兔后肢急性缺血与伴行静脉血栓形成关系的实验分析

　　　　　　作者：刘国龙 杨牟 张居文 曹小丽 吴隆敬

【摘要】 　　目的 通过制作兔后肢急性缺血模型，观察股动脉结扎对股静脉血流速度及血液流变学指标的影响，以及是否有形成静脉血栓的倾向。方法 将20只成年健康大白兔随机分为对照组(A组)和实验组(B组)，每组 10只。B组结扎右后肢股动脉，制作肢体急性缺血模型，A组处理方法同B组，只是不结扎股动脉。测定术前及术后20 min、24 h、48 h及72 h股静脉血流速度；测定术前及术后24 h、48 h和72 h的全血黏度、血浆黏度和红细胞聚集指数。结果 A组术前与术后股静脉血流速度比较差异无显著性（P&>0.05），B组术后20 min、24 h、48 h及72 h股静脉血流速度较术前明显降低（F=209，q=31.55～32.82，P&<0.01）；B组术后24 h、48 h及72 h血黏度较术前增高，而A组无差别。B组有4只动物伴行静脉内有血栓形成，A组动物无静脉血栓形成。结论 结扎兔股动脉后，股静脉血流速度明显减慢，血黏度增高，预示有形成静脉血栓的倾向。
【关键词】 四肢 缺血 血流速度 血黏度 血栓形成 兔
　　［ABSTRACT］ Objective To study the changes of femoral vein blood flow velocity and hemorheology by establishing an experimental rabbit model of acute hind limb ischemia， and observe if there is a thrombotic tendency. Methods Twenty healthy rabbits were evenly pided into two groups: normal control group (A) and experimental group (B). An ischemia model was made by ligating the right femoral artery in rabbits of group B， while the rabbits in group A were treated with the same as group B， apart from ligature of the artery. The flow velocity of femoral vein prior to operation and 20 minutes， 24， 48 and 72 hours after operation was measured; the blood viscosity， plasma viscosity and aggregation index of RBC before operation and 24，48， and 72 hours after operation were measured. Results The blood flow velocity in group A did not show any difference before and after operation(P&>0.05)， while that in group B was much slower after operation (P&<0.01).The blood viscosity， plasma viscosity and aggregation index of RBC at 24， 48 and 72 hours after operation were higher than that before operation in group B，but no differences showed in group A. Four rabbits had thrombus formation in group B， none in group A. Conclusion Blood flow velocity of the femoral vein decreases obviously and blood viscocity increases after ligation of the femeral artery， suggestive of the tendency of thrombosis.
　　
　　［KEY WORDS］ Extrimities; Ischemia; Blood flow velocity; Thrombosis; Rabbits
　　
　　急性动脉栓塞是指源于心脏或动脉脱落的血栓或斑块等随血流向远端流动，造成动脉管腔阻塞，导致组织器官缺血的急性病变。可发生于任何年龄组，但发病高峰多在50～70岁，尤其好发于患有心血管疾病的人群，以股动脉栓塞多见。本病发病突然、症状明显、进展迅速，如不及时处理，常很快导致肢体坏疽甚至危及生命。目前多采用Forgaty导管取栓，大多数病人恢复良好，有个别病人在取栓成功后猝死。由于地方医疗条件及个人因素所限，并不是所有的病人都能得到及时救治，有些病人就诊时肢体缺血已十分严重甚至发生坏疽，为挽救生命多采取截肢术。在多例截肢手术中，我们发现伴行静脉血管中有血栓形成。因此，我们考虑猝死是否因为取栓成功后肢体血供恢复，长时间缺血形成的静脉血栓在血流冲击下脱落导致肺栓塞引起？而静脉血栓形成与肢体缺血是否有直接的关系尚未见文献报道，本文旨在探讨二者的关系。
　　1 材料与方法
　　1.1 实验动物
　　
　　选择成年健康大白兔20只(由山东省烟台市莱山动物养殖中心提供)，雌雄不拘，体质量为2.5～3.5 kg，平均3.1 kg，无感染、肢体出血坏死等情况。随机分为对照组 (A组)和实验组（B组），每组10只。两组动物的性别、体质量差异无显著性。
　　1.2 动物模型制作
　　
　　B组兔耳缘静脉缓慢注射5 g/L的戊巴比妥钠25 mg/kg，麻醉后仰卧固定于兔台上，右后肢股三角肌处剪毛，于腹股沟处沿血管走行切开皮肤、皮下组织，钝性分离肌组织，游离股动脉、股静脉和股神经，在股动脉分叉前结扎股动脉，结扎后远端动脉搏动消失，制作肢体急性缺血模型成功，缝合皮肤[1]。A组处理方法同B组，但不结扎股动脉。术后每只兔给予庆大霉素10万单位肌注，术后家兔无死亡。
　　1.3 血流速度测定
　　
　　采用美国GE公司生产LOGIQ 7彩色多普勒超声诊断仪，实时凸阵探头，频率3.5 MHz，可自动计算流速。兔固定于兔台上，后肢取伸直位，由专人在术前及术后20 min、24 h、48 h、72 h测定股静脉的血流速度，测定3次，取平均值。
　　1.4 血液流变学指标的测定
　　
　　使用中勤世帝公司生产的R 80Ａ全自动血黏度仪。术前及术后24 h、48 h、72 h于右颈外静脉采血6 mL，置于血液流变学专用试管（肝素抗凝）中，轻轻摇匀，放置20 min后测定200 s-1、30 s-1、5 s-1、1 s-1切变率下全血黏度值，以及200 s-1切变率下血浆黏度值、红细胞聚集指数。
　　1.5 统计学分析　　血流速度及血液流变学指标数据采用±s表示，用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析，各组在不同时间段比较应用随机区组设计的方差分析，静脉血栓形成的比较采用四格表精确检验法。
　　2 结果
　　2.1 股静脉血流速度的比较
　　
　　B组术后20 min、24 h、48 h及72 h的血流速度与术前相比明显降低，差异有显著性（F=209，q=31.55～32.82，P&<0.01）；A组手术后血流速度无明显改变。见表1。
　　表1 两组股静脉血流速度的变化（略）
　　与术前比较，F=209，*q=31.55～32.82，P&<0.01
　　2.2 血液流变学指标的比较
　　
　　A组切变率为200 s-1、30 s-1、5 s-1、1 s-1的全血黏度无明显改变，血浆黏度及红细胞聚集指数也无差别；B组在切变率为200 s-1、30 s-1、5 s-1、1 s-1的全血黏度，血浆黏度及红细胞聚集指数明显升高，差异有显著性（F=3.44～5.64，q=2.98～5.54，P&<0.05）。见表2。
　　表2 两组血液流变学指标的变化（略）
　　与术前比较，F=3.44～5.64，*q=2.98～5.54，P&<0.05

　　2.3 静脉血栓形成情况比较
　　
　　实验终点观察到对照组无静脉血栓形成，而实验组共有4只兔静脉血栓形成，两组比较差异有统计学意义（P=0.043）。
　　3 讨论
　　
　　深静脉血栓形成（DVT）是指血液在深静脉腔内不正常地凝结，阻塞静脉管腔，导致静脉回流障碍，造成不同程度的慢性深静脉功能不全，全身主干静脉均可发病[2]。1946年，VIRCHOW提出，静脉损伤、血流缓慢和血液高凝状态是造成深静脉血栓形成的三大要素。病人若具备三要素中的一项或一项以上被称为静脉血栓形成的高危人群。
　　
　　本实验中兔后肢急性缺血模型，模拟了人股动脉栓塞。实验结果显示，结扎兔股动脉后股静脉血流速度明显减慢，全血黏度、血浆黏度及红细胞聚集指数增高，说明在肢体缺血的情况下，有静脉血栓形成的倾向。实验组所有动物股动脉结扎远端都有血栓形成，有4只兔静脉内有血栓形成。
　　
　　分析实验中血栓形成原因可能为：①结扎股动脉后静脉血流缓慢，在瓣膜内形成涡流，使瓣膜局部低氧，引起白细胞黏附分子表达，白细胞黏附及迁移，在移向内皮细胞和基底膜的过程中，能造成内膜损伤激活凝血过程而可能并发血栓形成[3]。血流缓慢时血小板黏附、聚集在血管内膜上，活化的血小板释放血栓素A2(TXA2)、5羟色胺、凝血因子等物质，最终形成血栓。②实验组术后全血黏度、血浆黏度及红细胞聚集指数增高。血液组成成分改变、全血黏度增高及红细胞弹性减低，均可使血液处于高凝状态，是静脉血栓形成的重要因素[4]。红细胞聚集指数是粗略反映红细胞聚集程度的指标，此值越大表示红细胞越易聚集[5]。张国英[6]观察到深静脉血栓病人全血黏度、血浆黏度、红细胞沉降率、全血低切还原黏度、红细胞沉降率方程值、红细胞聚集指数及全血低切相对黏度较正常人明显升高。③刘丽梅等[7]在兔急性肢体缺血模型中发现，在肢体缺血时血液中白细胞、中性粒细胞计数及百分比明显高于对照组，认为在肢体缺血期间，全身炎性反应存在，炎性细胞释放细胞因子。细胞因子如IL1、IL10参与血栓形成过程，IL1可明显改变血管内皮的抗凝功能，IL1α还能使鼠血管紧张素受体(AT1)结合力上升1.4～1.7倍，AT1 mRNA表达增强23倍，而血管收缩将触发凝血系统，促进血栓形成[8]。
　　
　　根据实验结果我们建议临床医生接诊动脉栓塞病人后，尤其是在没有条件开展取栓手术的基层医院，应及早给予抗凝治疗，以预防肢体缺血后继发动脉血栓形成及伴行静脉内血栓形成，利于以后的恢复，而对于就诊较晚的病人在手术取栓之前应当明确静脉内是否存在血栓，以便采取预防措施，如放置下腔静脉滤器以避免术中及术后发生肺栓塞[9]。
【参考文献】
　　[1]何超荣，李艳斌. 结扎法肢体永久缺血模型的建立[J]. 郧阳医学院学报， 2003，22(6)：362363.

　　[2]王振义，李家增，原长秋，等. 血栓与止血的理论与基础[M]. 第2版.上海：上海科学与技术出版社，2005:473494.

　　[3]王凤莲，李玉幸，王湃. 下肢深静脉血栓形成的病因探讨[J]. 宁夏医学杂志， 1999，21(4):213.

　　[4]杨景文，张培华. 全血黏度、红细胞粘弹性和触变性在下肢深静脉血栓形成发病机理[J]. 医用生物力学， 1995，10(4):201204.

　　[5]袁进，顾为望. 血液流变学在临床疾病诊断、治疗中的应用[J]. 中国比较医学杂志， 2007，17(7):406409.

　　[6]张国英. 下肢深静脉血栓病人血液流变学指标的变化[J]. 江苏大学学报， 2006，16(1):5960.

　　[7]刘丽梅，陈丽，马平，等. 兔肢体缺血再灌注继发全身炎性反应的研究[J]. 中国药物与临床， 2003，3(6):483486.

　　[8]段鹏飞，李晓强. 深静脉血栓形成的分子生物学机制[J]. 蚌埠医学院学报， 2004，29(1):9091.

　　[9]李子祥，王豪夫，孙成建，等. 下腔静脉滤器在下肢深静脉血栓治疗中的临床应用[J]. 青岛大学医学院学报， 2006，42(4)：300303.