关于两种不同品牌无机磷（P）体外诊断试剂盒检测系统的比较

【摘要】目的 研究使用日立7020型全自动生化分析仪分析测定两个体外诊断试剂盒生产厂商的无机磷试剂盒并对测定值进行统计分析和比较。方法 通过医学数据统计方法，同时测定20份临床病理血清中的无机磷，对其数值进行数理统计，比较两个厂家的无机磷试剂盒的准确性。通过国际质控品筛选出影响该无机磷试剂盒检测系统准确性的环节。结果 如果标准品来源不变，使用不同试剂盒对同一份血清进行无机磷的测定，其结果是一致的。如果诊断试剂盒的来源不变，而用不同来源的标准品分别定标，并测定同一份血清的无机磷，其结果是不一致的。结论 影响无机磷检测结果的是由于标准品定值溯源的不同，而和试剂盒本身的差别无关。
【关键词】无机磷 体外诊断试剂 诊断试剂盒
【Abstract】Objective: Hitachi 7020 automatic biochemical analyzer determination of two in vitro diagnostic kit manufacturers and determination of inorganic phosphorus value kit for statistical analysis and comparison. Methods: The medical data of statistical methods， simultaneous determination of 20 clinical and pathological serum inorganic phosphorus and its value to mathematical statistics and compare the two manufacturers of inorganic phosphorus kit accuracy. Control samples were selected through the international impact of the inorganic phosphorus kit system accuracy of the link. Results: If the source of the same standard， the use of different kits on the same determination of serum inorganic phosphorus， and the results are consistent. If the source of the same diagnostic kit， but with different sources of calibration standards， respectively， and with a determination of serum inorganic phosphorus， and the results are inconsistent. Conclusion: The test results of inorganic phosphate is due to standards traceable to the different value， while the difference between itself and has nothing to do kit.
【Keywords】inorganic phosphorus in vitro diagnostic kits diagnostic reagent
　　 无机磷在体内多数以磷酸盐形式存在，主要为骨骼的无机成分，但是在细胞中也以磷脂和核酸形式存在，如腺苷三磷酸（ATP）还参与体内的能量转换[1]。血浆中的无机磷呈磷酸钙的形式，因此血浆无机磷的水平与钙水平息息相关。血清或尿液中无机磷的检测主要用于检出肾功能失调，骨骼和甲状旁腺疾病等。在肾损伤、甲状旁腺功能减退、假性甲状旁腺功能减退以及骨骼和细胞中磷酸钙减少时，无机磷浓度上升。因吸收不良、甲状腺功能亢进和维生素D缺乏时，无机磷浓度下降。
　　 体外诊断试剂的检测系统包括测定原理、试剂、仪器、校准品四个要素，其中任何一个不同，都可以认为不同的检测系统。不同的检测系统可以得到不同的结果。由于现在市场上不同企业生产的同一品种的试剂盒，其测定原理、试剂、仪器、校准品都不尽相同，所以使用其试剂盒测得的值都会不同，在实际使用过程中，哪个厂家的试剂盒其质量更可靠？本文便通过固定试剂盒的测定原理和仪器这两个要素，通过一定的实验设计来考察试剂盒和标准品给测定无机磷的准确性带来的影响。
　　 1 材料与方法
　　 1.1 仪器与试剂
　　 日立7020型全自动生化分析仪：
　　 速度：240个项目/小时；检测器：12个连续波长光栅；水浴：自动温控37.0℃±0.1℃；参数通道：58个；一次检测最大样品数：400个；一次检测最大项目数：40个。
试剂盒：
　　 ①上海申能-德赛诊断技术有限公司提供的无机磷液体试剂（批号：520/013/01）
　　 ②上海复星长征医学科学有限公司提供的磷试剂盒（批号：D040306）
标准品（定标品）：
　　 ①上海申能-德赛诊断技术有限公司提供的无机磷标准品（浓度：5.00mg/dl）批号：2432/23557
　　 ②上海复星长征医学科学有限公司提供的磷标准品（浓度：4.0mg/dl）批号：D040306
质控品：美国伯乐公司的血清诊断试剂质控品（批号：LEVEL 1-14091，LEVEL 2-14092）；
实验用水：二级国家标准水。
　　 1.2 试剂盒测定原理：
　　 无机磷的测定方法有磷钼酸盐法和酶法。目前大多数试剂盒采用磷钼酸盐法测定人血清（浆）中无机磷的含量。测定原理为：血清或其去蛋白上清液中磷酸盐的检测基于磷酸盐离子同钼酸铵反应，形成磷钼酸盐复合物。无色的磷钼酸盐复合物被各种还原剂还原为钼蓝，在580nm通过自动生化分析仪测定吸光度，即可计算出人血清（浆）中无机磷含量[2]。
　　 两个厂家的试剂盒均为单试剂；校正方式均为线性校正（即用对照品进行单点校正）；分析方法均为一点终点法；检测仪器均为日立7020型全自动生化分析仪；所以本实验将仪器和测定原理固定了，而试剂和标准品是不同的。
　　 1.3 参数设置：
　　 试剂盒的反应参数：
　　 分析方法：一点终点法（1Point）
　　 校正方式：线性
　　 反应方向：上升
　　 测定温度：37℃
　　
　　 日立7020型全自动生化分析仪上设定的仪器参数：
　　
　　 1.4 实验设计：
　　 将两个厂家的试剂盒和标准品分别交叉配组，共分为四个实验组，并通过配对t检验分析影响测定准确度的因素。
　　 ①以S提供的标准品校准仪器后，用S试剂盒和T试剂盒分别对20份血清进行测定（共计20对数据）。
　　 ②以T提供的标准品校准仪器后，用S试剂盒和T试剂盒分别对20份血清进行测定（共计20对数据）。
　　 ③分别以S提供的标准品和T提供的标准品校准仪器后，用S试剂盒对20份血清进行测定（共计20对数据）。
　　 ④分别以S提供的标准品和T提供的标准品校准仪器后，用T试剂盒对20份血清进行测定（共计20对数据）。
　　 用Excel中的统计软件分别对以上测得的四组血清无机磷数据进行统计学分析，并对每组的实验数据作出是否有显著性差异的统计推断，从而找出试剂盒和标准品，哪个是影响实验结果的因素[3]。
　　 样品准备：将临床上的20份血清依次编号，一式四份，每份为一组。
　　 2 结果和讨论
　　 2.1 第1组：标准品采用申能公司的无机磷标准品进行定标，试剂盒分别用复星试剂盒和申能试剂盒进行测定，结果见表1。
　　 表1：20份血清用两种试剂盒测得的值（采用申能公司标准品）(mg/dL)
　　
　　 上表中：Sd=0.032036，t=0.780368， t(0.05，19)= 2.093025，t&<t(0.05，19)，所以p&>0.05，两组实验数据无显著的统计学意义。
　　 2.2 第2组：标准品采用复星公司的无机磷标准品进行定标，试剂盒分别用复星试剂盒和申能试剂盒进行测定，结果见表2。
　　 表2：20份血清用两种试剂盒测得的值（采用复星公司标准品）(mg/dL)
　　
　　 上表中：Sd=0.015728，t=0.953716， t(0.05，19)= 2.093025，t&<t(0.05，19)，所以p&>0.05，两组实验数据无显著性差异。 转贴于 　　第1组和第2组的结果表明：如果标准品来源不变，使用不同试剂盒对同一份血清进行无机磷的测定，其结果是一致的。
　　 2.3 第3组：试剂盒采用申能公司的试剂盒，标准品分别用复星公司的标准品和申能公司的标准品进行定标，结果见表3。
　　 表3：20份血清用两种不同来源标准品定标测得的值(mg/dL)
　　
　　 上表中：Sd=0.066529，t=27.34915，t(0.01，19)= 2.860943，t&>t(0.01，19)，所以p&<0.01，两组实验数据有非常显著的统计学意义。
　　 2.4 第4组：试剂盒采用申能公司的试剂盒，标准品分别用复星公司的标准品和申能公司的标准品进行定标，结果见表4。
　　 表4：20份血清用两种不同来源标准品定标测得的值(mg/dL)
　　
　　 上表中：Sd=0.055958，t=32.33666，t(0.01，19)= 2.860943，t&>t(0.01，19)，所以p&<0.01，两组实验数据有非常显著的统计学意义。
　　 第3组和第4组的结果表明：如果诊断试剂盒的来源不变，而用不同来源的标准品分别定标，并测定同一份血清的无机磷，其结果是不一致的。
　　 2.5 讨论
　　 2.5.1通过以上实验可看出，用同一标准品定标后，用不同的试剂盒测定血清中的磷含量，其结果差别是很小的（在统计学上无显著性意义，其误差是由抽样误差带来的）。而用不同的标准品定标后，其检测结果相差很大（在统计学上有显著性差异）。所以影响无机磷检测结果的是由于标准品定值溯源的不同，而和试剂盒本身的差别无关。
　　 2.5.2 对不同来源标准品的实验分析
　　 以上实验仅仅得知标准品是影响实验结果的因素，但未得知哪个厂的标准品定标不准，故通过测定国际质控品来筛选出不合格的标准品。
　　 2.5.2.1 参数设置
　　 同1.3 参数设置。
　　 2.5.2.2 实验设计
　　 分组同上述实验，仅将临床血清改为美国伯乐公司提供的质控血清，分别测定两个浓度值。
　　 2.5.2.3 实验结果
　　 用申能公司的标准品定标，分别用不同试剂盒测定，结果如表5。
　　 表5 申能公司标准品定标测定的结果(mg/dL)
　　　　
　　 由于无机磷的成人正常血清参考值为3.0～5.0mg/dL ，所以由表5、表6可看出，先用复星公司标准品定标，再用两种试剂盒测定美国伯乐公司的质控品，其正常值和病理值均大大低于质控品的测定范围[4]，表明复星公司的标准品与美国伯乐公司的质控系统存在着系统误差。
参 考 文 献
[1]冯仁丰.实用医学检验学[M].上海：上海科技出版社，2000.
[2]韩志钧.全国临床化学常用项目自动化分析法[M]. 辽宁：辽宁科学技术出版社，1991.
[3]詹绍康. 实用医学统计方法[M].上海：上海科学技术文献出版社，1996.
[4]吴建民.实用医学检验参考值和异常结果[M].北京：人民卫生出版社，2002.转贴于