作者：张海宁，孟冰，孟瑶，何雯，夏震，赵忠辉，姚远，郑莉，闵冬雨，谷淑玲
【摘要】 目的 研究氧化苦参碱(OMT)与阿司匹林(ASA)联合应用对小鼠急性脑组织缺血的保护作用。方法 70只小鼠随机分为7组(每组10只)：①模型组;②小剂量ASA组(ASA 20 mg·kg-1);③大剂量ASA组(ASA 80 mg·kg-1);④小剂量OMT组(OMT 50 mg·kg-1);⑤大剂量OMT组(OMT 200 mg·kg-1);⑥ASA +OMT小剂量合用组(ASA 20 mg·kg-1，OMT 50 mg·kg-1);⑦尼莫地平组(尼莫地平20 mg·kg-1)。小鼠脑缺血前各药物组分别给予上述药物灌胃6天，每天1次;模型组给予同体积生理盐水连续灌胃6天，每天1次。末次给药1 h后采用断头法制备小鼠急性全脑缺血模型。观察小鼠的喘息次数和喘息维持时间，取小鼠脑组织测定丙二醛(MDA)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果 与模型组比较，OMT和ASA大剂量组及尼莫地平组小鼠断头后喘息次数增加(P<0.05或P<0.01);OMT大剂量组及尼莫地平组小鼠断头后喘息维持时间延长(P<0.05或P<0.01);OMT与ASA小剂量合用组小鼠断头后喘息次数明显增加、喘息维持时间明显延长(P<0.01)。 与模型组比较，OMT大剂量组和尼莫地平组脑组织MDA含量降低(P<0.01);ASA大剂量组和尼莫地平组LDH活性升高(P<0.05);OMT与ASA小剂量合用组MDA含量显著降低、LDH活性显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论 氧化苦参碱与阿司匹林合用较各自单用对小鼠急性脑缺血有明显的保护作用，其作用可能与其抗氧自由基有关。
【关键词】 脑缺血;氧化苦参碱;阿司匹林;保护作用;小鼠
氧化苦参碱(oxymatrine， OMT ) 是从豆科植物苦参、苦豆子等中分离出来的生物碱，属于四环的喹嗪啶类。OMT的药理作用包括抗肝炎病毒、抗心律失常、抗癫疒间、抗肝肾和心脏纤维化、抗肿瘤[1-10]等，但对脑缺血的保护作用研究不多。本课题小组的先期研究表明OMT对大鼠和小鼠的脑缺血有保护作用。阿司匹林(aspirin， ASA)的药理作用包括解热镇痛、抗风湿、影响血小板功能等作用，在临床上治疗范围广，但是剂量较大，引起的不良反应较多，使其临床应用受到了限制。本研究通过小鼠急性脑缺血损伤模型，观察小剂量ASA与OMT联合用药对脑缺血是否有保护作用。
1 材料和方法
1.1 实验动物 70只小鼠，雌雄各半，体重18～20 g，由徐州医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SYXK(苏) 20032003。
1.2 药品与试剂 OMT(陕西昂盛生物医药科技有限公司，含量98%，批号：2007011)，实验时以生理盐水配制成所需浓度使用。ASA(南京白敬宇制药有限责任公司)。尼莫地平(山东新华制药股份有限公司)。乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。丙二醛(MDA)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。752型紫外光栅分光光度计(上海第三分析仪器厂)，高速离心机(珠海黑马医学仪器有限公司)，HH-42快速恒温数显水箱(常州国华电器有限公司)。
1.3 实验分组和给药方法 70只小鼠随机分为7组(每组10只): ①模型组;②小剂量ASA组(ASA 20 mg·kg-1);③大剂量ASA组(ASA 80 mg·kg-1);④小剂量OMT组(OMT 50 mg·kg-1);⑤大剂量OMT组(OMT 200 mg·kg-1);⑥ASA +OMT小剂量合用组(ASA 20 mg·kg-1，OMT 50 mg·kg-1);⑦尼莫地平组(尼莫地平20 mg·kg-1)。各给药组给予不同药物连续灌胃6天，每天1次;模型组给予同体积生理盐水连续灌胃6天，每天1次。
1. 4 小鼠急性脑缺血模型制备和观察指标 末次给药1 h后，各组采用断头法制备小鼠的急性脑缺血模型，即在小鼠的两耳根后面断头，立即记录小鼠的喘息次数和喘息维持时间。取缺血脑组织，制成10%匀浆液，按试剂盒操作步骤测定脑组织MDA和LDH活性。
1.5 统计学处理 所得计量资料均以±s表示，采用SPSS 13.0 软件对数据各组之间进行Dunnett方法分析。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 OMT与ASA合用对小鼠断头后喘息次数和喘息维持时间的影响 与模型组比较，OMT和ASA小剂量组小鼠断头后喘息次数和喘息维持时间差异均无显著性(P>0.05);OMT和ASA大剂量组及尼莫地平组小鼠断头后喘息次数明显增加(P<0.05或P<0.01);OMT大剂量组及尼莫地平组小鼠断头后喘息维持时间延长(P<0.05或P<0.01);而OMT与ASA小剂量合用组小鼠断头后喘息次数明显增加、喘息维持时间明显延长(P<0.01)。见表1。表1 OMT与ASA合用对小鼠断头后喘息次数和喘息维持时间的影响与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01
2.2 OMT与ASA合用对缺血脑组织MDA含量和LDH活性的影响 与模型组比较，OMT和ASA小剂量组脑组织MDA含量和LDH活性差异均无显著性(P>0.05);OMT大剂量组和尼莫地平组脑组织MDA含量降低(P<0.01);ASA大剂量组和尼莫地平组LDH活性升高(P<0.05);而OMT与ASA小剂量合用组MDA含量显著降低、LDH活性显著增加(P<0.05或P<0.01)。见表2。表2 OMT与ASA合用对小鼠脑组织MDA含量和LDH活性的影响与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01
3 讨 论
本实验采用小鼠急性脑缺血模型即全脑的急性缺血模型，在小鼠急性脑缺血实验中，脑血液供应中断，但脑中原有的血液和营养物质尚能使脑功能维持一段时间。从实验结果可以看出，OMT和ASA的高剂量组小鼠的存活时间有所延长，而且脑组织LDH活性增强、MDA含量降低。而OMT和ASA的低剂量组与模型组比较无明显差异，OMT与ASA小剂量合用组显著延长了小鼠的喘息时间和呼吸次数，进一步证实OMT与ASA合用产生协同作用，能使脑耗氧减少，从而对断头小鼠脑缺血产生保护作用，其作用与尼莫地平组相当。MDA 作为氧自由基与生物膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化的代谢产物，其含量的变化间接反映了组织中氧自由基含量的变化，因此可通过测定MDA 含量来评价脑组织中氧自由基的水平和脂质过氧化的强弱。本实验结果表明，OMT与ASA小剂量合用能降低小鼠脑缺血损伤后脑组织MDA 含量，提示OMT与ASA小剂量合用的作用与其抗自由基过氧化有关。LDH是脑缺血后脑组织受损时最敏感的酶，监测LDH的活性变化可以了解脑缺血的范围和轻重程度。本实验结果显示，小剂量OMT与ASA合用在小鼠脑缺血后，能显著升高脑组织中LDH活性，提示脑缺血损伤程度减轻，对脑缺血有保护作用。
参考文献
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