-2002年的研究表明，流感嗜血杆菌对氨苄青霉素的耐药率呈上升趋势，为40.7%-54.8%。流感嗜血杆菌对氨苄西林的耐药机制有两方面，一是产生TEM-1和ROB-1β-内酰胺酶，该机制由质粒介导，部分为质粒接合子，并携带完整的TnA型转座子及其他耐药基因；另一机制是细胞壁上青霉素结合蛋白(PBPs)突变导致与氨苄西林的亲和力下降。此外，本研究发现，流感嗜血杆菌对克拉霉素(CLR)、复方新诺明(SXT)的耐药率也较高均达到60%以上，与陈民钧的报道相似。 转贴于 　　 多年来，人们一直把青霉素作为治疗肺炎链球菌的首选药物，但近年世界各地范围内肺炎链球菌对青霉素、红霉素(ERT)、阿齐霉素(AZM)的耐药率不断上升，并且不同地区耐药特点不同，2003的统计结果表明中国大陆对青霉素耐药的肺炎链球菌为45%，明显高于2000年北京、广州、沈阳、成都的15.3%。说明肺炎链球菌对青霉素耐药有广泛性和上升性。本次耐青霉索肺炎链球菌的检测采用K-B法，用苯唑青霉素纸片替代青霉素纸片。研究发现对苯唑西林(OX)耐药的肺炎链球菌为61.53%，高于盛朝凯等报道的54.7%。说明大连地区对青霉素的耐药情况不容乐观。同时肺炎链球菌对常用的几种抗生素耐药率也较高。
　　对于化脓性链球菌极少发现青霉素耐药株。万古霉素，氯霉素，头孢类为其选择药物。敏感率分别为100%、88.88%、77.78%。而对阿齐霉素(AZM)、克林霉素(CC)、四环素(TE)都是高度耐药，达到83.33%以上。
　　过去认为卡他莫拉菌是人类和其他动物上呼吸道的正常寄生菌之一，近10年来报道本菌可引起呼吸道感染和结膜炎、中耳炎、鼻窦炎，偶可引起菌血症、脑膜炎等。特别是在老年人中引起COPD，在儿童呼吸道感染患儿的痰标本中卡他莫拉菌的分离率仅次于流感嗜血杆菌、肺炎链球菌。卡他莫拉菌的一个重要特征是其中至少90%的细菌产生β内酰氨酶，从而导致青霉素和氨基青霉素类抗生素耐药，本研究中16株卡他莫拉菌中有11株产β-内酰氨酶，产酶率为68.75%，但由于检出菌株少，与其他文献缺少可比性，故未作药敏分析。
　　 参 考 文 献
　　[1] 杨永弘.小儿呼吸道感染细菌耐药及其对策[J].中国实用儿科杂志， 2000，15：592.593.
　　[2] 李家泰，Weinsten AJ， 杨敏等. 中国细菌耐药监测研究[J]. 中华医学杂志， 2001，81:8.16.
　　[3] 曾佑群，吴扬.小儿呼吸道感染抗生素的使用及耐药性分析[J].儿科药学杂志， 2002，8:33.34.
　　[4] 万钧，李羲，饶纬华.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌研究进展[J].国外医学呼吸系统分册，2005，25(1):30.33.