关于更年期妇女的HR-HPV DNA检测在宫颈癌筛查中的价值

【摘要】目的 评估更年期患者的HR-HPV DNA检测法在筛查宫颈癌中的应用价值。方法 2008年9月至2011年4月期间，对在我院就诊的726例更年期妇女行相关的宫颈癌前病变检查，用PCR荧光定量法检测HR-HPV DNA，诊断的金标准是病理学诊断报告结果。结果 受检者的平均年龄为48±2.6岁，病理诊断子宫肌瘤118例，CINⅠ46例， CINⅡ41例， CINⅢ38例，鳞癌8例，腺癌2例，湿疣19例，hPV感染102例，HPV DNA检测阳性102例(14.05%)，阳性率与年龄有一定的相关性，53岁之前呈正相关，53岁之后呈负相关。HPV阳性率与是否绝经相关性差。未生育组的HPV阳性率为47.36%，生育1-3个组的HPV阳性率为9.4%，生育大于3个组的HPV阳性率为20.95%。结论 子宫颈病变组的HPV检出率(29.78% )显著高于无子宫病变或炎症组(4.63% )，有差异，P&<0.05)。其中宫颈上皮内瘤变组随着病情的加重，检出率逐渐上升。HPV阳性率与是否生育及生育多少关系密切，HPV阳性率的排序为未育组&>多育组&>少育组。
【关键词】　更年期综合症 hR-HPV DNA 宫颈癌 宫颈上皮内瘤变
　　更年期综合征(climacteric syndrome)是指由于精神、心理、神经、内分泌以及新陈代谢等各方面的变化所引起的各器官系统的相应症状和体内综合症候群[1]。进入更年期的妇女由于激素水平不平衡导致内分泌失调，免疫力低下，容易患各种妇科疾病，特别是子宫肌瘤和宫颈癌。近年来宫颈癌严重危害着女性的生命与健康，死亡率与发病率呈上升趋势。目前大量的科学研究已证实宫颈癌是一种感染性疾病，是唯一一种经医学干预后能使发病率和死亡率均有所下降的人类恶性肿瘤[2]，早期诊断以及尽早治疗癌前病变（宫颈上皮内瘤变）是预防和控制宫颈癌的关键环节。所以，寻找合理且有效的检测方法能够从一定程度上降低宫颈癌的死亡率及发病率。研究表明高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）是宫颈癌及宫颈癌癌前病变的主要危险因素[3]，本文采用PCR荧光定量技术对更年期妇女进行HR-HPV DNA检测来筛查宫颈癌癌前病变。以研究更年期妇女HPV感染检测的临床意义。
　　1 资料与方法
　　1.1 更年期综合征妇女的筛选标准：（1）年龄在45～55岁的妇女，排除月经失调者，潮热汗出为典型症状，可伴有情绪异常，烦躁不安，易怒，头痛眩晕，心悸，睡眠质量差甚至失眠，记忆力下降，腰腿酸痛等。（2）内分泌水平测定：雌二醇（E2）降低，促卵泡激素（FSH）和促黄体生成激素（LH）均有不同程度的增高。（3）应排除精神系统、神经系统疾病以及甲亢、心血管疾病等。
　　1.2 研究对象 2008年9月至2011年4月期间，对在我院就诊的更年期综合征妇女进行筛选，入选条件是：无子宫切除史，无盆腔放疗史，无宫颈上皮内瘤变史，非月经期，非孕期，无急性的生殖道炎症。年龄在45～55岁，平均年龄48±2.6岁，孕次0～7次，平均孕次4次，产次0-6次，平均产次3.5次。
　　1.3 所有入选的患者都知情并且填写知情同意书，同意接受更年期妇女的HR-HPV DNA检测法筛查宫颈癌的流行病学调查。
　　1.3.1hR-HPV DNA的检测 用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，再用无菌棉拭子插入宫颈内，停5秒钟后旋动棉拭子采集宫颈分泌物，将棉拭子置入无菌玻璃管，密闭送检。向玻璃管中加入1ml灭菌生理盐水，充分震荡摇匀，挤干棉拭子。
　　吸取全部液体转至1.5ml离心管中，12000rpm/min离心5分钟。去上清，沉淀加灭菌生理盐水1ml，充分震荡混匀，12000rpm/min离心5分钟，沉淀加入50μl DNA提取液充分混匀，100℃保温10分钟，误差不超过1分钟。12000rpm离心5分钟，备用。采用PCR-Taqman荧光探针技术检测HPV16、18型特异性DNA核酸片段， 乳头瘤病毒核酸（16型、18型HPV DNA）定量试剂盒（中山大学这安基因有限公司。生产批号：20110316），DA-7600核酸扩增实时荧光检测仪，诊断阳性指标为标本出的HPV DNA≥1.0 pg/ml。
　　1.3.2 病理学检查 在阴道镜下对可疑病灶进行宫颈四象限活检及诊刮术，病理诊断：无子宫病变或炎症；子宫肌瘤；CIN Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期；鳞癌；腺癌。HPV感染，镜下观察可见湿疣外层的底细胞。
　　1.4　统计学分析　采用SPSS10.0软件进行统计学处理和分析。
　　2 结果
　　2.1 入选的726例更年期妇女中HPV DNA检测阳性102例(14.05%)，阳性率与年龄有一定的相关性，53岁之前呈正相关，53岁之后呈负相关，如表1。这可能与更年期妇女激素水平有一定的关系。
　　2.2 病理学检查结果，见表2。
　　病理诊断子宫肌瘤218例，CINⅠ46例， CINⅡ41例， CINⅢ38例，鳞癌8例，腺癌2例，湿疣19例，hPV感染102例。统计学检验分析结果，子宫颈病变组的HPV检出率(29.78% )显著高于无子宫病变或炎症组(4.63% )，有差异，P&<0.05。其中宫颈上皮内瘤变组随着病情的加重，检出率逐渐上升。排除子宫肌瘤外的其他宫颈疾病的HPV阳性检出率为（35.71）显著显著高于无子宫病变或炎症组(4.63% )，有统计学差异，P&<0.05。子宫肌瘤HPV的阳性检出率22.03%，说明子宫肌瘤与HPV有一定的相关性。
　　表1 不同年龄段与HPV阳性率的关系
　　
　　 2.3 绝经前后与HPV的相关性 更年期妇女绝经前的HPV阳性率为14，53%，绝经后的HPV阳性率为13.82，两 者相比较无统计学差异，说明HPV阳性率与绝经相关性较小。 　　 表3 绝经前后与HPV的相关性
　　分类　　 例数　　 HPV阳性例数　　 HPV阳性率（%）
　　绝经前　　 234　　 34　　　　　　 14.53
　　绝经后　　 492　　 68　　　　　　 13.82
　　2.4 生育与HPV的关系
　　未生育组的HPV阳性率为47.36%，生育1-3个组的HPV阳性率为9.4%，生育大于3个组的HPV阳性率为20.95%，如表4，少育组与未育组比较有统计学意义，P&<0.05少育组与多育组比较有统计学意义，P&<0.05，多育组与未育组比较有统计学意义，P&<0.05。HPV阳性率的排序为未育组&>多育组&>少育组。
　　表4 生育与HPV的关系
　　
　　3 讨论
　　近年来大量学者研究表明，HR-HPV感染已被流行病学和生物学证明是宫颈癌及癌前病变发病的主要危险因素[4-5]，所以检测HR-HPV DNA是针对疾病病因的检查，不仅能够检出已患宫颈癌或宫颈癌前病变的妇女并且能将有潜在发病风险的妇女检查出来，利于疾病的早期诊断与治疗。研究证实30岁以下的女性感染HPV大多是一过性的，具有一定自限性，自愈的可能性很大[6]。
　　HPV的阳性率与发病年龄有一定的关系，可能是由更年期综合导致的激素水平不平衡引起的。子宫肌瘤HPV的阳性检出率22.03%，说明子宫肌瘤存在一定的恶变几率，便于早期治疗，避免疾病的恶性发展。排除子宫肌瘤外的其他宫颈疾病的HPV阳性检出率为（35.71）显著显著高于无子宫病变或炎症组(4.63%)，有统计学差异，P&<0.05。其中宫颈上皮内瘤变组Ⅰ-Ⅲ的HPV阳性检出率呈上升趋势，说明其恶变的可能性逐渐增高。鳞癌的HPV阳性率为100%，腺癌只有2例，阳性率为0，可能与病例统计例数过少有关。不生育或生育过多都对子宫的危害较大，生育1-3个可以降低宫颈癌的发病率。
　　更年期妇女宫颈癌病变的发病率呈逐年上升趋势，可能与现代社会压力变大、环境恶化以及饮食中含有大量激素所造成。宫颈癌病变严重威胁着更年期妇女的健康与生命，所以早期筛查宫颈癌及癌前病变有助于提高更年期妇女的生活质量。HR-HPV DNA检测法可用于早期宫颈疾病的普查。
参 考 文 献
[1] 黎烈荣，谭异伦，范红霞，等.更年安怡片治疗更年期综合征的观察[J].中国中西医结合杂志， 1999， 19(4):235-236.
[2] Syrjanen S， Shabalova IP， PetrovichevN，et al.Human papilomavirus testing and conventional Pap smear cytology as optional screening toolswoman atdifferent risks for cervical cancer in countries of the　　FormerSo-vietUnion[J].LowgenitTractDis， 2002，6: 97.
[3] Walboomers JM， JacobsMV， ManosMM，etal•Human papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical cancerworldwide[J].Patho，l.1999， 189: 12.
[4] Syrjanen S， Shabalova IP， PetrovichevN. eta.lhuman papilomavirus tes-ting and conventional pap smear cytology as optional screening toolswoman atdifferent risks for cervical cancer in countries of the former so-vietunion.LowgenitTractDis， 2002， 6: 97-110.
[5] 乔友林.中国妇女人乳头瘤病毒感染和子宫颈癌的流行病学研究现状及其疫苗预防前景.中华流行病学杂志， 2007， 28(10): 937-940.
[6] Dalstein V，RiethmulletD， Pretet JL， eta.l Persistence and load ofhigh-riskhPV are predictors for development ofhighgrade cevrical lesionalongitudinalFrenchcohort study.Lant JCancer， 2003， 106: 396-403.