关于检测新生儿ABO溶血病的两种方法比较

【摘要】 目的 探讨新生儿ABO溶血病检测方法的准确性和实用性。方法 用微柱凝胶法（MGT）检测新生儿ABO溶血病同时用抗人球蛋白试管法（TAT）作对照。结果 121例作直接Coomb，s试验对照：MGT法阳性有31例，TAT法阳性为18例；游离抗体试验：MGT法阳性61例，TAT法阳性为55例；抗体释放试验共有126例作对照：MGT法阳性为74例，抗人球蛋白试管法阳性为59例。结论 MGT法比传统的TAT法检测新生儿ABO溶血病阳性检出率高，结果判断直观可靠，具有更好的敏感性和特异性。
【关键词】 微柱凝胶法 抗人球蛋白试管法 新生儿ABO溶血病
　　微柱凝胶法因其标本用量少、方便快捷，操作规范，灵敏度高，结果判读方便可靠，能检测出抗人球蛋白试验所不能检出的有意义血样本，易于保存和复查，现已普遍应用于新生儿溶血三项检查[1]。我院自2009年4月-2010年2月用微柱凝胶法开展新生儿ABO溶血三项检测以来，共进行了126例新生儿ABO溶血病的检测，其中有121例直接Coombs试验及游离试验同时做传统的抗人球蛋白试管法。126例抗体释放试验同时做传统的抗人球蛋白试管法，现将两种方法结果报告如下：
　　1 材料、试剂及方法
　　1.1 资料来源 从2009年4月到2010年2月本院新生儿科住院病人送检的病例以及产后区母婴血型不合且黄疸进展快的病儿共126例。其中男81例，女45例。 A型50例、B型59例、O型17例。年龄1～天之间。母婴血型不合有96例；其中O-A型41例、O-B型49例、A -O型2例、B -O型3例、A-B型1例、；母婴血型相合的19例：其中O-O型11例、A-A型1例、B-B型5例、AB–A或B型2例；母血型不详子A型或B型或O型有11例。
　　1.2 试剂 DiaCidel洗涤液（用前以蒸馏水1：10稀释），DiaCidel放散液，DiaCidel缓冲液、低离子/抗人球卡、孵育器及离心机、由达亚美公司生产，珠海保瑞达公司提供；正反定型试剂：抗-A、抗-B、抗-O，ABO标准红细胞、多特异性抗人球蛋白、多克隆抗-D（IgG）等由上海血液生物医药有限责任公司生产及提供。
　　1.3 方法
　　1.3.1 微柱凝胶法
　　1.3.1.1采用微柱凝胶法，以 DiaCidel放散液放散（酸放散）的方法进行，用EDTA(乙二胺四乙酸)抗凝管抽3ml静脉血摇匀。离心1000×g60秒二次(久保田配血专用离心机)后，分离血浆，抽取1ml压积红细胞分二管先用生理盐水洗涤二次后再用DiaCidel洗涤液洗涤三次( 每次离心1000×g 60秒二次)，每次尽量抽尽上清液弃去，最后一次留少量清洁的上清液作对照；用吸管测量压积红细胞后加入等量的DiaCidel放散液，摇匀，离心(1000×g 60秒)，取出分离出上清，即为病人红细胞的放散液，加入DiaCidel缓冲液致蓝色（注意一定要变为蓝色，若为橙色则易出现假阳性），再离心1分钟后进行以下实验：取微柱凝胶卡分别标名直抗、游离、释放、上清、字样后，按表1操作:
　　表1：新生儿ABO溶血病三项微柱凝胶卡式检测法
　　 　　
　　注：上述实验先加红细胞悬液后加血浆、放散液、上清液，操作完毕放孵育器孵育15分钟后离心10分钟后看结果；直接Coomb，s试验不用放孵育器孵育直接离心10分钟后看结果。标准红细胞悬液血型与病人血型相同。
　　1.3.2 抗人球蛋白试管法。
　　1.3.2.1取三支试管分别标名直抗、游离、放散字样。
　　1.3.2.2直接Coomb，s试验： 取患儿少量红细胞先用生理盐水洗涤三次后配成2～3％红细胞悬液，取1滴红细胞悬液加入标有‘直抗’字样的试管，再加入1滴抗人球蛋白血清离心1000×g60秒后观察结果:肉眼看到有凝集的或显微镜下3-4个以上的红细胞凝集均匀分布在游离的红细胞之间为阳性。
　　1.3.2.3在标有‘释放’字样的试管内加入与病人血型相同的2～3％的标准红细胞悬液1滴后加入病人放散液2滴， 放入37℃水育箱孵育1小时后取出用生理盐水洗涤三次， 加入抗-IgG抗人球蛋白血清1滴离心1000×g60秒1分钟取出， 观察结果:有凝集的为阳性。
　　2 结果　　
　　见表2、表3
　　表2 MGT与TAT方法检测溶血三项结果比较
　　 　　 　　 表3 96例母婴血型不合溶血三项用MGT与TAT方法检测结果比较
　　
　　上述操作均严格按照说明书和输血技术规范操作进行
　　3 讨论
　　新生儿ABO溶血病用MGT比TAT方法阳性检出率高，从表2阳性率和卡方比较直接Coomb，s试验、游离抗体试验、抗体释放试验均有意义，其结果直观可靠。两者比较，在母婴ABO血型不合的96例中MGT法能确诊为ABO溶血病的有70例，确诊率为72.92％；TAT法能确诊为ABO溶血病的有56例，确诊率为58.33％。由上可看出MGT法比TAT法阳性检出率高，方法简单可靠。两种方法一致的有101例。直接Coomb，s试验：MGT法检出阳性而TAT法不能检出有11例；游离抗体试验：MGT法检出阳性而TAT法不能检出有7例；抗体释放试验：MGT法检出阳性而TAT法不能检出有14例；本文有2例TAT检出阳性而MGT法为阴性，可能与冷凝集有关，该凝集显微镜下凝集呈串珠状，两例患儿自身凝集阳性。在工作中我们发现试管法易受冷凝集因素的影响。游离抗体试验、抗体释放试验TAT检出阳性的MGT法均能检出。MGT法与TAT法结果与临床不相符有3例，其中母子血型为B-B型1例，两种方法抗体释放试验均为4+；母子血型为AB-B型1例、O-O型1例， 该两例患儿两种方法抗体释放试验均为1+。
　　新生儿ABO血溶血病是因母婴ABO血型不合，母亲产生的抗胎儿红细胞的免疫抗体IgG(抗A或抗B)通过胎盘进入胎儿体内，致敏胎儿红细胞在网状内皮系统被识别、清除，而导致溶血的。该病发生在胎儿和新生儿早期可导致高胆红素血症，严重者易并发胆红素脑病，致新生儿死亡或遗留智力发育障碍、听力损害等。因此一种好的、可靠的、快速检测新生儿ABO血溶血病的方法极为重要。而MGT法正具备此优点。值得临床应用和推广。
参 考 文 献
[1]高志峰，胡丽华，雒维.新生儿溶血病血清学检查2种方法的对比研究[J].临床血液学杂志，2008，21（8）：409-410.
[2]Labgston MM，Procter JL，Cipolone KM，et a1．Evaluation of the gel system for AOB grouping and D typing [J]．Transfusion，1999，39(3)：300—301．
[3]李勇，朱逢春，刘莹，等．微柱凝胶Coomb，s实验对人RhD血型检测的实验研究[J].中国输血杂志，1998，11(1)：24—25．