酶法提取杜仲多糖的工艺研究

　　　　　　作者：刘晓河 张海燕 梁惠花

【摘要】 目的：确定杜仲中多糖的酶法提取工艺。方法：用正交试验的方法分别研究果胶酶、中性蛋白酶和纤维素酶对杜仲多糖提取率的影响。结果：果胶酶增加多糖提取率效果最为显著，其最佳提取条件是：酶加量0.10mg/L，酶处理温度50℃，酶处理时间3h。其次是中性蛋白酶，纤维素酶的效果最差。结论：果胶酶可明显增加杜仲多糖的提取率。

【关键词】 杜仲；杜仲多糖；聚半乳糖醛酸酶；纤维素酶；正交试验

　　【ABSTRACT】 Objective:To study the effect of extraction rate from Eucommia ulmoides oliv polysaccharide by enzyme.Methods:It was investigated by orthogonal experiment design L9(34) on the influence of the extraction rate of Eucommia ulmoides oliv polysaccharide、neutral protein enzyme and cellulose enzyme.Results:The effectiveness of enzyme was the best.The optimal condition of extraction was when enzyme was as much as 10%，and 50℃ heat preservation up to 1h.The second was neutral protein enzyme，The cellulose enzyme was the last.Conclusion:The enzyme can increase the extraction rate of Eucommia ulmoides oliv polysaccharide.

　　【KEY WORDS】 Eucommia Ulmoides Oliv，EUCOMMAN，Polygalacturonase，Cellulase，Orthogonal Test

　　杜仲（Eucommia ulmoides oliv）是我国名贵的滋补药材，具有降血压、降血脂、降血糖、抗菌消炎、抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗癌、抗肿瘤等作用；含有苯丙素类、环烯醚萜类、黄酮类、多糖类等多种物质，杜仲多糖是一类天然的免疫增强剂，通过提高机体免疫力起到抗癌、抗肿瘤作用[1]。目前提取杜仲多糖主要是用水提醇沉法[2]和酸碱提取法，用水提取法时，多糖的得率较低，后处理过程较为繁琐，而酸碱提取法又容易使多糖水解，破坏其活性结构，有关酶法提取杜仲多糖的研究报道少见。本文参照有关文献[3，4]，探讨了果胶酶、中性蛋白酶和纤维素酶提取杜仲多糖的最佳条件，为杜仲的进一步开发提供实验基础。

　　1 材料与方法

　　1.1 仪器与试剂

　　1.1.1 仪器 UV754紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；XJ80离心机（江苏医疗器械厂）；RE52A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。

　　1.1.2 试剂 杜仲购于本院中医门诊部（于硅胶干燥器中干燥两天后备用）；果胶酶、中性蛋白酶、纤维素酶（Fluka公司产品）；其余试剂均为国产分析纯。

　　1.2 方法

　　1.2.1 多糖的提取方法 选取酶加量、酶处理温度和酶处理时间三个因素。采用L9(34)正交设计表，以多糖的提取率为指标，作正交试验。正交试验因素水平见表1。表1 L9(34)正交试验因素水平表

　　因素水平酶加量

　　（mg/L）酶处理温度（℃）果胶酶中性蛋白酶纤维素酶酶处理时间

　　（h）10.03455535120.07506040230.105565453

　　称取杜仲0.5g于烧杯中，加入50倍量水，沸水浸提2h，离心取上清液，浓缩，定容后测定多糖含量，以该提取率为100%作对照，另称取杜仲0.5g于烧杯中，加入10倍量水，按正交试验设计，加入酶。酶解后，再加入20倍水，沸水浸提2h，离心取上清液，定容后测定多糖含量，每个提取平行做3次。

　　1.2.2 多糖测定方法 采用苯酚—硫酸法测定总糖含量，采用3，5二硝基水杨酸法测定还原性糖含量。总糖含量减去还原糖含量即为多糖含量。

　　2009年6月刘晓河等：酶法提取杜仲多糖的工艺研究第3期2009年6月河北北方学院学报（医学版）第3期表2 果胶酶提取杜仲多糖的正交试验结果分析表3 中性蛋白酶提取杜仲多糖的正交试验结果分析

2 结果

　　按1.2.1多糖的提取方法进行提取，再按1.2.2多糖的测定方法测定多糖含量。以不加酶时多糖的提取率为100%作对照。加入酶后增加的多糖提取率见表2、表3和表4。表4 纤维素酶提取杜仲多糖的正交试验结果分析

　　酶法提取杜仲多糖的试验结果表明，果胶酶增加多糖提取率的效果最明显，最高处理组比对照组高4.1倍(见表2第8组），纤维素酶效果最差。三种酶提取杜仲多糖的关键因子与最佳提取条件见表5。表5 三种酶提取杜仲多糖的关键因子与最佳提取条件

　　3 讨论

　　酶法可明显增加杜仲多糖的提取率，这可能是因为杜仲中除了含有多糖外，还含有纤维素、杜仲胶、蛋白质等物质。这些物质酶解后，有利于多糖类物质的释放，其中果胶酶增加杜仲多糖提取率的效果最为显著，而纤维素酶的效果最差。这主要是因为纤维素酶虽然提高了总糖的提取率，同时，使杜仲中的纤维素水解，更增加了还原糖的浸提率，导致多糖的提取率下降。

参考文献

1 管淑玉，苏薇薇．杜仲化学成分与药理研究进展[J]．中药材，2003，26（2）：124129

2 刘军海，任惠兰，段玉兰，等．杜仲叶多糖提取工艺研究[J]．食品科学，2007，28（7）：264267

3 竺巧玲，杨文鸽，孙翠玲，等．酶法提取龙须菜多糖工艺条件的研究[J]．食品工业科技，2007，28（6）：150152

4 李朝阳，刘魁，韩忠宵，等．大蒜多糖的酶法提取及抗氧化性研究[J]．食品科学，2008，29（1）：117120