分化抑制因子Id1在老年女性乳腺浸润性导管癌中的表达及意义

　　　　　　 作者：张海生 胡建功 刘丽华 李勇

【摘要】 　　目的 探讨老年乳腺浸润性导管癌中分化抑制因子(Id)1的表达及临床意义。方法 采用免疫组化SP法检测10例正常乳腺、60例浸润性导管癌组织中Id1的表达，并分析其与乳腺癌临床病理特征的关系。结果 Id1在老年乳腺浸润性导管癌中的表达率（18.07±11.10）%，较正常乳腺组织中表达率〔（1.39±1.57）%〕显著性增高（P＜0.01）；Id1在Ⅰ、Ⅱ级老年乳腺浸润性导管癌中表达阳性率显著低于Ⅲ级〔分别为（12.55±5.12）%、（16.46±8.88）%和（37.61±6.84）%，P＜0.01）〕；Id1在老年乳腺浸润性导管癌中的表达与ER、PR表达呈负相关（r=-0.529，P＜0.01；r=-0.483，P＜0.01），而与CerbB2表达、患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移无关（P>0.05）。结论 Id1的表达增强可能与老年乳腺浸润性导管癌的发生发展有关，Id1的检测有助于老年乳腺浸润性导管癌的诊断和恶性程度的判断。

【关键词】 分化抑制因子1；老年乳腺浸润性导管癌；免疫组织化

　　在欧美发达国家，乳腺癌的发病率占妇女恶性肿瘤之首〔1〕，在我国大中城市等发达城区，乳腺癌也已经成为危害妇女健康的主要恶性肿瘤，跃居女性恶性肿瘤的首位。研究发现，许多不同来源的肿瘤细胞中分化抑制因子（Id）过高表达〔2〕。Id1蛋白是Id类蛋白的一种，是近年来研究最为广泛的Id类蛋白，广泛表达于各种上皮性肿瘤来源的细胞系细胞及肿瘤组织中，不仅参与细胞的增殖与分化，还与肿瘤的侵袭力、肿瘤的血管生成以及临床预后密切相关〔3〕。但还未见在老年乳腺浸润性导管癌中研究的报道。本研究采用免疫组化SP法检测老年乳腺浸润性癌组织及正常乳腺组织中Id1的表达，并分析其与ER、PR、CerbB2表达及临床病理因素的相关性，为乳腺癌的诊治及预后判断提供理论参考依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　10例正常乳腺组织、60例老年乳腺浸润性导管癌组织标本为2009年7～9月承德医学院附属医院手术切除标本，均为女性患者，老年乳腺浸润性导管癌患者平均年龄65.7岁，手术前均未行化疗，病理诊断参照《乳腺及女性生殖器官肿瘤病理学和遗传学》标准〔4〕。所有患者都签署知情同意书，并报医院伦理委员会批准同意。

　　1.2 试剂

　　鼠抗人单克隆Id1抗体购自英国Accam公司，组化试剂 ER、PR、CerbB2兔抗人单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒、DAB及抗体稀释液均购自福州迈新生物技术公司。

　　1.3 方法

　　切取术中冰冻送检病变组织及术后即刻送检根治标本老年乳腺浸润性导管癌癌灶5 cm外正常乳腺组织各一块，于10%中性甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋。集中于石蜡切片机中连续切片5张，切片厚约5 μm，分别行常规HE染色及SP免疫组化染色。免疫组化染色按说明书操作，以PBS代替一抗作为阴性对照，以已知阳性切片作为阳性对照。

　　1.4 结果判定

　　Id1蛋白染色阳性物质位于细胞质中，ER、PR染色阳性物质位于细胞核，CerbB2染色阳性物质位于细胞膜。特定着色部位出现棕黄色颗粒为阳性着色。参照文献标准，各项指标以指数的形式表示染色阳性率；每例标本选取3个高倍视野，计数每个视野中阳性细胞数与细胞总数，计算均值，以百分数表示，阳性指数=（阳性细胞数/细胞总数）×100%。

　　1.5 统计学方法

　　应用SPSS11.0统计软件进行统计分析，率的比较采用方差分析。

　　2 结 果

　　2.1 Id1在老年乳腺浸润性导管癌中的表达

　　Id1在老年乳腺浸润性导管癌中的表达阳性率为(18.07±11.10)%，显著高于正常乳腺组织〔(1.39±1.57)%〕（P＜0.01）。

　　2.2 Id1的表达与乳腺癌临床病理学及其生物学特性的关系

　　组织学分级Ⅲ级的老年乳腺浸润性导管癌中Id1的表达率显著性高于Ⅰ、Ⅱ级（P＜0.01），而Id1表达与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移无关（P>0.05）。Id1在老年乳腺浸润性导管癌中的表达与ER、PR表达呈负相关（r=-0.529，P＜0.01；r=-0.483，P＜0.01）；而与CerbB2表达无关(r=0.129，P=0.039。见表1。 表1 乳腺癌组织中Id1表达与临床病理特征的关系(略)

　　3 讨 论

　　Id蛋白属于螺旋环螺旋（helixloophelix，HLH）蛋白，能与许多HLH结合形成无功能活性的异二聚体，使其不能与DNA上的Ebox结合而抑制一些重要的分化基因的转录，因而被称为分化抑制因子。自1990 年克隆出Id(包括Id1，Id2，Id3，Id4) 以来，已经证实许多不同来源的肿瘤细胞中Id 蛋白过高表达〔5～7〕。最近的研究证实，胚胎早期细胞与分化调控关系密切的分化抑制蛋白（Id蛋白）类家族在肿瘤的发生、侵袭、肿瘤新生血管生成等方面起重要的作用〔8〕。在乳腺癌的研究上，发现Id1在乳腺上皮细胞生理功能的调节以及人类乳腺癌细胞浸润和侵袭中发挥着相当重要的作用〔9〕。Id1可能通过潜在抑制一种或多种的bHLH蛋白使得乳腺上皮细胞对促进分化的信号变得不敏感，但可接受促进生长的信号，从而促使乳腺上皮细胞增生和永生化〔10〕。

　　本研究发现，在正常乳腺中Id1表达微弱或无表达，在老年乳腺浸润性导管癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中表达逐渐增强，在Ⅲ级中阳性率最高，显著高于Ⅰ、Ⅱ级。表明Id1表达与浸润性导管癌病理组织学分级明显相关，病理组织学分级越高、临床恶性程度高的乳腺癌Id1的表达越高。Id1蛋白可以通过与bHLH蛋白结合竞争性抑制bHLH二聚体的形成，使之不能与CKI基因的增强子序列Ebox结合，从而使CKI基因表达下调，细胞进入S期，影响细胞的分化和增殖功能。体外研究亦发现一些乳腺癌细胞Id1表达失调。Perk〔11〕等研究发现，Id1高表达与上皮性肿瘤的低分化和高侵袭相关，并与预后不良有关。因此，Id1的检测可作为有价值的乳腺癌发生和预后判断的指标。

　　本研究通过同时检测ER、PR的表达并与Id1表达结果相比较，发现Id1的表达与ER、PR表达呈负相关，而与CerbB2表达、患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移无关。Lin〔12〕应用低分化、高侵袭性的人类乳腺癌细胞进行体外研究表明，低分化、高侵袭性的人类乳腺癌细胞Id1表达失调，高表达Id1，导致肿瘤细胞增殖与凋亡失衡，发生异常增殖，促进乳腺癌发生发展，并降低其对性激素的敏感性，提示Id1高表达不仅可增强癌细胞的增殖及侵袭能力，促进乳腺癌进展，还可降低其对性激素的敏感性〔12〕，推测其高表达在浸润性导管癌激素依赖型转变为非激素依赖型中起一定的作用。

　　综上所述，检测Id1蛋白表达对老年乳腺浸润性导管癌有重要价值，Id1可能为乳腺癌的靶向治疗提供新的靶点。实际工作中，联合检测包括Id1在内的各种生物学因子表达，并将结果与其他临床病理指标相结合，有助于更加准确推测患者预后，筛选高危患者，为临床治疗提供帮助。

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