山楂水提物对心衰大鼠心功影响的分析

【摘要】 目的 研究山楂水提物对阿霉素诱导的心衰大鼠心功能改善作用，并通过对心肌NO的测定，探讨其作用机制。方法 腹腔注射阿霉素复制心衰大鼠模型。随机分为模型组、空白组、卡托普利组、山楂水提物高、中、低剂量组，给药4周后，测定大鼠左心室内压、最大上升（下降）速率；心肌NO含量。结果 山楂水提物可改善心衰导致的左心室收缩压、最大上升（下降）速率绝对值的降低（P&<0.01；P&<0.05）；并可以抑制模型大鼠心室舒张压的增高（P&<0.05）；降低心肌NO的含量(P&<0.01)。结论 山楂水提物可改善心衰症状，其机制可能与正性肌力作用和抗氧化等作用有关。
【关键词】 山楂水提物 心衰 NO 心室内压 心功
　　心力衰竭亦称为心功能不全，是指在有足量静脉回血情况下，由于心脏功能障碍，心脏的输出血量不能满足正常代谢需要的疾病。临床上常用强心、扩血管、利尿药及神经内分泌拮抗剂进行治疗。近年来，中医药对心衰的临床治疗研究取得了较大的进展，疗效显著，且副作用少。中药山楂来源于蔷薇科植物山里红的干燥成熟果实，具有活血化瘀的功效。近年临床亦用于心衰、冠心病等疾病的治疗。本实验就山楂水提物对阿霉素诱导的心衰SD大鼠心功的改善作用进行了实验研究，通过对心衰大鼠心肌NO含量、心室内压等指标的测定，探讨其治疗心衰的作用机理。
　　1 材料与方法
　　1.1 实验材料
　　1.1.1 实验动物 SD大鼠72只，雄性，体重180～200g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号SCXK(黑)2008004。实验环境：温度20-22℃，相对湿度：30-35%。
　　1.1.2 实验药物及试剂 山楂(北京同仁堂制药集团哈尔滨药店，经鉴定来源为蔷薇科植物山里红，Crataegus pinnatif ida Bge. Var. major N. E.Br.)将山楂药材1000g用十倍水煎煮二次，每次1h，合并滤液浓缩至1000mL，定容。每毫升供试药液相当于1g原药材，保存于4℃冰箱。临用前，按生药量计算，配制成0.25g/ml(低剂量组)、0.5g/ml(中剂量组)、1g/ml(高剂量组)三个浓度。阳性对照药：卡托普利（海南普利制药有限公司，批号5103-10-047A）加水研磨，配制成1mg/ml的混悬液，每次使用前摇匀。注射用盐酸阿霉素(深圳万乐药业有限公司，批号: 0905E1)用生理盐水配制成2mg/ml溶液。戊巴比妥钠(上海泰瑞尔生物技术有限公司批号:060928)。NO试剂盒(购自南京建成生物工程研究所)。
　　1.1.3 实验仪器 十六导生理记录仪MP150；HUMALY-ZER 2000型半自动生化分析仪；恒温水浴箱；高速低温离心机R21；匀浆器(均由黑龙江中医药大学实验中心提供)。
　　1.2 实验方法
　　1.2.1 模型制备 取SD大鼠60只，按阿霉素诱导心衰方法[1]复制模型。大鼠腹腔注射2mg/kg盐酸阿霉素，每周1次，共6周。
　　1.2.2 分组及给药 将造模大鼠随机分成模型组、阳性对照组、山楂水提物高、中、低剂量组，每组12只，未造模的12只大鼠为空白组。进行造模的第5周开始灌胃给药（在给予试药的同时，继续注射2周阿霉素），阳性对照组每天给予卡托普利水溶液20ml/kg、山楂水提物高、中、低剂量组分别按20ml/kg给予相应浓度试药，空白组和模型组同步给予等体积生理盐水，1次/d，给药4周，至第8周检测指标。
　　1.2.3 大鼠心室内压、最大上升（下降）速率测定 于末次给药1h后，将所有实验大鼠，按文献方法[2]用2%戊巴比妥钠生理盐水溶液注射麻醉。在操作台上固定，分离右侧颈总动脉，将PE50管沿颈动脉插入左心室。插管与压力传感系统、十六导生理记录仪相连接，根据心室内压波形确定PE50管的位置，稳定后测量收缩末期心室内压(LVESP)、舒张末期心室内压(LVEDP)、心室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)。
　　1.2.4 心肌NO值测定 将测完心功数据的大鼠处死，迅速取出心脏，取1/3心脏(包括左右心室肌各半)，先用磷酸缓冲液(PH7.2～7.4)冲洗3次，再加该缓冲液用匀浆器低温研磨，制成10%匀浆，将匀浆低温离心10min，取上清液，按照NO试剂盒说明书方法，测吸光度值。
　　1.2.5 统计学处理 计量资料用x-±s表示。用SPSS13.0统计软件进行统计学处理，组间比较用t检验。实验过程中有部分大鼠死亡，不纳入统计计算，n值见各表。
　　2 结果
　　2.1 心室内压测定　　
　　阿霉素诱导的心衰模型组与空白组比较，心室收缩压明显降低，差异有显著性意义（P&<0.01）；心室舒张压明显升高，差异有显著性意义（P&<0.05）。各给药组心室收缩压较模型组均有升高，其中，阳性组差异有显著性意义 (P&<0.01)，高剂量组、中剂量组与模型组比较，差异有显著性意义 (P&<0.05)；高剂量组与阳性组比较，差异无显著性意义 (P&>0.05)。各给药组心室舒张压较模型组均有降低，其中，阳性组、高剂量组、中剂量组与模型组比较，差异有显著性意义 (P&<0.05)；高、中、低剂量组与阳性组比较，无显著性差异(P&>0.05)。见表1。
　　表1 大鼠左心室内压组间比较（x-±S）
　　组别　　数量（n） 左心室收缩压 左心室舒张压
　　　　　　　　　　 LVSP(mmHg) VDP(mmHg)
　　高剂量组 9　　　　 74.1±11.1△▲　　9.1±4.6△▲
　　中剂量组 10　　　　 72.4±10.9△　　9.9±3.3△▲
　　低剂量组 8　　　　 68.3±10.7　　 10.8±3.6▲
　　阳性组　　 10　　　　 82.7±11.1△△　　 9.9±3.9△
　　模型组　　 10　　　　 61.4±12.9　　 13.8±3.9
　　空白组　　 11　　　　 94.1±8.3△△　　 7.4±2.1△
　　注：1）与模型组比较 △P&<0.05，△△P&<0.01；2)与阳对组比较▲P&>0.05。
　　2.2 心室内压最大上升和下降速率测定　　
　　模型组与空白组比较，心室内压最大上升和下降速率绝对值明显降低，差异有显著性意义（P&<0.01）。各给药组心室内压最大上升和下降速率绝对值均有回升。心室内压最大上升速率，阳性组与模型组比较差异有显著性意义 (P&<0.05)；山楂水提物各剂量组与模型组比较，回升的差异无显著性意义 (P&>0.05)，但与阳性组比较亦无显著性差异(P&>0.05)。心室内压最大下降速率绝对值，阳性组及山楂水提物各剂量组与模型组比较，差异均有显著性意义 (P&<0.05)；山楂水提物各剂量组与阳性组比较差异均无显著性意义 (P&>0.05)。见表2。 　　表2 大鼠左心室内压最大上升和下降速率（x-±S）
　　
　　注：1）与模型组比较 △P&<0.05 ，△△P&<0.01；2)与阳对组比较▲P&>0.05。
　　2.3 心肌NO含量测定　　
　　心肌细胞NO含量，模型组明显高于空白对照组，差异有显著性意义(P&<0.01)；阳性对照组和山楂水提物高、中、低浓度组明显低于模型组，差异有显著性意义(P&<0.01)；山楂水提物高、中剂量组与阳性对照组比较，差异无显著性意义(P&>0.05)。见表3。
　　表3 大鼠血清NO含量组间比较（x-±S）
　　组别　　 数量（n） NO含量（μmol/L）
　　高剂量组　　 9　　 75.7±9.8△△▲
　　中剂量组　　10　　 77.0±10.1△△▲
　　低剂量组　　 8　　 80.9±9.2△△
　　阳性组　　　　10　　 68.9±8.8△△
　　模型组　　　　10　　 95.5.6±10.7
　　空白组　　　　11　　 38.5±6.9△△
　　注：1）与模型组比较△△P&<0.01；2)与阳对组比较▲P&>0.05。
　　3 讨论
　　用阿霉素复制心衰大鼠模型是多因素多途径毒理作用的结果[3]。采用该模型研究山楂水提物对心脏的保护作用的实验结果表明，山楂水提物各剂量组均可显著减少心肌NO产生，可能通过抗氧化、抗自由基，抑制心肌脂质过氧化[4]，对阿霉素诱导的心肌损伤产生保护作用。另外，山楂水提物各剂量组均能增强模型大鼠心肌收缩力、提高心室内压最大上升和下降速率，从而改善心衰症状，其机理可能与β-肾上腺素受体和Ca2+通道有关[5]。与卡托普利比较，山楂水提物正性肌力作用较弱，提高心室内压最大上升速率效果不明显，但对舒张压的降低效果明显。临床报道其具有较好的强心疗效和安全性[6]。这可能是其抗心肌缺血、降血脂、扩血管、降血压等综合作用的结果 [7]。
参 考 文 献
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[4]叶希韵，张隆，张静，王耀发.山楂叶总黄酮对乳鼠心肌细胞缺血缺氧损伤的实验研究[J].中国现代应用药学，2005，22(3):202-204.
[5]Li Q ZH， Chen X J.A study on the action of Crataegus pinnatifida flavones on isolated frog myocardiumJinan[J].Daxue Xuebao(Ziran Kexue Yu Yixueban)， 1996，17(3):86-89.
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[7]江爱龙，刘荣华， 陈兰英等. 山楂药理与临床研究进展[J].武警医学院学报，2009，18(2): 154-158.