关于内源性阿片样物质对味觉厌恶学习建立和保持的影响

作者：史玉兰 张金平 白文忠 潘培森 金凤霞

【摘要】 目的： 探讨内源性阿片样物质对于味觉厌恶学习(CTA)建立和保持的影响. 方法： 将成年雄性SD大鼠分为正常CTA建立组、CTA建立前阿片受体拮抗剂纳洛酮腹腔注射组以及CTA建立后纳洛酮腹腔注射组，以纳络酮为工具进行行为学研究. 结果： 在动物获得对糖精溶液的CTA后，再次给以糖精溶液，各组大鼠的糖精溶液摄取量均呈逐日增多趋势.在给以糖精溶液前注射纳洛酮的大鼠，CTA消退较慢，而腹腔注射LiCl后20 min给以纳洛酮，对CTA的记忆保持无明显影响. 结论： 内源性阿片样物质可能参与了CTA形成过程的调制作用.
【关键词】 味觉厌恶学习；纳洛酮；大鼠；脑

　　 0引言
　　动物摄取某种具有新异味觉的食物后，如果导致恶心、呕吐、腹泻等内脏不适感觉，动物便可“记住”这种食物的特殊味觉特征，减少或拒绝摄取相同味觉特征的食物，这种行为变化过程称为味觉厌恶学习（conditioned taste aversion， CTA）［1］.CTA是以味觉学习和记忆为基础的适应性行为，是避免重复摄取有毒食物的重要学习机制.内源性阿片样物质可参与情绪反应调节，并对学习记忆具有调制作用. 本研究我们通过腹腔注射阿片受体拮抗剂纳洛酮，观察了内源性阿片样物质对于CTA建立和保持的影响.
　　1材料和方法
　　1.1材料纳洛酮购自Sigma公司.健康成年雄性SD大鼠18只，体质量250～280 g.由河北医科大学河北省实验动物中心提供，分为3个处理组：正常CTA建立组（对照组）、CTA建立前纳洛酮腹腔注射组和CTA建立后纳洛酮腹腔注射组.
　　1.2方法
　　1.2.1CTA动物模型的建立用5 mL无菌注射器经口腔插管注入1 g/L糖精溶液，每只大鼠1.5～2 mL，5 min内注完.20 min后，腹腔注射等渗LiCl溶液（0.15 mol/L，20 μL/g），使大鼠建立对于糖精溶液的CTA［1］.CTA建立的标准： 在腹腔注射LiCl溶液后第2日，以大鼠在20 min内对1 g/L糖精溶液的摄取量小于1 g作为CTA建立的标准（一般经一次加强处理后即可达到此标准）.
　　1.2.2各组动物的处理正常CTA建立组：在本实验室饲养2 d后，自16:00起禁水18 h，次日10:00起用自制饮水器给蒸馏水20 min，同日15:40～16:00给水20 min后再次禁水18 h，直至饮水量基本稳定，一般需3～5 d.按1.2.1方法建立CTA模型.建模当天15:40～16:00给水20 min后再次禁水18 h. 次日10:00和15:40分别让大鼠自由摄取蒸馏水20 min，16:00以后再次禁水. 第3日再重复一次CTA建立过程，强化学习.CTA建立前纳洛酮腹腔注射组：在大鼠饮水量基本稳定后，9:20腹腔注射0.2 ml/L纳洛酮溶液（生理盐水配制，2 mg/kg）.40 min（即禁水达18 h）后［2］，建立CTA，同日15:40～16:00给水20 min后再次禁水18 h. 次日10:00和15:40分别让大鼠自由摄取蒸馏水20 min，16:00以后再次禁水. 第3日再重复一次CTA建立前纳洛酮腹腔注射及CTA建立过程，强化学习.CTA建立后纳洛酮腹腔注射组：大鼠CTA建立后，即腹腔注射0.15 mol/L LiCl溶液（20 μL/g）后20 min，腹腔注射0.2 mL/L纳洛酮溶液［2］（生理盐水配制，2 mg/kg）.同日15:40～16:00给水20 min后再次禁水18 h.次日10:00和15:40分别让大鼠自由摄取蒸馏水20 min，16:00以后再次禁水.第3日再重复一次CTA建立及CTA建立后纳洛酮腹腔注射过程，进行强化学习.
　　1.3各组处理后糖精溶液摄取量的测定强化学习当日16:00开始禁水18 h，次日10:00起用自制饮水器给1 g/L糖精溶液20 min后让大鼠自由摄取蒸馏水20 min，称量并记录大鼠摄取糖精溶液的质量，同日15:40～16:00给水20 min后再次禁水18 h，重复进行，连续8 d，称量并记录各组大鼠每日摄取糖精溶液的质量（精确至1/1000 g）.
　　统计学处理： 采用SPSS软件进行统计分析. 组内和组间比较作单因素方差分析，以及两两比较的q检验(NewmanKeuls法 ). P&<0.05为差异有统计学意义.
　　2结果
　　2.1动物行为观察初次接触糖精溶液，大鼠只是“试探性”舔几下.但几分钟后，便开始主动摄取，前肢抱住饮水器尖端，吻部周期性开闭，舌周期性伸缩，伴随吞咽和间断性舔爪行为，均为喜好性行为表现.CTA建立后，再次接触糖精溶液，大鼠表现出强烈的厌恶反应.“试探性”舔两下后，便不再摄取，吻部不断开闭，并伴随咂舌、颊部运动和摇头，后肢着地，前肢上下拍动.个别大鼠甚至有啃咬饮水器尖端等强烈的厌恶性行为表现.
　　2.2各组大鼠糖精溶液摄取量的变化各组大鼠组内单因素方差分析结果显示P&>0.05，可以消除大鼠个体间差异因素对于实验结果的影响.实验结果表明，经一次加强处理，CTA建立后第1 日禁水18 h后各组大鼠在20 min内对1 g/L糖精溶液的摄取量均小于1 g，达到本实验设立的CTA建立成功的标准.
　　正常CTA建立组大鼠和CTA建立前纳洛酮腹腔注射组大鼠在实验的8 d中，在20 min内摄取糖精溶液的量呈上升趋势.CTA建立后纳洛酮腹腔注射组大鼠在实验的前6 d，糖精溶液的摄取量逐渐增加，但第6日以后摄取量基本稳定，呈平缓上升趋势（表1）.
　　CTA建立后第1～6 日，CTA建立后纳洛酮腹腔注射组大鼠摄取糖精溶液的量与正常CTA建立组相比无统计学差异（P&>0.05），但第7 日和第8 日糖精溶液的摄取量趋于稳定，明显少于CTA建立组大鼠（分别P&<0.05，P&<0.01，表1）.
　　CTA建立前纳洛酮腹腔注射组在CTA建立后第1 日摄取糖精溶液的量便少于正常CTA建立组（P&<0.05），并且自第2日起糖精溶液摄取量显著少于正常CTA建立组 （P&<0.01，表1）. 表1各组大鼠每日摄取糖精溶液的质量
　　3讨论
　　3.1CTA对动物行为的影响我们研究发现，在CTA形成前，大鼠对糖精溶液表现出喜好摄取反应.而CTA建立后，再次接触糖精溶液，大鼠的反应类似于摄取其厌恶的苦味物质，如奎宁，以后的行为反应［3］. 提示在CTA形成过程中，大鼠以糖精溶液的味觉为线索，将其与腹腔注射LiCl溶液后引起的腹泻、腹痛、恶心等不良内脏感觉相结合，从而对糖精溶液产生强烈的厌恶反应.
　　3.2内源性阿片样物质对CTA的影响内源性阿片样物质包括阿片肽以及非肽类吗啡样物质，是一类重要的神经递质，通过各种类型阿片受体对神经、学习记忆等生理活动发挥重要的调节作用.纳洛酮化学结构类似吗啡，但无镇痛作用、无成瘾性，是阿片受体的全能特异性拮抗剂［4］. 本实验结果显示，CTA建立前40 min腹腔注射纳洛酮的大鼠在CTA建立后前8 d中，每天在20 min内摄取糖精溶液的量均少于正常CTA建立组.表明CTA建立前40 min腹腔注射纳洛酮加强了大鼠对于作为条件刺激（conditioned stimulus， CS）的糖精溶液的厌恶，促进了CTA的形成.提示内源性阿片样物质可能参与了CTA形成过程的调制作用. 阿片受体存在于中枢味觉传导路，如孤束核、丘脑味觉区等并且广泛分布于下丘脑.吗啡可以抑制脑桥味觉区的味觉活动，并且可能减弱味刺激的厌恶性质［5-6］. 吗啡与μ受体的亲和力最高，而低剂量的纳洛酮便可以阻断μ受体，本实验采用较高剂量的纳洛酮完全阻断了内源性吗啡与μ受体的结合，这可能是CTA建立前腹腔注射纳洛酮利于CTA形成的原因之一.
　　近来研究显示［7］，慢性炎性疼痛可影响大鼠海马学习记忆的发育，海马前脑啡肽表达的下调可能是其中的机制之一.此外，脑内一些核团亮脑啡肽的表达在条件性味觉厌恶学习过程中发挥重要作用［8］. 同时内源性脑啡肽在毒品成瘾过程中可能参与对学习记忆的调节［9］. 本实验中，CTA建立前腹腔注射纳洛酮阻断了内源性ENK与δ受体的结合，从ENK对学习和记忆影响的角度分析，有利于CTA的形成和记忆保持.而且研究显示［6］，ENK与情绪反应调节有关，一些脑区内较高水平的ENK表达，可产生精神欣快感.CTA建立前腹腔注射纳洛酮尽管可能并不影响脑内ENK的表达水平，但纳洛酮与δ受体结合，阻碍了ENK与δ受体结合发挥生理功能.相当于使ENK表达水平下降，对糖精溶液味质的喜好性评价降低，从而间接增强了大鼠对于作为CS的糖精溶液的厌恶，有利于CTA的形成和记忆. 本研究发现， CTA建立后第1～6日，CTA建立后20 min腹腔注射纳洛酮的大鼠糖精溶液的摄取量与正常建立组大鼠无显著差异（P&>0.05），但第7日和第8日糖精溶液的摄取量趋于稳定，明显少于CTA建立组大鼠（分别P&<0.05， P&<0.01）.表明CTA建立后20 min，内源性阿片样物质对于CTA形成和记忆的保持过程可能没有太大影响.由于实验条件如腹腔注射纳洛酮的剂量以及施加处理的时间等具有一定局限性，关于CTA建立后一段时间内内源性阿片样物质的作用有待于进一步探索.
【参考文献】
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