薄层扫描法测定三子降糖颗粒中齐墩果酸含量

　　　　　　 作者：徐世芳 马月光 姜丽霞

【摘要】 建立薄层扫描法测定三子降糖颗粒中齐墩果酸含量的方法。［方法］以硅胶G为薄层吸附剂，环己烷－丙酮－乙酸乙酯（4∶2∶1）为展开剂，10%硫酸乙醇为显色剂，在λs=530nm， λR=680nm波长处扫描，比较不同溶剂不同时间的提取效率。［结果］齐墩果酸在1.13μg ～ 9.04μg（n=5）范围内线性关系良好（r=0.9991）；仪器精密度、同板精密度、异板精密度的RSD分别为1.6%、2.6%、5.8%；重复性RSD为3.1%；平均回收率为99.1%，RSD为3.4%。3批样品齐墩果酸的含量为每袋125.1mg～135.8mg。［结论］方法专属性强、可靠，可用于该品的质量控制。

【关键词】 齐墩果酸;含量测定;薄层扫描法

　　　　三子降糖颗粒由三味中药经本院药物所结合现代科学技术研制而成的复方制剂，齐墩果酸是其主要有效成分。有关齐墩果酸含量测定方法有薄层扫描法［1］、高效液相色谱法［2］、紫外光谱法［3］、气相色谱法［4］等。本文用氯仿提取，采用薄层扫描法测定三子降糖颗粒中齐墩果酸的含量。

　　1 仪器与试药

　　CS930薄层扫描仪（日本岛津），PBQ1型薄层自动铺板器（重庆海洋化工厂），齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所）；三子降糖颗粒：由本所制剂室提供（试制品）；其它试剂均为分析纯。

　　2 实验方法

　　2.1 薄层条件及扫描条件

　　薄层条件：薄层板为含0.5% 羧甲基纤维素钠的硅胶G板，以环己烷－丙酮－乙酸乙酯（4∶2∶1）为展开剂，饱和30h，展开、取出、晾干、喷以10%硫酸乙醇溶液，置90℃烘约10min至呈紫红色斑点，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定。扫描条件：双波长反射法锯齿扫描，λs =530nm， λR =680nm，SX＝3。

　　2.2 溶液的制备

　　2.2.1 对照品溶液的制备

　　取齐墩果酸对照品适量，加氯仿－无水乙醇（1∶1）溶解，制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

　　2.2.2 供试品溶液的制备

　　取本品约1.0g，精密称定，置索氏提取器中，用氯仿适量加热回流提取6h，提取液回收氯仿至干，残留物用氯仿－无水乙醇（1∶1）定容于25ml量瓶中，作为供试品溶液。

　　2.2.3 阴性对照溶液

　　按处方除去女贞子，然后照供试品溶液方法制备。

　　2.3 提取条件的选择

　　对乙醚和氯仿两种不同溶剂的索氏提取，及氯仿不同时间提取作了比较(同批样品)，结果见表1。表1 提取效率比较（略）。

　　从表可见，用乙醚或氯仿作溶剂，含量无明显差异，考虑到乙醚沸点低，易挥发，而且提取物中脂肪较多，因此选用氯仿作溶剂。氯仿不同回流时间提取，其含量基本一致，故选择6h。

　　2.4 线性关系及范围

　　精密吸取对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0uL，点于同一块薄层板上，依法展开，显色，扫描得峰面积积分值。以齐墩果酸峰面积对点样量（μg）作一回归处理，得回归方程及相关系数：Y =1150.0X 4.5 r=0.9991。结果表明齐墩果酸在1.13～9.04μg范围内呈良好线性关系。

　　2.5 阴性对照试验

　　依法点样，展开，显色，扫描。结果表明，薄层板显色后在齐墩果酸位置不出现斑点，扫描值为0，说明阴性对照样品中齐墩果酸的测
定无干扰。

　　2.6 稳定性试验

　　精密吸取供试品溶液点于薄层板上，依法展开，显色，于5h内，扫描测定10次，斑点峰面积RSD为1.6%，齐墩果酸斑点吸收度积分值在5h内稳定。

　　2.7 精密度试验

　　（1）仪器精密度：同一块薄层板上，对同一浓度对照品斑点连续多次扫描，峰面积RSD为1.6%(n=8)；（2）同板精密度：同一块薄层板上，对同一浓度对照品相同点样量的斑点进行扫描测定，峰面积RSD为2.6%(n=6)；（3）异板精密度： 对异板同一浓度对照品相同点样量的斑点进行扫描测定，峰面积RSD为5.8%(n=3)。

　　2.8 重复性试验

　　取同批样品称取6份，分别依法处理并测定，齐墩果酸含量的均值为132.6mg/袋，RSD为3.1%，示方法重复性良好。

　　2.9 加样回收率试验

　　精密称取已知含量的本品约0.5g，共6份，准确加入齐墩果酸对照品适量，按供试品溶液的制备方法操作，依法测定，结果平均回收率为99.1%，RSD为3.4%。

　　3 实验结果

　　精密吸取供试品溶液3μl，对照品溶液1μl和3μl，分别交叉点于同一薄层板上，按所拟定的方法测定了3批样品的含量，结果见表2。表2 样品测定结果 (略)

　　4 讨论

　　展开剂的选择是薄层色谱的重要环节。曾选用展开剂氯仿－甲醇（9.5∶0.5），分离效果尚可，但边缘效应比较严重。本文选用的展开剂所得的色谱图经显色后斑点清晰，重现性好。样品经索氏提取后，将提取物浓缩至干，曾用氯仿、乙醇、甲醇作溶剂，溶解残留物并定容，发现均有少量絮状物或油脂状物浮在上面，后采用氯仿－无水乙醇（1∶1），获得满意的结果。

参考文献

1］中华人民共和国药典委员会.中国药典［S］.2005年版，一部.化学工业出版社，2005.

　　［2］王贤英，杨琼芳.高效液相色谱法测定天麻丸中齐墩果酸的含量［J］.中国药业，2004，13（2）：4647.

　　［3］邓世星，孙志勇，周卿，等.紫外光谱法测定齐墩果酸含量.遵义医学院学报，2003，26（6）：556557.

　　［4］周静，刘垣升.气相色谱法测定女贞子中齐墩果酸和熊果酸的含量［J］.中国新药与临床杂志，2003，22（10）：596598.