作者：刘霞 黄岩杰 吴文先 陈团营
【摘要】 探讨肾综颗粒对阿霉素肾病大鼠肾组织形态及功能的影响。［方法］利用尾静脉注射阿霉素（ADR）建立大鼠肾病模型，灌服肾综颗粒，检测尿蛋白定量、血清与肾组织匀浆中的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量及观察肾脏病理形态学改变。［结果］肾综颗粒能有效降低尿蛋白，降低血清及肾组织MDA水平，提高SOD活力，改善病理损伤。［结论］肾综颗粒可以减少尿蛋白，对抗自由基引起的脂质过氧化损伤，明显改善阿霉素肾病大鼠肾脏病理形态和功能。
【关键词】 肾综颗粒；阿霉素肾病；病理性态
Effect of Shenzong Granule on Shape and Function of Rats with Adriacin NephropathyLiu Xia，Huang Yanjie，WuWenxian，et al First Hospital Affiliated to He’nan College of TCM，Zhengzhou（450005）ey words：Shenzong Granule；adriacin nephropathy；pathological form；function 肾综颗粒是我们多年来治疗小儿肾病综合征的有效良方，临床上取得了满意的效果。本实验旨在观察肾综颗粒对阿霉素肾病大鼠脂质过氧化损伤、病理形态学等方面的影响，探讨其对肾病综合征的治疗作用。
1 实验材料
1.1 实验动物及分组
雄性SD大鼠，体重（150±10）g，30只，由河南省实验动物中心提供（合格证号：医动字第410101号）。适应性喂养1周，无异常发现，30只大鼠随机分为3组：对照组、模型组、治疗组，每组10只。
1.2 实验药物及试剂
肾综颗粒主要成份为黄芪、茯苓、生地、泽泻、丹参、水蛭等，由河南中医学院一附院制剂中心提供，临用时用双蒸水制成混悬液，使1ml含生药2.5g；阿霉素由意大利法玛西普强公司生产，规格10mg/瓶。SOD及MDA测试盒由南京建成生物工程研究所生产。
2 实验方法
2.1 动物造模及给药方法
采用阿霉素诱导的肾病综合征模型。实验第二周，模型组和治疗组大鼠按6.5mg/kg阿霉素经尾静脉注射一次复制肾病综合征模型。每天用试纸法检测尿蛋白情况，若尿蛋白出现，并且呈进行性加重，尿蛋白定性≥3+，证明造模成功。造模一周后各组均灌胃给药，对照组、模型组按10ml/（kg·d）蒸馏水灌胃；治疗组按肾综颗粒25g生药/（kg·d）灌胃（溶入蒸馏水，1ml含生药2.5g），疗程均为6周。
2.2 检测指标及方法
（1）观察大鼠的精神状况、体重体毛、饲料量、饮水量、二便情况等。（2）尿蛋白检测：分别于造模前，造模后第2、4、7周各测定24h尿蛋白定量1次，采用磺柳酸法。（3）血清与肾组织匀浆中SOD、MDA于实验结束时摘眼球取血，2ml/只，观察血清SOD及MDA改变；处死大鼠后即剖腹取肾脏，剪下肾皮质1小块，用冰冷生理盐水洗净残血，滤纸吸干，称重，用生理盐水按1∶9（w∶v）在冰浴下制成约10%的组织匀浆（电动匀浆器），在最大功率300W的条件下，间断匀浆10min，将匀浆液置低温冷冻离心机中，以20000rpm离心10min，取上清液，置离心管中，低温保存，用于测定肾组织中的SOD及MDA。SOD活性测定采用黄嘌呤氧化酶法，MDA测定采用硫巴比妥酸法，均严格按照试剂盒说明书进行。（4）肾脏病理学检查常规石蜡切片，进行HE和PAS染色，光学显微镜下观察各组大鼠肾小球及肾间质的变化情况；常规电镜标本制作，用日立Ho7500型透射电镜观察肾脏病理变化。
2.3 统计学处理
所有的统计检验均采用双侧检验。数值变量采用均数（x）±标准差（s），组间比较采用单因素方差分析。
3 实验结果
3.1 实验大鼠的一般情况
造模3d后，模型组和治疗组大鼠出现不同程度的腹泻、精神不佳、饲料量和饮水量减少、阴囊水肿、毛发蓬松、生长迟缓、消瘦等表现，尤以模型组最为显著。在实验过程中模型组有3只大鼠死亡，治疗组有2只死亡。死亡大鼠均有严重腹泻，消瘦明显，其中有2只出现鼻部血性分泌物。
3.2 对大鼠尿蛋白定量的影响
通过以上实验结果可以看出，治疗组与模型组比较，具有显著性差异（P＜0.05），说明肾综颗粒具有减少尿蛋白的作用。
表1 各组大鼠24h尿蛋白定量的比较（略）
与模型组比较，★P＜0.05
3.3 对大鼠血清及肾组织匀浆SOD、MDA的影响
表2结果表明：治疗组能降低血清及肾组织MDA水平，提高SOD活力，与模型组比较有显著性差异（P＜0.05）。表2 各组大鼠血清及肾组织匀浆SOD、MDA水平的比较（略）与模型组比较，★P＜0.05
3.4 对大鼠病理形态学方面的影响
光镜下可见对照组肾小球系膜基质无增生，肾小管管腔正常，肾间质小血管无改变；模型组肾小球系膜基质增生明显，肾小管蛋白管型，肾间质血管瘀血严重；治疗组系膜轻度增生，肾小管蛋白管型较轻，病变程度较模型组明显减轻。对照组电镜观察肾小球基底膜光滑均匀，未见增厚，足突清晰完整、未见融合，血管腔开放好；模型组肾小球基底膜偶见增厚，足突融合严重，与对照组比较有明显差异；治疗组肾小球基膜平滑，未见增厚，足突融合程度与模型组比较减轻。
4 讨论
本实验模型组血清及肾组织MDA均明显升高，而SOD活力明显下降，说明在肾病综合征大鼠模型中确实存在过量的活性氧自由基及脂质过氧化代谢产物，并且机体抗氧化能力降低。与模型组比较，治疗组能降低血清及肾组织中MDA水平，提高SOD活力，所以我们不难发现肾综颗粒能够提高自由基清除酶的活性，增强机体的抗氧化能力，减轻脂质过氧化引起的损伤。病理形态学观察治疗组大鼠上皮细胞足突融合程度较模型组明显减轻，表明肾综颗粒能够减少上皮细胞足突融合、抑制系膜基质的增生，改善肾脏的病理损害。由此我们推测，肾综颗粒能够有效清除阿霉素肾病大鼠体内的过量的活性氧自由基，降低脂质过氧化代谢产物MDA在体内过度蓄积，提高内源性抗氧化酶的活力，降低肾脏免疫损伤，明显改善肾小球的病理形态学改变，达到延缓肾病慢性进展的目的，这是其发挥治疗作用的部分可能机制。