大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株的检出率与耐药性分析

　　　　　　 作者：周雨， 程曦， 彭燕， 毛雁飞

【摘要】 目的 了解重庆地区2种常见肠杆菌科细菌(大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌)产ESBLs菌株的检出率及细菌耐药性分析。方法 用梅里埃ATB Expression进行菌种鉴定及药敏实验，用纸片扩散法检测ESBLs，并用梅里埃ATBplus软件系统作统计学分析。结果 大肠埃希菌ESBLs阳性检出率为65.41%(121/185)，肺炎克雷伯菌ESBLs阳性检出率为40.87%(47/115)。大肠埃希菌对美洛培南和亚胺培南耐药率为零;对头孢菌素类耐药率呈上升趋势;对青霉素类耐药率大于95%，加酶抑制剂后耐药率明显降低;肺炎克雷伯菌耐药谱与大肠埃希菌相似，但其耐药率略低。结论 医院及时监测产 ESBLs 菌的发生率及其耐药趋势以指导临床用药至关重要。

【关键词】 超广谱β内酰胺酶(ESBLs); 抗生素; 大肠埃希菌; 肺炎克雷伯菌

　　　　 【Abstract】 Objective To investigate detection rate of two common strains of Enterobacteriaceae (Escherichia.coli and Klebsiella.pneumoniae) producing extendedspectrum βlactamases(ESBLs) and to analyze their drugresistance.Methods BiologicalMerieux ATB Expression was taken for strains identification and antimicrobial susceptibility test.The detection of ESBLs was confirmed by disk diffusion method，and the results were statistically analyzed by Merieux ATBplus software.Results A total of 121 strains were ESBLs positive out of 185 strains of E.Coli，and the positive rate was 65.41%;a total of 47 strains were ESBLs positive out of 115 strains of Klebsiella.pneumoniae，and the positive rate was 40.87%.The resistant rates to meropenem and imipenem in Escherichia.coli were zero while the resistant rates to cephalosporins had a rising tendency.The resistant rate to penicilins was higher than 95%，but it depressed obviously after enzyme inhibitor was added.The drugresistant spectrum of Klebsiella.pneumoniae was similar to Escherichia.Coli although its resistant rate in general was a little lower than that of E.Coli.Conclusion Monitoring the incidence of ESBLsproducing strains and their drugresistant trend is essential to guide clinical administration.【Key words】 extendedspectrum βlactamases(ESBLs); antimicrobial; Escherichia coli; Klebsiella pneumoniae

　　肠杆菌科细菌在临床实验室分离菌株中数量占50%左右，也是引起多种疾病感染的常见病原菌[1]。随着抗菌药物在临床的广泛使用，特别是三代头孢菌素在临床广泛使用，大量耐药菌株不断出现，如:产ESBLs菌株、产AmpC菌株，这给临床用药带来诸多困难。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌作为肠杆菌科两种最为常见的细菌，其抗菌药物的耐药性分析研究对临床合理、正确使用抗菌药物具有重要意义。本研究对我院2007年12月～2008年11月临床各类标本分离获得的185例大肠埃希菌和115例肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测并对其2种细菌耐药性进行分析。以作为临床正确选择与合理使用抗菌药物的参考依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 菌株来源 来自2007年12月～2008年11月中国人民解放军324医院临床标本:血、尿、痰、大便、穿刺液、分泌物、胆汁中分离的纯培养细菌。

　　1.1.2 试剂 培养基(哥伦比亚血平板、HIN巧克力琼脂平板、无抑制剂巧克力琼脂平板、SS琼脂平板)购于重庆市庞通医疗器械有限公司;鉴定及药敏板条选自法国生物梅里埃制品有限公司。

　　1.1.3 质控菌株 大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC70060、铜绿假单胞菌ATCC27853及金黄色葡萄球菌ATCC25923均购自重庆市临床检验中心。

　　1.2 方法

　　1.2.1 细菌鉴定及药敏实验 临床标本采集、分离培养严格按照《全国临床检验操作规程》第3版进行[2]。获得纯培养细菌后经革兰染色、氧化酶实验初筛，再用法国生物梅里埃ID32E，ATB G5作菌种鉴定及药敏实验。

　　1.2.2 ESBLs确证实验 按NCCLS判断标准。头孢他啶和头孢噻肟中任何一种药物，加克拉维酸与相应不加克拉维酸后抑菌环直径相比，增大5 mm以上(包括5 mm)时判断为ESBLs阳性。

　　1.2.3 统计分析 细菌耐药菌谱及分析采用梅里埃ATBplus软件系统，肠杆菌科各细菌临床分离率用构成比进行比较。

　　2 结果

　　2.1 ESBLs菌株检出率本院2007年12月～2008年11月临床分离的185例大肠埃希菌和115例肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株的检出率分别为65.41%和40.87%.

　　2.2 细菌构成比对2007年12月～2008年11月我院临床分离的肠杆菌科细菌构成比进行分析显示，分离率最高的为大肠埃希菌，其次为肺炎克雷伯菌，见表1.

　　2.3 大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌抗菌素耐药率大肠埃希菌对美洛培南和亚胺培南耐药率为零;对β内酰胺酶抑制剂的复合制剂耐药率相对较低;对头孢菌素类耐药率呈上升趋势;肺炎克雷伯菌耐药谱与大肠埃希菌相似，但其耐药率略低(见表2)。表1 2007年12月～2008年11月临床分离的肠杆菌科细菌构成比表2 185例大肠埃希菌和115例肺炎克雷伯菌的耐药率分析

　　3 讨论

　　超广变谱β内酰胺酶(ESBLs)是由质粒介导的能赋于细菌对三代头孢菌素类、单酰胺类及青霉素类耐药性的一类酶[3]，由于ESBLs的编码基因位于质粒上，可通过接合、转化和转导使基因在细菌间传递，造成严重的院内交叉感染和院外扩散。此酶主要由肠杆菌科细菌产生，尤其是大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌。我院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs率分别占65.41%和40.87%，奇异变形杆菌未检测到产ESBLs菌株。肺炎克雷伯菌产ESBLs率与国内报道的同种菌产ESBLs率41.4%基本一致[4];大肠埃希菌产ESBLs率高于王世恒等报道的56.7%和任志强报道的60.2%[5，6]。这种差异可能与各地区、各医院使用头孢菌素药物的种类和数量有关，也可能与我院患者病情重、住院时间长、大量使用气管插管等因素相关。由表1可见，肠杆菌科细菌中，我院临床菌株分离率最高的两位是大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。大肠埃希菌是最常见的临床分离菌，常引起各种肠内外感染，也是腹泻和泌尿道感染的主要病原菌，主要在临床尿、大便标本中检测到，其次在痰、血标本中;肺炎克雷伯菌是医院感染中最重要的条件致病菌，可引起典型的原发性肺炎，在痰标本中检出率较高，也易引起肠炎、脑膜炎、菌血症等。故临床上应加强对这两种菌的检测，尤其是对其耐药酶的检测。由表2可见，大肠埃希菌目前对碳青霉烯类抗菌药物耐药率为零，对β内酰胺酶抑制剂的复合制剂耐药率相对较低，对头孢噻吩、头孢呋辛、头孢他啶、头孢吡肟耐药率分别是:89%、77%、64%、66%.对阿米卡星的耐药率是6%，对环丙沙星的耐药率是66%;肺炎克雷伯菌除对碳青霉烯类抗菌药物耐药率为1%、对阿米卡星和阿莫西林类耐药率略高外，其余的耐药谱与大肠埃希菌相似，但较大肠埃希菌略低。感染产ESBLs细菌的危险因素为长期使用三代头孢菌素及免疫抑制剂、ICU患者、大手术患者等，同时也可通过医务人员的手在患者间传播[79]。因此，临床上开展ESBLs的常规检测是不可或缺的。肠杆菌科细菌不仅是医院感染的常见菌，而且已对临床常用抗菌药物有一定的耐药性，其相关耐药性也逐年上升，新的耐药菌株也在不断呈现。因此，临床医生必须掌握细菌耐药性的变迁，在经验用药前，应留取培养标本，以便提高检测致病菌的阳性率。细菌耐药酶的检测结果和药敏实验结果是临床针对感染性疾病选用什么抗菌药物的依据，也是减少耐药菌株产生的前提。在用药过程中，应定期进行细菌耐药性监测，以便及时调整用药，尽早尽快地治愈患者。

参考文献

1] 张卓然，倪语星.临床微生物学和微生物检验[M].第3版.北京：人民卫生出版社，2004：100.

　　[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].南京：东南大学出版社，2006:801821.

　　[3] Sanders CC，Sanders WEJr.blactama resistance in Gram negative bacteria;global trands and clinical impact[J].Clinical Infect，1992，15(5):824.

　　[4] 尤佳女，杨叶青.肺炎克雷伯菌的检出率及其耐药[J].中国微生态学杂志，2006，18(6):482483.

　　[5] 王世恒，钱小华，等.大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌产超β—内酰胺酶菌株的耐药分析[J].中国民康医学杂志，2008，22(20):2621.

　　[6] 任志强，刘丽君，郭利民，等.产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌耐药性分析[J].中南药学，2008，6(5):630632.

　　[7] 吕火祥，汤雄鹰，许立，等.β内酰胺酶抑复合抗菌药物的使用量与产ESBLs细菌分离率关系研究[J].中华医院感染学杂志.2004，14(20):130132.

　　[8] 李秀峰，王霞，方萍.肠杆菌科产超广谱β内酰胺酶的检测及耐药分析[J].宁夏医学院学报，2007，3(29):322.

　　[9] Rooney PJ，O'Leary MC，Livermore DM，et al.Nursing homes as a reservoir of extendedspectrum {beta}lactamase (ESBL)producing ciprofloxacinresistant Escherichia coli[J].J Antimicrob Chemother，2009 Jun 23.[Epub ahead of print].doi:10.3969/j.issn.16742257.2009.03.011